皮膚刺激-皮內(nèi)試驗課件

刺激試驗

刺激是不涉及免疫學(xué)機(jī)制的一次、多次或持續(xù)與試驗材料接觸所引起的局部炎癥反應(yīng)。1可編輯課件PPT皮膚刺激試驗評價材料在試驗條件下產(chǎn)生皮膚刺激反應(yīng)的潛在性。家兔為首選，預(yù)期無反應(yīng)，可直接使用3家兔。2可編輯課件PPT試驗材料與儀器

天平精度0.01或0.1g供試品稱量用精度0.1或1mg試劑稱量用精度50g試驗用兔稱量用兔固定裝置、手術(shù)剪刀、推子、游標(biāo)卡尺、稱量瓶、吸管、移液管、包扎帶、醫(yī)用紗布、燒杯、壓力蒸汽滅菌器。3可編輯課件PPT試劑與器具滅菌試劑75%(V/V)乙醇、0.9％氯化鈉注射液或其它規(guī)定的浸提介質(zhì)。器具滅菌與供試品接觸的所有器具應(yīng)采用可靠的方法滅菌，置壓力蒸汽滅菌器內(nèi)121℃恒溫20分鐘，或置電熱干燥箱內(nèi)160℃干烤2h。4可編輯課件PPT試驗動物應(yīng)使用清潔級健康、初成年的、未使用過的試驗用（新西蘭）兔，雌雄兼用,同一品系,同一飼養(yǎng)條件，體重應(yīng)不低于2kg。5可編輯課件PPT試驗用兔的抓取固定方法試驗用兔比較馴服不會咬人，但腳爪較尖應(yīng)避免兔抓傷。進(jìn)行刺激試驗時，只需將兔抓牢或按住即可，抓兔的方法是用右手把兩耳輕輕地拿在手心，抓住頸后部的皮厚處，提取兔，然后用左手托住臀部，使兔的體重大部分落在左手上，不能單提兩耳、捉拿四肢、提抓腰部和背部。6可編輯課件PPT預(yù)試驗試驗材料應(yīng)使用1只動物進(jìn)行初試。如動物出現(xiàn)清晰紅斑或水腫時，不必再進(jìn)行其他試驗。如試驗動物沒有出現(xiàn)清晰的紅斑或水腫反應(yīng)時,應(yīng)至少再選用2只動物進(jìn)行試驗。7可編輯課件PPT試驗步驟8可編輯課件PPT動物準(zhǔn)備試驗前一天,將試驗用兔人工固定或固定到固定裝置上，然后把背部脊柱兩側(cè)的被毛用手術(shù)剪粗剪后再用推子小心的把被毛去除干凈(約10cm×15cm區(qū)域),作為試驗和觀察部位。去毛過程應(yīng)確保動物皮膚健康無損傷。9可編輯課件PPT

試驗方法

試驗前用75％的(V/V)乙醇擦拭背部去毛區(qū)域，等變干后根據(jù)供試品的不同性狀選用不同的方法進(jìn)行操作。10可編輯課件PPT粉劑或液體樣品取0.5g或0.5mL的試驗材料，直接涂抹到剃毛皮膚部位。粉劑使用前用少量的水制成糊狀，有利于涂抹。用25mm×25mm透氣性好的敷料敷貼涂抹樣品的皮膚部位,然后敷料外層用紗布包裹，再用半封閉性包扎帶固定敷料和紗布4h以上。接觸期結(jié)束后依次取下包扎帶、紗布及敷料,對接觸部位進(jìn)行標(biāo)記,用溫水清洗并擦干。11可編輯課件PPT固體樣品研成粉末，試驗材料可用水充分濕化以保證與皮膚良好的接觸性。用25mm×25mm的透氣性好的敷料塊覆蓋材料接觸部位,然后敷料外層用紗布包裹，再用半封閉性包扎帶固定敷料和紗布4h以上，依次取下包扎帶、紗布及敷料,對接觸部位進(jìn)行標(biāo)記,用溫水清洗并擦干。12可編輯課件PPT藥包材：鋁質(zhì)軟膠管：取試樣5支，向每支加入標(biāo)示容量的0.9％氯化鈉注射液，振蕩5分鐘后，合并提取液備用。一般材料：取平整部位表面積600cm2剪碎，加入氯化鈉注射液100mL，70℃放置24小時后取出冷卻備用。13可編輯課件PPT0.9％氯化鈉注射液及其浸提液將浸提液滴到25mm×25mm的4層紗布塊上(每塊約0.5mL),按下圖所示部位敷貼于動物背部兩側(cè)。將滴有0.9％氯化鈉注射液的紗布塊敷貼在對照接觸部位。然后敷料外層用紗布包裹，再用半封閉性包扎帶固定敷料和紗布4h以上，依次取下包扎帶、紗布及敷料,對接觸部位進(jìn)行標(biāo)記,用溫水清洗并擦干。14可編輯課件PPT去毛的背部區(qū)域?qū)φ詹课还┰嚻凡课还┰嚻凡课粚φ詹课活^部尾部15可編輯課件PPT結(jié)果觀察在除去敷貼物后1h、24h、48h和72h記錄各接觸部位情況。如存在持久性損傷有必要延長觀察時間,以評價這種損傷的可逆性或不可逆性,但延長期不必超過14d。按下表規(guī)定的分類系統(tǒng),描述每一接觸部位在每一規(guī)定時間內(nèi)皮膚紅斑和水腫反應(yīng)情況并評分,記錄結(jié)果以出具試驗報告。16可編輯課件PPT反應(yīng)記分紅斑和焦痂形成無紅斑極輕微紅斑(勉強(qiáng)可見)

紅斑清晰中度紅斑重度紅斑(紫紅色)至焦痂形成水腫形成無水腫極輕微水腫(勉強(qiáng)可見)水腫清晰(腫起,不超出區(qū)域邊緣)中度水腫(腫起約1mm)

重度水腫(腫起超過1mm,并超出接觸區(qū))0123401234

刺激最高記分8

注:記錄并報告皮膚部位的其他異常情況。表14觀察損傷情況及評分標(biāo)準(zhǔn)17可編輯課件PPT反應(yīng)類型平均記分極輕微輕度中度重度0.0～0.40.5～1.92.0～4.95.0～8.0表15皮膚刺激試驗結(jié)果評價18可編輯課件PPT結(jié)果評價按下列規(guī)定確定原發(fā)性刺激指數(shù)(PII)。將每只動物在每一規(guī)定時間試驗材料引起的紅斑與水腫的原發(fā)性刺激記分相加后再除以觀察總數(shù)(總數(shù)為6:2個計分類型和3個觀察期)。當(dāng)用0.9％氯化鈉注射液對照時，計算出對照原發(fā)性刺激記分，將試驗材料原發(fā)性刺激記分減去該記分，即得出每只動物原發(fā)性刺激記分。使用24h、48h和72h的觀察數(shù)據(jù)進(jìn)行計算。試驗之前或72h后的恢復(fù)觀察數(shù)據(jù)不用于計算。每只動物的記分相加后除以動物總數(shù)即為原發(fā)性刺激指數(shù)。19可編輯課件PPT皮內(nèi)刺激試驗

簡述評價材料通過皮內(nèi)注射浸提液產(chǎn)生刺激反應(yīng)的潛在性。

應(yīng)排除的試驗材料任何對皮膚、眼、粘膜組織有刺激的材料或產(chǎn)品,如具有腐蝕性的強(qiáng)酸或強(qiáng)堿材料(pH≤2或≥11.5)不應(yīng)再進(jìn)行本試驗。20可編輯課件PPT試驗材料與儀器天平精度0.01或0.1g供試品稱量用精度0.1或1mg試劑稱量用精度50g試驗用兔稱量用兔固定裝置、手術(shù)剪刀、推子、稱量瓶、吸管、移液管、注射器（2mL）、注射針（5＃、8＃）、燒杯、壓力蒸汽滅菌器。21可編輯課件PPT試劑75%(V/V)乙醇、0.9％氯化鈉注射液、植物油或其它規(guī)定的溶劑。器具滅菌與供試品接觸的所有器具應(yīng)采用可靠的方法滅菌，置壓力蒸汽滅菌器內(nèi)121℃恒溫20分鐘，或置電熱干燥箱內(nèi)160℃干烤2h。供試品制備根據(jù)產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定制備供試品。22可編輯課件PPT試驗動物應(yīng)使用清潔級健康、初成年的、未使用過的試驗用（新西蘭）兔，雌雄兼用,同一品系,同一飼養(yǎng)條件體重不低于2kg。預(yù)試驗試驗材料初試至少采用2只動物。初試反應(yīng)如可疑或不明確,應(yīng)考慮進(jìn)行復(fù)試。23可編輯課件PPT試驗步驟試驗前一天，將試驗用兔人工固定或固定到固定裝置上，然后把背部脊柱兩側(cè)的被毛用手術(shù)剪粗剪后再用推子小心的把被毛去除干凈(約10cm×20cm區(qū)域),作為試驗和觀察部位。去毛過程應(yīng)確保動物皮膚健康無損傷。試驗前用75％的(V/V)乙醇擦拭背部去毛區(qū)域，等變干后再進(jìn)行注射。在每只兔脊柱左側(cè)上面5個點(見下圖)用注射器皮內(nèi)注射0.2mL0.9％氯化鈉注射液制備的浸提供試液。在每只兔脊柱左側(cè)的下面五個點(見下圖)用注射器皮內(nèi)注射0.2mL0.9％氯化鈉注射液對照液。在每只兔的脊柱右側(cè)上面五個點(見下圖2)用注射器注射0.2mL植物油制備的浸提供試液，右側(cè)下面五個點用注射器注射0.2mL植物油對照液。24可編輯課件PPT1¤2¤3¤4¤5¤6¤7¤8¤9¤10¤1¤2¤3¤4¤5¤6¤7¤8¤9¤10¤注射0.2mL0.9％氯化鈉注射液制備的浸提供試液注射0.2mL0.9％氯化鈉注射液對照液注射0.2mL植物油制備的浸提供試液注射0.2mL注射植物油對照液頭尾25可編輯課件PPT注：有時我們應(yīng)根據(jù)試驗材料的粘性選用不同規(guī)格的注射針頭做皮內(nèi)注射。在不妨礙注射的前提下，應(yīng)盡量選用小號針頭。26可編輯課件PPT27可編輯課件PPT28可編輯課件PPT29可編輯課件PPT30可編輯課件PPT31可編輯課件PPT24小時觀察32可編輯課件PPT結(jié)果觀察注射后即刻和24h、48h和72h后觀察記錄各注射部位狀況。按下表給出的分類系統(tǒng)對每一觀察期各注射部位的紅斑（ER）和水腫(ED)的組織反應(yīng)評分,并記錄試驗結(jié)果。油類液體皮內(nèi)注射常會引起炎癥反應(yīng)。在72h觀察時,可靜脈注射適宜的活體染料,如臺盼藍(lán)或伊文思藍(lán),以顯示出刺激區(qū)域有助于反應(yīng)評價。33可編輯課件PPT結(jié)果評價按下列方法確定刺激指數(shù)。將每只動物在每一規(guī)定時間內(nèi)每種浸提液出現(xiàn)的紅斑與水腫的刺激記分相加,再除以觀察總數(shù)為試驗材料刺激記分。對試劑對照注射部位也同樣評價。將試驗材料刺激記分減去試劑對照的記分得出每只動物刺激記分,用于計算刺激指數(shù)。注:記錄并報告注射部位的其他異常情況34可編輯課件PPT反應(yīng)記分

紅斑和焦痂形成無紅斑極輕微紅斑(勉強(qiáng)可見)

清晰紅斑中度紅斑重度紅斑(紫紅色)至焦痂形成水腫形成無水腫極輕微水腫(勉強(qiáng)可見)

清晰水腫(腫起,不超出區(qū)域邊緣)

中度水腫(腫起約1mm)重度水腫(腫起超過1mm,并超出接觸區(qū))0123401234刺激最高記分

8注:記錄并報告注射部位的其他異常情況。表17刺激記分35可編輯課件PPT使用24h、48h和72h的觀察數(shù)據(jù)進(jìn)行計算。每只動物的刺激記分相加后再除以動物總數(shù)即得出刺