《食品微生物檢驗技術(shù)》課件-染色的原理 1

染料及染液配制技術(shù)目錄/Contents1染色原理細(xì)菌染色染料的種類2染色的方法3染色的基本步驟401染色原理

微生物的染色是借助物理和化學(xué)因素的作用而進行的。物理因素如細(xì)胞及細(xì)胞物質(zhì)對染料的毛細(xì)現(xiàn)象、滲透、吸附作用等?；瘜W(xué)因素則是正負(fù)離子之間的相互吸引而發(fā)生的各種化學(xué)反應(yīng)。酸性物質(zhì)對于堿性染料較易吸附，且吸附作用穩(wěn)固；同樣，堿性物質(zhì)對酸性染料較易于吸附。01染色原理

細(xì)菌的等電點較低，pH值大約在2~5之間，故在中性、堿性或弱酸性溶液中，菌體蛋白質(zhì)電離后帶陰電荷；而堿性染料電離時染料離子帶陽離子。因此，帶陰電的細(xì)菌常和帶陽離子的堿性染料進行結(jié)合。故而在細(xì)菌學(xué)上通常采用堿性染料進行染色。

02染料的種類1.酸性染料如酸性復(fù)紅、剛果紅、伊紅、藻紅、苯胺黑、苦味酸等。這類染料電離后染料離子帶負(fù)電，可與堿性物質(zhì)結(jié)合成鹽。當(dāng)培養(yǎng)基因糖類分解產(chǎn)酸使pH值下降時，細(xì)菌所帶的正電荷增加，這時選擇酸性染料，易被染色。02染料的種類2.堿性染料

一般有堿性復(fù)紅、中性紅、孔雀綠、番紅、結(jié)晶紫、美蘭、甲基紫等，這類染料電離后染料離子帶正電，可與酸性物質(zhì)結(jié)合成鹽，通常情況下，細(xì)菌容易被堿性染料染色。

02染料的種類3．中性（復(fù)合）染料

如伊紅美蘭等，瑞脫氏（Wright）染料和基姆薩氏（Gimsa）染料等，后者常用于細(xì)胞核染色。

02染料的種類4．單純?nèi)玖线@類染料的化學(xué)親和力低，大多是偶氮化合物，不溶于水，但溶于脂肪溶劑中，如蘇丹類（Sudanb)的染料。03染色的方法（1）單染色法單染色法是用一種染料染色的方法。比如用美藍使各種細(xì)菌染成同—種顏色，此法只顯示細(xì)菌的形態(tài)和大小，對細(xì)菌的鑒別價值較小。在染色過程中常加入媒染劑如碘、石碳酸或明礬等，來增加染料對細(xì)菌的親和力，當(dāng)然也可以使用加熱的方法。03染色的方法（1）單染色法單染色法是用一種染料染色的方法。比如用美藍使各種細(xì)菌染成同—種顏色，此法只顯示細(xì)菌的形態(tài)和大小，對細(xì)菌的鑒別價值較小。在染色過程中常加入媒染劑如碘、石碳酸或明礬等，來增加染料對細(xì)菌的親和力，當(dāng)然也可以使用加熱的方法。03染色的方法（2）復(fù)染色法復(fù)染色法是用兩種或兩種以上染料染色的方法。常用的復(fù)染色法有革蘭氏染色法和抗酸染色法。復(fù)染色法能顯示細(xì)菌的形態(tài)和大小，不同類型的細(xì)菌可以染上不同的顏色，從而具有鑒別細(xì)菌種類的價值，因此又稱之為鑒別染色法。03染色的方法（3）細(xì)菌特殊結(jié)構(gòu)的染色法檢查細(xì)菌的特殊結(jié)構(gòu)，如鞭毛、異染顆粒等對鑒別細(xì)菌很有幫助。細(xì)菌特殊結(jié)構(gòu)染色法不僅能使特殊的結(jié)構(gòu)著色，還可使特殊結(jié)構(gòu)染成與菌體不同的顏色，有利于觀察。在細(xì)菌檢查工作中，異染顆粒染色法應(yīng)用的較多，其他特殊結(jié)構(gòu)染色法操作比較費時，又能用其他簡易方法來代替，故而在日常檢驗工作中較少使用。03染色的方法（4）熒光染色法熒光染料溶于水中，在紫外線照射下能激發(fā)出熒光，細(xì)菌染色后鏡檢，即為熒光染色法。熒光染料分為酸性染料及堿性染料兩種。細(xì)菌用熒光染料染色后在熒光顯微鏡下檢查，可在黑的背景中觀察到細(xì)菌發(fā)出明亮的熒光。用熒光染色法檢查細(xì)菌可起到加快檢查速度和提高陽性率的作用。04染色的基本步驟染色的步驟大致為8步，即①涂片。用灼燒滅菌冷卻后的接種環(huán)挑取少量菌體與水滴充分混勻，涂成極薄的菌膜；②干燥。可自然晾干，或?qū)⑼科糜诨鹧娓咛幬岷娓?，但不能直接在火焰上烘烤；③固定。手?zhí)玻片一端，有菌膜的一面朝上，通過迅速通過火焰2~3次（用手指觸涂片反面，以不燙手為宜）；④染色。加適量(以蓋滿菌膜為度)結(jié)晶紫染色液(或石炭酸復(fù)紅液)，染l~2min；⑤媒染；⑥脫色。用自來水沖洗至流下的水中無染色液的顏色時為止，