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文檔簡介

《動物微生物專項(xiàng)技能訓(xùn)練》雞胚接種技術(shù)

--以新城疫病毒培養(yǎng)為例實(shí)驗(yàn)?zāi)康牧私怆u胚接種技術(shù)在病毒培養(yǎng)中的應(yīng)用掌握雞胚活力判定方法。掌握雞胚尿囊腔接種的操作方法。掌握尿囊液的收獲方法。實(shí)驗(yàn)材料9-11日齡雞胚新城疫活疫苗（LaSota株）恒溫培養(yǎng)箱、冰箱、高壓蒸汽滅菌器照蛋器、蛋架打孔錐子、一次性注射器、石蠟酒精燈、5%碘酊棉球、75%酒精棉球中號鑷子、眼科鑷子、無菌吸管、滅菌西林瓶1-氣室2-卵殼3-卵黃囊4-清蛋白5-尿囊腔6-殼膜7-胚體8-羊膜腔9-絨毛尿囊膜雞胚結(jié)果示意圖操作方法1.雞胚的選擇：最好選擇SPF雞胚，也可用非免疫雞胚，以白來航雞雞胚為佳。雞胚應(yīng)當(dāng)具有良好的活力，即通過照蛋器可觀察到清晰的血管和雞胚的活動。操作方法2.標(biāo)記：照蛋器貼住氣室部位進(jìn)行觀察，用鉛筆劃出接種部位和氣室邊緣。接種部位可選在尿囊腔中上部，避開大血管和胚體，也可選擇氣室中央。接種部位用圓圈標(biāo)記，氣室邊緣用一段弧線標(biāo)記。操作方法3.消毒：接種部位先用碘酊棉球消毒，然后用酒精棉球脫碘。操作方法4.打孔：錐子在酒精燈火焰上灼燒滅菌后，在標(biāo)記處打一小孔，只要鉆破卵殼即可。5.接種病毒：將新城疫活疫苗用2mL無菌生理鹽水稀釋后，用無菌注射器抽取適量病毒液沿小孔處垂直或逆著氣室方向稍斜插入尿囊腔，深1-1.5cm，緩慢注入病毒液約0.1-0.2ml。6.封孔：接種病毒完成后，用熔化的石蠟將接種部位小孔封閉。操作方法7.繼續(xù)孵化和檢查：將雞胚氣室部位向上，直立于蛋架上，置于37℃恒溫培養(yǎng)箱中，繼續(xù)孵化72h。孵化期間，每6h照胚一次，觀察胚胎存活情況。棄去接種后24h內(nèi)死亡的雞胚。8.冷藏：24h以后死亡的雞胚置于0-4℃冰箱冷藏過夜（氣室直立朝上），是血管收縮血液凝固。孵化72小時(shí)未死亡的雞胚也放冰箱凍死。操作方法9.收獲病毒：將雞胚從冰箱內(nèi)取出，氣室部位用碘酊棉球消毒后，用滅菌中號鑷子敲破氣室卵殼并將其去除，換用滅菌眼科鑷子撕去殼膜，撕開下面的絨毛尿囊膜和羊膜。用鑷子壓住胚體，用滅菌吸管吸取尿囊液置于滅菌西林瓶中。10.廢胚

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