第4節(jié)各類(lèi)高效液相色譜法

第四節(jié)、各類(lèi)高效液相色譜法2024/5/211一、吸附色譜

固定相：固體吸附劑，分為極性和非極性，例如：硅膠、氧化鋁和硅酸鎂分子篩、多孔微?；钚蕴?、多孔石墨化炭黑

流動(dòng)相：各種不同極性的一種或多種有機(jī)溶劑。

基本原理：組分在固定相吸附劑上的吸附與解吸；適用于分離相對(duì)分子量中等的脂溶性試樣，對(duì)具有官能團(tuán)的化合物和異構(gòu)體有較高選擇性；

缺點(diǎn)：非線(xiàn)形等溫吸附常引起峰的拖尾流動(dòng)相：正己烷or環(huán)己烷，以一氯甲烷、二氯甲烷、三氯甲烷or丙酮作調(diào)節(jié)劑2024/5/212二、化學(xué)鍵合相色譜法化學(xué)鍵合相：采用化學(xué)反應(yīng)的方法將固定液的官能團(tuán)鍵合在載體表面上形成的固定相鍵合固定相：不流失；化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定；熱穩(wěn)定性好；載樣量大；適于梯度洗脫鍵合相色譜法：正相～和反相～。正相：固定相的極性大于流動(dòng)相的極性---適用于分離極性與強(qiáng)極性化合物。反相：固定相的極性小于流動(dòng)相的極性，適用于分離非極性、極性或離子型化合物。2024/5/213硅氧硅碳鍵型：≡Si—O—Si—

C

2024/5/214鍵合相色譜固定相1）非極性鍵合相：C18、C8、甲基、苯基（反相柱）2）中等極性鍵合相：醚基（正相或反相柱）3）極性鍵合相：氨基、氰基（正相柱）2024/5/215

分離原理正相鍵合相色譜固定相：極性鍵合相---極性有機(jī)基團(tuán)如胺基（-NH2）、腈基（-CN）主要靠范德華作用力的定向作用力、誘導(dǎo)作用力及氫鍵作用力流動(dòng)相極性增大，洗脫能力增強(qiáng)，組分的K值減小反相鍵合相色譜固定相：極性較小的鍵合相，苯基、烷基等流動(dòng)相溶劑的極性大于固定相分離機(jī)理：疏溶劑作用理論：組分分子中的非極性部分與極性溶劑產(chǎn)生疏溶劑斥力，與鍵合相的疏水基團(tuán)產(chǎn)生疏水締合作用，產(chǎn)生保留作用；另一方面，組分分子中有極性官能團(tuán)時(shí)，極性部分受到極性溶劑的作用，產(chǎn)生解締作用并減小其保留作用。2024/5/216疏溶劑締合作用示意圖2024/5/217決定組分保留值的因素（烷基鍵合固定相對(duì)組分分子的締合作用和解締作用能力之差）：①組分分子結(jié)構(gòu)對(duì)保留值的影響：在反相鍵合相色譜中，以疏水結(jié)構(gòu)差異為分離依據(jù)；組分的極性越弱，疏水性越強(qiáng)，保留值越大。②烷基鍵合固定相特性對(duì)保留值的影響：固定相提供非極性作用表面，鍵合到硅膠表面的烷基數(shù)量決定組分k的大小。碳鏈↑，疏水性↑，鍵合相的非極性作用的表面積↑，組分的保留值↑，選擇性↑。③流動(dòng)相性質(zhì)對(duì)保留值的影響：流動(dòng)相的表面張力↑，介電常數(shù)↑，極性↑，此時(shí)組分與烷基鍵合相的締合作用↑，流動(dòng)相的洗脫強(qiáng)度↓，組分的保留值↑。2024/5/218流動(dòng)相正相：正己烷or環(huán)己烷，以一氯甲烷、二氯甲烷、三氯甲烷or丙酮作調(diào)節(jié)劑反相：水or緩沖鹽水溶液，加甲醇、乙腈or四氫呋喃2024/5/219三、離子對(duì)色譜

原理：將一種（或多種）與組分離子電荷相反的離子（對(duì)離子或反離子）加到流動(dòng)相中使其與組分離子結(jié)合形成疏水性離子對(duì)化合物，使其能夠在兩相之間進(jìn)行分配；反相離子對(duì)色譜：非極性的疏水固定相(C18柱，ODS)，含有對(duì)離子Y+的甲醇-水或乙腈-水作為流動(dòng)相，樣品離子X(jué)-進(jìn)入流動(dòng)相后，生成疏水性離子對(duì)Y+

X-后；在兩相間分配?？梢酝瑫r(shí)分離離子型化合物和中性化合物。2024/5/2110根據(jù)被測(cè)組分離子與離子對(duì)試劑離子形成中性的離子對(duì)化合物后，在非極性固定相中溶解度增大，從而使其分離效果改善。主要用于分析離子強(qiáng)度大的酸堿物質(zhì)。分析酸性物質(zhì)常用四丁基季銨鹽，如四丁基溴化銨、四丁基銨磷酸鹽。分析堿性物質(zhì)常用的離子對(duì)試劑為烷基磺酸鹽，如戊烷磺酸鈉、辛烷磺酸鈉等。另外高氯酸、三氟乙酸也可與多種堿性樣品形成很強(qiáng)的離子對(duì)。

離子對(duì)色譜法常用ODS柱（即C18），流動(dòng)相為甲醇-水或乙腈-水，水中