鏈球菌屬及其檢驗(yàn)「微生物檢驗(yàn)」

鏈球菌屬及其檢驗(yàn)「微生物檢驗(yàn)」1.分類鏈球菌的分類方法尚未統(tǒng)一。常用以下兩種方法。1)根據(jù)溶血現(xiàn)象：分為3類。甲型溶血性鏈球菌(α-hemolyticstreptococcus)：菌落周圍有1～2mm寬的草綠色溶血環(huán)，稱甲型溶血或α溶血，該類菌又稱草綠色鏈球菌，為條件致病菌。乙型溶血性鏈球菌(β-hemolyticstreptococcus)：菌落周圍有2～4mm寬的透明溶血環(huán)，稱乙型溶血或β溶血，該類菌又稱溶血性鏈球菌，致病性強(qiáng)，常引起人和動(dòng)物多種疾病。丙型鏈球菌(γ-streptococcus)：菌落周圍無溶血環(huán)，因而又稱不溶血性鏈球菌，一般不致病。2)根據(jù)抗原結(jié)構(gòu)：按鏈球菌細(xì)胞壁中多糖抗原不同，可分成A、B、C、D…等20個(gè)群。同群鏈球菌間，因表面蛋白質(zhì)抗原不同又分若干型。如A群根據(jù)其M抗原不同，可分成約100個(gè)型;B群分4個(gè)型。對(duì)人致病的鏈球菌菌株，主要是A群，多數(shù)呈現(xiàn)乙型溶血。2.細(xì)菌特性1)鏈球菌1)形態(tài)染色球形或橢圓形，直徑0.5～1.0μm，鏈狀排列，鏈的長短與細(xì)菌的種類和生長環(huán)境有關(guān)，在液體培養(yǎng)基中形成的鏈較長。無芽胞，無鞭毛。多數(shù)菌株在培養(yǎng)早期(2～4h)形成透明質(zhì)酸的莢膜。革蘭染色陽性。2)分離培養(yǎng)營養(yǎng)要求較高，培養(yǎng)基中需加入血液或血清、葡萄糖、氨基酸、維生素等物質(zhì)。多數(shù)菌株兼性厭氧，少數(shù)為專性厭氧。在液體培養(yǎng)基中呈沉淀生長，在血平板上，37℃18～24h后可形成灰白色、圓形、凸起、光滑、直徑為0.5mm～0.75mm的細(xì)小菌落，菌落周圍出現(xiàn)不同類型的溶血環(huán)。3)生化反應(yīng)觸酶陰性、一般不分解菊糖，不被膽汁溶解，這兩特性可用來鑒別甲型溶血性鏈球菌和肺炎鏈球菌。4)抗原構(gòu)造主要有三種：蛋白質(zhì)抗原：或稱表面抗原。具型特異性有M、T、R、S4種，位于C抗原外層。與致病性有關(guān)的是M抗原。多糖抗原：或稱C抗原。為群特異性抗原，位于細(xì)胞壁。根據(jù)C抗原的不同，將鏈球菌分為20群。對(duì)人致病的90%屬A群。核蛋白抗原：或稱P抗原。無特異性，為各種鏈球菌所共有，并與葡萄球菌有交叉。5)抵抗力不強(qiáng)，60℃30min即被殺死。對(duì)常用消毒劑敏感。乙型鏈球菌對(duì)青霉素、紅霉素、四環(huán)素及磺胺類敏感。2)肺炎鏈球菌1)形態(tài)染色革蘭陽性球菌，菌體呈矛頭狀、成雙排列，寬端相對(duì)，尖端向外，在膿液、痰液及肺組織病變中亦可呈短鏈狀，無鞭毛，無芽胞，在機(jī)體內(nèi)或含血清的培養(yǎng)基中可形成莢膜。②分離培養(yǎng)營養(yǎng)要求高，在血平板上形成灰白色、圓形、直徑為0.5mm～1.0mm的扁平菌落，周圍有草綠色溶血環(huán)。培養(yǎng)時(shí)間長時(shí)可產(chǎn)生自溶酶。③生化反應(yīng)多數(shù)菌株分解菊糖，膽鹽溶解試驗(yàn)陽性和optochin敏感試驗(yàn)陽性，籍此可與草綠色鏈球菌相區(qū)別。④抗原結(jié)構(gòu)莢膜多糖抗原可將肺炎鏈球菌分為85個(gè)血清型。肺炎鏈球菌14型與人類A血型抗原有交叉反應(yīng)。多糖抗原為各型菌株所共有?？杀谎逯幸环NC反應(yīng)蛋白(Creactiveprotein,CRP)所沉淀。正常人血清中只含微量CRP，急性炎癥者含量增高，故常以測(cè)定CRP作為診斷的依據(jù)。檢驗(yàn)地帶網(wǎng)M蛋白：為型特異抗原，與A群鏈球菌M蛋白類似，但抗原性不同，與毒力無關(guān)。⑤抵抗力本菌抵抗力弱，對(duì)一般消毒劑敏感。有莢膜菌株抗干燥力較強(qiáng)，在干痰中可存活1～2月。對(duì)青霉素、紅霉素、潔霉素敏感。⑥變異性有莢膜的肺炎鏈球菌經(jīng)人工培養(yǎng)后可發(fā)生菌落由光滑型向粗糙型，即S-R變異，同時(shí)隨著莢膜的消失，毒力亦隨之減弱。將R型菌落的菌株接種動(dòng)物或在血清肉湯中培養(yǎng)，則又可恢復(fù)S型。⒊臨床意義⑴化膿性鏈球菌A群鏈球菌也稱化膿性鏈球菌(pyogenicstreptococcus)，致病力強(qiáng)，占人類鏈球菌感染的90%，能產(chǎn)生多種外毒素和侵襲性酶，如鏈球菌溶素O和S、M蛋白、脂磷壁酸、鏈激酶、鏈道酶、透明質(zhì)酸酶等，可引起急性咽炎、呼吸道感染、丹毒、膿皰病、軟組織感染、心內(nèi)膜炎、腦膜炎及變態(tài)反應(yīng)性疾病如急性腎小球腎炎、風(fēng)濕熱等，產(chǎn)毒株還可引起猩紅熱。鏈球菌型別多，各型間無交叉免疫，故常反復(fù)感染。⑵乳鏈球菌B群鏈球菌學(xué)名無乳鏈球菌(S.agalactiae)是新生兒敗血癥和腦膜炎的常見菌，對(duì)成人主要引起腎盂腎炎、子宮內(nèi)膜炎等。⑶肺炎鏈球菌肺炎鏈球菌(S.pneumoniae)，俗稱肺炎球菌(pneumococcus)，是大葉性肺炎、支氣管炎的病原菌，還可引起中耳炎、乳突炎、鼻竇炎、腦膜炎等。其莢膜在細(xì)菌的侵襲力上有重要作用，此外溶血素、神經(jīng)氨酸酶是主要致病物質(zhì)。感染后機(jī)體可產(chǎn)生牢固的型特異性免疫。但因菌型多，可再感染其他型。檢驗(yàn)地帶網(wǎng)⑷草綠色鏈球菌草綠色鏈球菌亦稱甲型溶血性鏈球菌。是人體口腔、消化道、女性生殖道的正常菌群，可引起亞急性細(xì)菌性心內(nèi)膜炎。⒋微生物學(xué)檢驗(yàn)⑴鏈球菌檢驗(yàn)程序鏈球菌檢驗(yàn)程序見圖9-2。⑵標(biāo)本采集根據(jù)不同疾病采集不同標(biāo)本。⑶檢驗(yàn)方法顯微鏡檢查標(biāo)本涂片革蘭染色，鏡檢見鏈狀排列革蘭陽性球菌可初報(bào)。分離培養(yǎng)血液標(biāo)本先增菌培養(yǎng)，膿液、咽拭可接種血瓊脂平板并涂片染色鏡檢，初代分離需5%C02，35℃24h觀察菌落性狀。⑵肺炎鏈球菌①檢驗(yàn)程序②標(biāo)本采集根據(jù)病變部位采集不同標(biāo)本。檢驗(yàn)地帶網(wǎng)③檢驗(yàn)方法顯微鏡檢查：除血液外，痰、膿液等均可直接涂片染色鏡檢。如發(fā)現(xiàn)革蘭陽性矛頭狀雙球菌，周圍有較寬的透明區(qū)，經(jīng)莢膜染色確認(rèn)后可初報(bào)“找到肺炎鏈球菌”。分離培養(yǎng)：血液、腦脊液先增菌，可呈均勻混濁，有綠色熒光。痰液、膿液可直接接種血平板，5%～10%CO2培養(yǎng)后，取可疑菌落進(jìn)一步作optochin敏感實(shí)驗(yàn)、膽鹽溶菌試驗(yàn)與菊糖發(fā)酵試驗(yàn)，以區(qū)別于甲型鏈球菌。動(dòng)物試驗(yàn)：小鼠對(duì)肺炎鏈球菌敏感，12～36h死亡。莢膜腫脹試驗(yàn)：如遇同型免疫血清，則肺炎鏈球菌莢膜出現(xiàn)腫脹，為陽性。④鑒定與鑒別①Lancefield群特異性抗原鑒定：B群為無乳鏈球菌，F(xiàn)群為米勒鏈球菌，A、C、G群抗原不是種特異性抗原，還需根據(jù)菌落大小和生化反應(yīng)進(jìn)一步鑒定。②PYR試驗(yàn)：化膿性鏈球菌為陽性。③桿菌肽(bacitracin)敏感試驗(yàn)：化膿性鏈球菌為陽性，有別于其他PYR陽性的β溶血性細(xì)菌(豬鏈球菌、海豚鏈球菌)和A群小菌落β溶血性鏈球菌(米勒鏈球菌)。此法可作為篩選試驗(yàn)。④VP試驗(yàn)：可鑒別A、C、G群β溶血的大、小兩種不同菌落。⑤CAMP試驗(yàn)：無乳鏈球菌能產(chǎn)生CAMP因子，它可促進(jìn)金黃