液相色譜柱該如何清洗 液相色譜維護(hù)和修理保養(yǎng)

第第頁(yè)液相色譜柱該如何清洗液相色譜維護(hù)和修理保養(yǎng)液相色譜柱，是一種用于液體色譜分析儀器

1、反相色譜柱

分別用甲醇:水=90:10，純甲醇（HPLC級(jí)），異丙醇（HPLC級(jí)），二氯甲烷（HPLC級(jí)）等溶劑作為流動(dòng)相，依次沖洗，每種流動(dòng)相流經(jīng)色譜柱不少于20倍的色譜柱體積.然后再以相反的次序沖洗。

2、正相色譜柱

分別用正己烷（HPLC級(jí)），異丙醇（HPLC級(jí)），二氯甲烷（HPLC級(jí)），甲醇（HPLC級(jí)）等溶劑做流動(dòng)相，順次沖洗，每種流動(dòng)相流經(jīng)色譜柱不少于20倍的柱體積（異丙醇粘度大，可降低流速，避開(kāi)壓力過(guò)高）.注意使用溶劑的次序不要顛倒，用甲醇沖洗完后，再以相反的次序沖洗至正己烷，全部的流動(dòng)相必需嚴(yán)格脫水。

3、離子交換色譜柱

長(zhǎng)時(shí)間在緩沖溶液中使用和進(jìn)樣，將導(dǎo)致色譜柱離子交換本領(lǐng)下降，用稀酸緩沖溶液沖洗可以使陽(yáng)離子柱再生，反之，用稀堿緩沖溶液沖洗可以使陰離子柱再生。

另外，還可以選擇能溶解柱內(nèi)污染物的溶劑為流動(dòng)相做正方向和反方向沖洗。但再生后的色譜柱柱效是不可能恢復(fù)到新柱的水平的.假如柱子裝反了，可以調(diào)回來(lái)，但可能會(huì)造成柱內(nèi)擔(dān)體塌陷.在不得已的情況下盡量不要反裝色譜柱。

一般來(lái)說(shuō)，全部的清洗方法都有仿佛的形式。所用的溶劑都是隨溶劑強(qiáng)度加添，常常后一個(gè)溶劑是特別疏水的（如醋酸乙酯甚至是烴）可以用來(lái)溶解非極性物質(zhì)如脂質(zhì)和油類(lèi)。我們必需保證一系列溶劑中每個(gè)溶劑都能與下一個(gè)溶劑互混。清洗過(guò)程要結(jié)束時(shí)，必需借助一個(gè)中等強(qiáng)度能互混的溶劑而回到原始溶劑系統(tǒng)。例如，異丙醇是一個(gè)特別好的作為中心步驟的溶劑，由于它能與正己烷或二氯甲烷互溶又能與水相溶劑互溶。但是異丙醇粘度特別大，必需確保較低的流速以免使泵壓過(guò)高。當(dāng)然，假如使用紫外檢測(cè)器的話(huà)，避開(kāi)溶劑在紫外區(qū)域有吸取，要不然需使用大量的溶劑沖洗才能使基線(xiàn)平穩(wěn)。

對(duì)于典型的硅膠鍵合柱來(lái)說(shuō)假如沒(méi)有緩沖溶液的話(huà)推舉使用以下溶劑系列：

100%甲醇

100%乙晴

75%乙晴—25%異丙醇

100%異丙醇

100%二氯甲烷

100%正己烷

用二氯甲烷或正己烷以后，由于溶劑相容性柱子必需用異丙醇沖洗后才能用原來(lái)的水相溶劑。每種溶劑至少?zèng)_洗10個(gè)柱體積。如250mm

4.6mmHPLC分析柱，分析者可以用1～2ml/min的流速來(lái)沖洗，要回復(fù)原來(lái)的溶劑體系，不需要每一步都沖洗，可以跳過(guò)中心步驟。中心步驟推舉使用異丙醇，然后用沒(méi)有緩沖的流動(dòng)相，后回復(fù)起始流動(dòng)相配置。4氫呋喃是另外一種比較受歡迎的去除污染的溶劑。假如使用者懷疑柱子被嚴(yán)重污染，可以二甲基亞砜（DMSO）或者二甲基甲酰銨和水按50：50的比例混合用低于0.5ml/min的流速流過(guò)色譜柱。成功再生反相柱子是一個(gè)特別耗時(shí)間的過(guò)程，溶劑沖洗可以利用梯度系統(tǒng)過(guò)夜操作。

液相色譜儀原理與應(yīng)用液相色譜儀的應(yīng)用，可用于高沸點(diǎn)、熱穩(wěn)定性差以及具有生理活性物質(zhì)的分析。一般來(lái)說(shuō)，沸點(diǎn)在450℃以下，相對(duì)分子質(zhì)量小于450的有機(jī)物可用液相色譜儀分析，但這些物質(zhì)只占有機(jī)物的15%～20%，其余的80%～85%有機(jī)物原則上都可接受高效液相色譜儀分析。

色譜柱的使用和維護(hù)，色譜柱的正確使用和維護(hù)特別緊要，稍有不慎就會(huì)降低柱效、縮短使用壽命甚至損壞。

在色譜操作過(guò)程中，需要注意下列問(wèn)題，以維護(hù)色譜柱。調(diào)整流速太快，避開(kāi)壓力和溫度的急劇變化及任何機(jī)械震動(dòng)。溫度的驀地變化或者使色譜柱從高處掉下都會(huì)影響柱內(nèi)的填充情形；柱壓的驀地上升或降低也會(huì)沖動(dòng)柱內(nèi)填料，因此在調(diào)整流速時(shí)應(yīng)當(dāng)緩慢進(jìn)行，在閥進(jìn)樣時(shí)閥的轉(zhuǎn)動(dòng)不能過(guò)緩。

反沖色譜柱，一般說(shuō)來(lái)色譜柱不能反沖，只有生產(chǎn)者指明該柱可以反沖時(shí)，才可以反沖除去留在柱頭的雜質(zhì)。否則反沖會(huì)快速降低柱效，預(yù)柱和保護(hù)柱，選擇使用適合的流動(dòng)相（尤其是pH），以避開(kāi)固定相被破壞。

有時(shí)可以在進(jìn)樣器前面連接一預(yù)柱，分析柱是鍵合硅膠時(shí)，預(yù)柱為硅膠，可使流動(dòng)相在進(jìn)入分析柱之前預(yù)先被硅膠“飽和”，避開(kāi)分析柱中的硅膠基質(zhì)被溶解。

避開(kāi)將基質(zhì)多而雜的樣品尤其是生物樣品直接注入柱內(nèi)，需要對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)處理或者在進(jìn)樣器和色譜柱之間連接一保護(hù)柱。保護(hù)柱一般是填有相像固定相的短柱。保護(hù)柱可以而且應(yīng)當(dāng)常常更換。

液相色譜儀的基本結(jié)構(gòu)，由輸液系統(tǒng)、進(jìn)樣系統(tǒng)、分別系統(tǒng)、檢測(cè)系統(tǒng)和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)等構(gòu)成。

工作原理，利用混合物各組分在固定相和流動(dòng)相中溶解、調(diào)配或吸附等化學(xué)作用性能的差異，使各組分在作相對(duì)運(yùn)動(dòng)的兩相中反復(fù)多次受到上述各作用力而達(dá)到相互分別。

從液相色譜儀工作流程中看到，色譜柱是實(shí)現(xiàn)分別的核心部件，要求柱效高、柱容量大和性能穩(wěn)定。柱性能與柱結(jié)構(gòu)、填料特性、填充質(zhì)量和使用條件有關(guān)。

色譜填料：經(jīng)過(guò)制備處理后，用于填充色譜柱的物質(zhì)顆粒，通常是5—10粒徑的球形顆粒。

色譜柱管：內(nèi)部拋光的不銹鋼管。典型的液相色譜分析柱尺寸是內(nèi)徑4.6mm，長(zhǎng)250mm。

色譜柱：也稱(chēng)固定相，是將色譜填料填充