布氏桿菌凝集試驗(yàn)

《動(dòng)物微生物專項(xiàng)技能訓(xùn)練》血清學(xué)診斷—試管凝集實(shí)驗(yàn)實(shí)訓(xùn)目的

掌握試管凝集試驗(yàn)的操作及結(jié)果判定。明確其在生產(chǎn)中的應(yīng)用。實(shí)訓(xùn)器材生理鹽水、試管、試管架、加液器（20-200ul）、溫箱（37℃）?？乖脱澹ㄒ圆际蠗U菌為例）：布氏桿菌凝集實(shí)驗(yàn)抗原、布氏桿菌標(biāo)準(zhǔn)陽性血清、陰性血清、待檢血清、稀釋液（含0.5%石炭酸的生理鹽水）；

血清學(xué)診斷--試管凝集試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)步驟：每份血清用4支試管，另取對(duì)照管3支，共7支；各管按下表所示加入0.5%石炭酸生理鹽水，后加0.2ml被檢血清至第一管中，混勻，吸出1.5ml棄去，再吸0.5ml至第二管，混勻，吸0.5ml至第三管，依次至第四管，混勻，吸棄0.5ml，第五管中不加待測血清，第六管中加1:25稀釋的布氏桿菌陽性血清0.5ml，第七管中加1:25稀釋的陰性血清0.5ml；將稀釋好的抗原液0.5ml加入已稀釋好的各管血清中，七管同時(shí)混勻，37℃恒溫箱中4-10h，取出后室溫18-24h，觀察并記錄結(jié)果；操作示意圖受檢血清為羊、豬血清時(shí)，加抗原后的血清終稀釋度如上圖所示，分別為1：25、1：50、1：100、1：200，當(dāng)受檢血清為牛、馬、鹿和駱駝血清時(shí)，加抗原后的血清終稀釋度分別為1：50、1：100、1：200、1：400。大規(guī)模檢疫時(shí)也可只用2個(gè)血清稀釋度（加抗原后的終稀釋度），即牛、馬、鹿、駱駝?dòng)?：50和1：100，豬、山羊、綿羊和犬用1：25、1：50。凝集反應(yīng)程度凝集反應(yīng)程度應(yīng)根據(jù)參照比濁管來判讀，分別記為“++++”“+++”“++”“+”“-”，按以下說明判定：++++：液體完全透明，菌體完全被凝集呈傘狀沉于管底，沉淀物呈片狀、塊狀或顆粒狀，即100%凝集。+++：液體略呈混濁，菌體大部分被凝集沉于管底，即75%凝集。++：液體不甚透明，管底有明顯凝集沉淀，振蕩時(shí)有塊狀或小片絮狀物，即50%凝集。+：液體透明度不顯，有不甚顯著的沉淀或僅有沉淀的痕跡，即25%凝集。-：液體不透明，均勻渾濁，管底無凝集。當(dāng)陽性對(duì)照血清出現(xiàn)完全凝集（++++），陰性對(duì)照血清無凝集（-），抗原對(duì)照無自凝（-）現(xiàn)象時(shí)，試驗(yàn)成立，可對(duì)結(jié)果進(jìn)行如下判定：牛、馬、鹿和駱駝1：100血清稀釋度，豬、山羊、綿羊和犬1：50血清稀釋度，出現(xiàn)“++”及以上凝集現(xiàn)象時(shí)，判定為陽性。牛、馬、鹿和駱駝1：50血清稀釋度，豬、山羊、綿羊和犬1：25血清稀釋度，出現(xiàn)“++”及以上凝集現(xiàn)象時(shí)，判定為可疑。結(jié)果處理試驗(yàn)結(jié)果可疑的家畜經(jīng)30d后采血重檢，如果仍為可疑，該牛、羊判為陽性。豬和馬經(jīng)重檢仍保持可疑水平，而農(nóng)場的牲畜沒有臨床癥狀和大批陽性患畜出現(xiàn)，該畜判為陰性。豬血清偶有非特