實驗一上 普通光學顯微鏡下的細胞和細胞器

實驗一普通復式光學顯微鏡下的細胞和細胞器一實驗目的1熟悉普通復式光學顯微鏡的主要結構和基本性能。2觀察各種細胞和細胞器的結構特點。

二實驗原理普通光學顯微鏡從構造上可分為光學、機械和電子三大系統(tǒng)。由物鏡、目鏡、聚光鏡、光源、載物臺和支架等組成。利用光線照明，標本中各點依其光吸收的不同而在明亮的背景中成像。顯微鏡的能力是質(zhì)量和性能的標志。能力包括分辨率、放大率、焦點深度和視場寬度等，其中最重要的是分辨率。普通復式光學顯微鏡技術分辨率是指區(qū)分開兩個質(zhì)點間的最小距離。數(shù)值孔徑（NA，鏡口率）：光線投射到物鏡上的最大開口角度一半的正弦乘上標本與物鏡間介質(zhì)的折射率的乘積。

NA=n?sinα/2n為介質(zhì)的折射率，α為鏡口角。分辨率：能分辨被檢物體細微結構最小間隔的能力。D=0.61λ/NA

λ為波長。數(shù)值孔徑越高，分辨率越高。放大率：最終成像大小與原物體大小的比值?？偡糯蟊稊?shù)＝物鏡的放大倍數(shù)×目鏡的放大倍數(shù)物鏡的鏡口角=AOB光學顯微鏡成像原理機械部分光學部分普通光學顯微鏡結構機械部分主要結構鏡座、鏡柱粗調(diào)節(jié)螺旋和細調(diào)節(jié)螺旋載物臺、推進器和玻片夾物鏡轉(zhuǎn)換器光學部分主要構件光學部分包括照明系統(tǒng)和成像系統(tǒng)光學部分主要構件物鏡低倍鏡（1×~6×，常用的4×、10×）高倍鏡（25×~63×，常用的40×）油鏡（90×、95×、100×

）目鏡（5×、6×、8×、10×

、12×、15×）物鏡側(cè)面符號的含義10/0.30表示放大10倍，數(shù)值口徑為0.3040/0.65表示放大40倍，數(shù)值口徑為0.65100/1.25oil表示放大100倍，數(shù)值口徑為1.25，為油鏡160/0.17表示鏡筒長度和所需蓋玻片的厚度（mm）WD表示工作距離不同物鏡的數(shù)值孔徑與工作距離（10倍目鏡）物鏡放大倍數(shù)（×）總放大倍數(shù)（×）數(shù)值口徑工作距離（mm）4400.1025101000.255.6404000.650.610010001.250.14光學顯微鏡成像原理

光學顯微鏡是利用目鏡和物鏡兩組透鏡系統(tǒng)來放大成像的。A″B″和眼睛的距離為顯微鏡的明視距離，標本AB的向經(jīng)過物鏡（L1）后到A′B′處稱謂一個放大倒立的實像，F(xiàn)1為L1的后焦點，當光線傳到目鏡（L2）時，在A″B″處A′B′被放大成一個直立的虛像，然后傳遞到視網(wǎng)膜上，標本AB就被放大了。人眼看到的是AB被放大后的虛像，其與原樣品的方向相反。觀察的物體AB觀察點目鏡L2中間所成的實像A′B′物鏡L1放大的虛像A″B″光學顯微鏡的使用規(guī)程一、實驗時要把顯微鏡放在座前桌面上稍偏左的位置，鏡座應距桌沿5cm左右。二、打開光源開關，調(diào)節(jié)光強到合適大小。三、轉(zhuǎn)動物鏡轉(zhuǎn)換器，使低倍鏡頭正對載物臺上的通光孔。先把鏡頭調(diào)節(jié)至距載物臺1～2cm左右處，然后用左眼注視目鏡內(nèi)，接著調(diào)節(jié)聚光器的高度，把孔徑光闌調(diào)至最大，使光線通過聚光器入射到鏡筒內(nèi)，這時視野內(nèi)呈明亮的狀態(tài)。四、將所要觀察的玻片放在載物臺上，使玻片中被觀察的部分位于通光孔的正中央，然后用標本夾夾好載玻片。光學顯微鏡的使用規(guī)程五、先用低倍鏡觀察（物鏡4X、10X、目鏡10x）。觀察之前，先轉(zhuǎn)動粗動調(diào)焦手輪，使載物臺上升，物鏡逐漸接近玻片。需要注意，不能使物鏡觸及玻片，以防鏡頭將玻片壓碎。然后，左眼注視目鏡內(nèi)，同時右眼不要閉合（要養(yǎng)成睜開雙眼用顯微鏡進行觀察的習慣，以便在觀察的同時能用右眼看著繪圖），并轉(zhuǎn)動粗動調(diào)焦手輪，使載物臺慢慢下降，不久即可看到玻片中材料的放大物像。六、如果在視野內(nèi)看到的物像不符合實驗要求（物像偏離視野），可慢慢調(diào)節(jié)載物臺移動手柄。調(diào)節(jié)時應注意玻片移動的方向與視野中看到的物像移動的方向正好相反。如果物像不甚清晰，可以調(diào)節(jié)微動調(diào)焦手輪，直至物像清晰為止。光學顯微鏡的使用規(guī)程七、如果進一步使用高倍物鏡觀察，應在轉(zhuǎn)換高倍物鏡之前，把物像中需要放大觀察的部分移至視野中央（將低倍物鏡轉(zhuǎn)換成高倍物鏡觀察時，視野中的物像范圍縮小了很多）。八、在轉(zhuǎn)換高倍物鏡并且看清物像之后，可以根據(jù)需要調(diào)節(jié)孔徑光闌的大小或聚光器的高低，使光線符合要求（一般將低倍物鏡換成高倍物鏡觀察時，視野要稍變暗一些，所以需要調(diào)節(jié)光線強弱）。九、觀察完畢，應先將物鏡鏡頭從通光孔處移開，然后將孔徑光闌調(diào)至最大，再將載物臺緩緩落下，并檢查零件有無損傷（特別要注意檢查物鏡是否沾水沾油，如沾了水或油要用鏡頭紙擦凈），檢查處理完畢后即可裝箱。油鏡的使用

100×物鏡是油浸物鏡。使用前必需在鏡頭與蓋玻片間加浸油。

油鏡的透鏡很小，光線通過玻片與油鏡頭之間的空氣時，因介質(zhì)密度不同，發(fā)生折射或全反射，使射入透鏡的光線減少，物象顯現(xiàn)不清。若在油鏡與載玻片之間加入和玻璃折射率（n=1.52）相近的香柏油（n=1.515），則可減少光線折射，使進入透鏡的光線增多，視野亮度增強，提高分辨率，使物象明亮清晰。

在油鏡觀察結束后，切記將鏡頭和其他沾有油污的部件清擦凈。光學顯微鏡的維護一、必須熟練掌握并嚴格執(zhí)行使用規(guī)程。二、取送顯微鏡時一定要一手握住彎臂，另一手托住底座。顯微鏡不能傾斜，以免目鏡從鏡筒上端滑出。取送顯微鏡時要輕拿輕放。三、觀察時，不能隨便移動顯微鏡的位置。四、凡是顯微鏡的光學部分，只能用特殊的擦鏡頭紙擦拭，不能亂用他物擦拭，更不能用手指觸摸透鏡，以免汗液玷污透鏡。五、保持顯微鏡的干燥、清潔，避免灰塵、水及化學試劑的玷污。六、轉(zhuǎn)換物鏡鏡頭時，不要搬動物鏡鏡頭，只能轉(zhuǎn)動轉(zhuǎn)換器。光學顯微鏡的維護七、切勿隨意轉(zhuǎn)動調(diào)焦手輪。使用微動調(diào)焦旋鈕時，用力要輕，轉(zhuǎn)動要慢，轉(zhuǎn)不動時不要硬轉(zhuǎn)。八、不得任意拆卸顯微鏡上的零件，嚴禁隨意拆卸物鏡鏡頭，以免損傷轉(zhuǎn)換器螺口，或螺口松動后使低高倍物鏡轉(zhuǎn)換時不齊焦。九、使用高倍物鏡時，勿用粗動調(diào)焦手輪調(diào)節(jié)焦距，以免移動距離過大，損傷物鏡和玻片。十、用畢送還前，必須檢查物鏡鏡頭上是否沾有水或試劑，如有則要擦拭干凈，并且要把載物臺擦拭干凈。三實驗儀器、材料和試劑1儀器、用具：普通復式光學顯微鏡等2材料：各種組織、細胞和細胞器的裝片四實驗內(nèi)容與方法1普通復式光學顯微鏡的基本構造2普通復式光學顯微鏡的性能和質(zhì)量3普通復式光學顯微鏡的使用方法4各種組織、細胞和細胞器的觀察和比較動物細胞形態(tài)結構觀察雞血細胞動物神經(jīng)細胞動物平滑肌細胞雞血細胞

重點在高倍鏡下和油鏡下觀察紅細胞、嗜中性白細胞和血栓細胞（血小板）的形態(tài)結構特點。

紅細胞——為卵圓形細胞，有胞核，呈橢圓形，內(nèi)有染色質(zhì)塊，胞質(zhì)染成淡紅色。

嗜中性白細胞——由于顆粒具有多種嗜色性，故又稱為異嗜性粒細胞，細胞較大，胞質(zhì)內(nèi)含棒狀或紡錘形的紅色顆粒。胞質(zhì)色淡，胞核分葉情況因成熟程度而有不同，有的不分葉，有的分葉，染成淡紫色。

血栓細胞——是雞血液內(nèi)最小的細胞，成紡錘形。兩端鈍圓，常集聚成群，胞質(zhì)染成淺藍色，核呈卵圓形。注意血栓細胞與紅細胞的區(qū)別，主要是體積較小，核較大，染成玫瑰紫色。雞血細胞雞血細胞低倍鏡下觀察雞血細胞高倍鏡下觀察雞血細胞油鏡下觀察血細胞涂片(示核形態(tài)差異)

正常血象1.淋巴細胞2.中性桿狀核粒細胞3.中性分葉核粒細胞動物神經(jīng)細胞脊髓涂片

先用低倍鏡觀察,再用高倍鏡和油鏡觀察脊髓涂片中的神經(jīng)元（即神經(jīng)細胞），可找到染色深且具有多個突起的脊髓前角運動神經(jīng)元。在其胞體內(nèi)有染色較淺的圓形的細胞核，核的中央有一個染成深色的核仁。神經(jīng)細胞動物平滑肌細胞分離片

先用低倍鏡再用高倍鏡和油鏡下觀察平滑肌分離片，可見染成紫紅色呈紡錘形的肌細胞，細胞核為橢圓形，位于細胞的中央，著色很深，在細胞質(zhì)中有淡紅的肌原纖維。略旋動細調(diào)焦螺旋，仔細觀察。平滑肌與組織塊橫紋肌細胞（示多核現(xiàn)象）細胞器觀察1.線粒體的觀察線粒體有雙層膜結構，蛋白、磷脂含量很高，有大量羧基和磷酸基等陰離子基團，含陽離子的鐵蘇木精易與其結合，使線粒體顯示蘭色反應。觀察方法1）低倍鏡觀察：可見許多被染成深蘭色的細胞，選擇顏色清晰，密集程度較低的區(qū)域；2）轉(zhuǎn)換高倍鏡：細胞核為1～2圓形的不著色的區(qū)域（有深蘭色的核仁），核周圍分布有許多深蘭色顆?；驐U狀小體，即線粒體。

（示線粒體）線粒體油鏡下觀察到的線粒體（深藍色顆粒狀或桿狀）線粒體（紅色）2.高爾基復合體的觀察

高爾基復合體具有還原能力，與硝酸銀作用后，使硝酸銀還原，并呈現(xiàn)棕黑色沉淀反應。因而可顯示高爾基復合體的形態(tài)和位置。觀察方法1）低倍鏡觀察：尋找圓形或橢圓形的被染成黃色或淡黃色的細胞；2）轉(zhuǎn)換高倍鏡：中央透亮區(qū)為核所在位置，核周圍棕褐色扭曲呈線狀、顆粒狀結構即為高爾基復合體。棕褐色或黑褐色、扭曲線狀或顆粒狀（低倍鏡）高爾基體棕褐色或黑褐色、扭曲線狀或顆粒狀（高倍鏡）高爾基體（綠色）肝細胞石蠟切片（示多核和多核仁）蛙卵巢細胞馬蛔蟲卵巢石蠟切片（示中心體）五作業(yè)

繪出動、