《中國藥典》二學(xué)習(xí)資料省公開課金獎(jiǎng)全國賽課一等獎(jiǎng)微課獲獎(jiǎng)?wù)n件

《中國藥典》二部主要增修訂情況本版藥典（二部）共收載品種1967個(gè)，新增品種327個(gè)，修訂品種522個(gè)刪除品種4個(gè)，轉(zhuǎn)至中國藥典（三部）生物制品52個(gè)。附錄新增項(xiàng)目13個(gè)，修訂項(xiàng)目65個(gè)，附錄“生物制品通則”轉(zhuǎn)至藥典（三部）。制劑通則新增植入劑，修訂項(xiàng)目19個(gè)。本版藥典（二部）堅(jiān)持“科學(xué)、實(shí)用、規(guī)范”標(biāo)準(zhǔn)制訂標(biāo)準(zhǔn)，基本實(shí)現(xiàn)了中國藥典設(shè)計(jì)方案所確定目標(biāo)，附錄檢測方法及品種正文內(nèi)容都有了較林改進(jìn)，詳細(xì)表達(dá)在以下五個(gè)方面。1/273一、及時(shí)采取先進(jìn)分析方法，規(guī)范附錄表達(dá)我國特色本版藥典（二部）附錄增訂了制藥用水中總有機(jī)碳測定法（TOC）。TOC方法載入藥典，將引導(dǎo)我國制藥用水質(zhì)控理念更新，使我國對(duì)水中有機(jī)物限量控制愈加科學(xué)、準(zhǔn)確，同時(shí)也將推進(jìn)TOC方法在制藥用水在線檢驗(yàn)中應(yīng)用，確保制藥用水尤其是注射用水質(zhì)量。當(dāng)前，因?yàn)門OC測定儀器尚不普及，本版藥典（二部）在品種正文中仍沿用中國藥典標(biāo)準(zhǔn)，但為與我國藥品生產(chǎn)管理要求相適應(yīng)，純化水與注射用水增訂微生物程度檢驗(yàn)，純化水程度為每1ml中含細(xì)菌、霉菌和酵母菌總數(shù)不得過100個(gè)，注射用水程度為每1ml中含細(xì)菌、霉菌和酵母菌總數(shù)不得過10個(gè)。2/273純化水重金屬程度0.00005%修訂為0.00003%.注射劑粒度檢驗(yàn)方法從粒度大小為三個(gè)層次，第一為可見異物檢驗(yàn)法（即原澄明度檢驗(yàn)法），該法對(duì)粒徑或長度通常大于50μm物質(zhì)進(jìn)行檢驗(yàn)，其判斷標(biāo)準(zhǔn)作了較大改動(dòng)，愈加嚴(yán)格，即靜脈注射液不得檢出可見異，如有1支不符合要求，另取20支復(fù)試，均應(yīng)符合要求。對(duì)于非靜脈注射液以及粉針劑等由國家食品監(jiān)督管理局另行分布要求。另外，本版藥典新增了光散射法，該法采取儀器檢測，經(jīng)過對(duì)可見異物光散射能量進(jìn)行測量，使結(jié)果判斷更為客觀。為降低市場抽驗(yàn)實(shí)際困難，本版藥典（二部）降低了可見異物檢驗(yàn)取樣量，原部頒標(biāo)準(zhǔn)取200支，現(xiàn)方法取樣20支。以上要求既反應(yīng)我國注射液生產(chǎn)實(shí)際，又確保臨床用藥安全。3/273第二不溶性微粒檢驗(yàn)法，該法檢驗(yàn)粒度較小，通常為2~50μm，檢測微粒濃度為0~5000個(gè)/ml，本版藥典（二部）增加對(duì)100ml以下靜脈注射液、靜脈注射用無菌粉末及注射用濃溶液中不溶性微粒檢驗(yàn)。第三為粒度與粒度分布測定法，本版藥典（二部）增訂光散射法，測量范圍為0.02~3500μm，所用儀器為激光散射粒度分布儀，測定法分干法與濕法，濕法測定檢測下限通常為20μm，干法測定檢測下限通常為200μm。滲透壓摩爾濃度測定法強(qiáng)調(diào)“注射劑、滴眼劑等制劑處方中氯化鈉等，其作用主要為調(diào)整制劑滲透壓，則可經(jīng)過滲透壓摩爾濃度測定取代含量?！贝艘笠庠谝龑?dǎo)生產(chǎn)企業(yè)以滲透壓摩爾濃度作為判斷制劑等滲或高低滲客觀指標(biāo)。4/273二、加強(qiáng)安全性指標(biāo)控制，科學(xué)提升標(biāo)準(zhǔn)要求本版藥典（二部）對(duì)色譜方法系統(tǒng)適用性試驗(yàn)要求修訂更趨合理。薄層色譜法增加對(duì)系統(tǒng)檢測靈敏度與分離效能要求，通常要求雜質(zhì)斑點(diǎn)數(shù)和單一雜質(zhì)量，當(dāng)采取系列本身稀釋對(duì)照溶液時(shí)，也可要求預(yù)計(jì)雜質(zhì)總量。判別時(shí)，分離度效能可用對(duì)照品與結(jié)構(gòu)相同藥品對(duì)照品制成混合溶液進(jìn)行測試；雜質(zhì)檢驗(yàn)時(shí)，一采取雜質(zhì)對(duì)照品與供試品混合溶液，二者應(yīng)顯示清楚分離斑點(diǎn)，比如左旋多巴采取左旋多巴與酪氨酸混合溶液考評(píng)系統(tǒng)分離效果。本版藥典（二部）11個(gè)品種增訂TLC檢驗(yàn)相關(guān)物質(zhì)。5/273高效液相色譜法強(qiáng)調(diào)色譜中難分離物質(zhì)或與其相關(guān)物質(zhì)之間分離度和待測響應(yīng)值重復(fù)性是系統(tǒng)適用性試驗(yàn)更具實(shí)際意義主要參數(shù)，而依據(jù)當(dāng)前方法學(xué)驗(yàn)證情況，理論板數(shù)僅作為參考參數(shù)。本版藥典（二部）226個(gè)品種增訂HPLC檢驗(yàn)相關(guān)物質(zhì)。部分品種要求見表1。6/273表1部分品種系統(tǒng)適用性試驗(yàn)要求表品種系統(tǒng)適用性試選取對(duì)照品分離度地塞米松甲潑尼龍與地塞米大于5.7地塞米松磷酸鈉地塞米松磷酸鈉與地塞米松大于4.4曲安奈德曲安奈德與曲安西龍大于15氫化可松氫化可松與潑尼松龍大于2.4氫化可松琥珀酸鈉氫化可松琥珀酸鈉與氫化可松大于1.5倍他米松倍他米松甲潑尼龍大于2.2鹽酸二甲雙胍鹽酸二甲雙胍與雙氰胺大于1.57/273品種系統(tǒng)適用性試選取對(duì)照品分離度格列吡嗪格列吡嗪與4-[2-（5-甲基吡嗪-2-甲酰氨基）乙基]苯磺酰胺大于1.5格列喹酮格列喹酮與異喹啉物大于1.5倍他米松磷酸鈉倍他米松磷酸鈉與地塞米松磷酸鈉大于2.0醋酸可松醋酸可松與醋酸氫化可松大于4.0醋酸地塞米松醋酸地塞米松大于11.0醋酸氫化可松醋酸氫化可松與醋酸可松大于5.58/273重視殘留溶劑控制，本版藥典（二部）對(duì)殘留溶劑檢驗(yàn)推薦采取頂空毛細(xì)管氣相色譜法，程度與ICH一致。藥品生產(chǎn)企業(yè)可采取簡便填充柱氣相色譜法進(jìn)行工藝控制，其它色譜法如HPLC測定吡啶，離子色譜法測定N-甲基吡咯烷酮等，可作為氣相色譜法主要補(bǔ)充。頂空毛細(xì)管氣相色譜法應(yīng)考慮共出峰干擾、熱降解干擾、基質(zhì)效應(yīng)影響與藥品溶解性及溶劑介質(zhì)影響。本版藥典（二部）收載化學(xué)合成原料藥約100種，本版藥典（二部）24個(gè)品種增訂殘留溶劑檢驗(yàn)，部分品種殘留溶劑種類見表2。制訂殘留溶劑檢驗(yàn)方法難點(diǎn)在于各論中方法應(yīng)滿足全部企業(yè)不一樣工藝；藥典方法應(yīng)含有很好耐用性；生產(chǎn)工藝改變將需要對(duì)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行對(duì)應(yīng)修訂。9/273表2部分品種殘留溶劑列表品種殘留溶劑鹽酸多柔比星二氯甲烷甲醇丙酮美羅培南二氯甲烷與丙酮頭孢硫脒乙醇與丙酮馬來酸氯苯那敏四氫呋喃二氧六環(huán)吡啶甲苯鹽酸曲馬多異丙醇二氧六環(huán)硫酸依替米星二氯甲烷胞膦膽堿鈉甲醇與丙酮泛昔洛韋二氯甲烷甲醇乙酸乙酯司帕沙星甲苯吡啶氯仿10/273品種殘留溶劑鹽酸昂丹司瓊甲苯丙酮鹽酸塞氯匹定甲苯非洛地平異丙醚馬來酸依那普利乙腈磷酸川芎嗪乙醇與丙酮奧美拉唑二氯甲烷乙腈甲醇與丙酮鹽酸氨溴索甲醇與丙酮穿琥寧吡啶11/273本版藥典（二部）在確保安全性前提下，將熱原修改為細(xì)菌內(nèi)毒素品種有73個(gè)品種，增訂細(xì)菌內(nèi)毒素檢驗(yàn)品種有112個(gè)，細(xì)菌內(nèi)毒素判定標(biāo)準(zhǔn)由“不得過…”修訂為“應(yīng)小于…”，防止肉眼觀察不確定性。另外，42個(gè)品種刪除異常毒性；30個(gè)品種刪除降壓物質(zhì)。12/273三、擴(kuò)大HPLC在多組分原料及制劑中應(yīng)用，重點(diǎn)加強(qiáng)品種要求本版藥典（二部）有223個(gè)品種采取HPLC方法取代傳統(tǒng)容量法或紫處法或生物檢定法。比如鹽酸小檗堿片與膠囊含量測定原來用滴定法，各種生物堿均可參加滴定反應(yīng)，本版藥典修訂為HPLC法，可準(zhǔn)確測定小檗堿含量；酸酸潑尼松片含量測定原采取紫外法，難以區(qū)分結(jié)構(gòu)類似物質(zhì)，修訂為HPLC方法大大提升了方法專屬性。氯霉素、羅紅霉素、克拉霉素與慶大霉等各種抗生素原含量測定方法采取微生物檢定法，本版藥典（二部）改用HPLC法，3種氨基糖苷類采取蒸發(fā)光散射檢測器。13/273本版藥典（二部）品種正文中近30種復(fù)方制劑，其中18種已采脾HPLC方法。HPLC方法不但提升了方法專屬性，而且簡化了試驗(yàn)過程。比如復(fù)方磺胺甲唑制劑由磺胺甲唑與甲氧芐組成，原條用計(jì)算分光光度法，現(xiàn)修訂為HPLC法；雙唑泰栓由甲硝唑、克霉唑與醋酸氯己定組成復(fù)方制劑，原含量測定方法為滴定法、UV法與滴定法和UV組合三個(gè)方法分別測定，方法繁瑣且干擾原因多，現(xiàn)修訂為HPLC方法，在一個(gè)色譜條件下能有效分離三個(gè)組分；異福酰胺片（膠囊），采取等度HPLC方法能有效分離三種組分及降解產(chǎn)物醌式利福平，確保方法準(zhǔn)確性。14/273

另外，本版藥典有針對(duì)性地對(duì)61個(gè)難溶藥品增訂溶出度檢驗(yàn)；對(duì)于上浮膠囊，采取溶出度一法（轉(zhuǎn)籃法）和二法（漿法）時(shí)可用沉降藍(lán)方法；原采取2片加入到至同一溶出杯方法修訂為1片，如三唑片、溴吡斯明片和鹽酸哌替啶片等，并經(jīng)過修訂檢測方法使檢測靈敏度滿足溶出物檢測要求。18個(gè)小劑量藥品增訂含量均勻度檢驗(yàn)。70個(gè)原料藥增訂專屬性紅外判別。15/273四、進(jìn)步實(shí)現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)科學(xué)與規(guī)范性狀規(guī)范包含著色片不再描述詳細(xì)顏色，如復(fù)方甲苯咪唑片原為粉紅色片，現(xiàn)描述為著色片；將過分色包含在顏色描述中，如“本品為白色或淺黃色顆粒…”，規(guī)范為白色至淺黃色顆粒，防止用“或”引發(fā)過分顏色缺失而造成結(jié)果誤判；膠囊性狀統(tǒng)一描述內(nèi)容物；栓劑不描述形狀；可溶與混懸型顆粒劑等描述在本品性狀中，以此判斷是否進(jìn)行熔化性檢驗(yàn)。16/273實(shí)事求是地刪除了試驗(yàn)室難以操作檢測項(xiàng)目，如溶點(diǎn)過高并同時(shí)溶融分解藥品不再進(jìn)行溶點(diǎn)測定（如乙酰唑胺、鹽酸丙卡巴肼、硫酸雙肼屈嗪、鹽酸左旋咪唑、氫化可松等），有些復(fù)鹽，在過加熱過程中出現(xiàn)多峰現(xiàn)象如環(huán)吡酮胺，即出現(xiàn)三個(gè)吸收峰，不宜進(jìn)行熔點(diǎn)測定，故刪去此項(xiàng)目；刪去一些檢驗(yàn)人員嗅有害氣體判別試驗(yàn)，如甘油，刪去丙稀醛刺激性臭氣，用專屬性強(qiáng)紅外判別代替；對(duì)規(guī)格進(jìn)行了規(guī)范，如亞葉酸鈣以亞葉酸計(jì)，磷酸苯丙哌啉以苯丙哌啉計(jì)；愈加明確了一些制劑名稱，如靜脈輸液中，…氯化鈉注射液或…葡萄糖注射液以防止臨床不宜人群誤用。輔料設(shè)置專欄。17/273《中國藥典》二部附錄方法通則主要增修訂內(nèi)容18/273紫外-可見分光光度法1、術(shù)語紫外-可見分光光度法，吸光度2、儀器校正吸光度準(zhǔn)確度λ(nm)235257313350124.5±1%144.0±1%48.62±1%106.6±1%123.0-126.0(±1.2%)142.5-146.0(±1.%)47.0-50.3(±3.5%)105.5-108.5(±

1.5%)19/2733、對(duì)溶劑要求、純度，截止使用波長4、狹縫寬度小于波帶半高寬1/10，以不減不吸光度為準(zhǔn)5、溶液pH值對(duì)吸收影響6、計(jì)算分光光度法普通不宜用作含量測定。7、比色法作為測定法之一合并于本法中20/273紅外分光光度法1、波數(shù)精度由-4000cm-1±4cm-1和4000-cm-1±8cm-1

改為~1000cm-1±1cm-1和~3000cm-1±1cm-1

2、分辨率1583-1589cm-1>12%T2851-2870cm-1>18%T3、同一化合物收入不一樣卷次，以后卷圖譜為準(zhǔn)，前卷圖譜僅作參考21/2734、多晶問題（1）要求樣品前處理方法（2）當(dāng)未要求藥用晶型時(shí)，可用適當(dāng)溶劑重結(jié)晶，或用對(duì)照品平行處理后測定5、制劑紅外判別（1）品各正文中要求預(yù)處理方法（2）輔料無干擾，與原料藥標(biāo)準(zhǔn)圖比對(duì)（3）如輔料干擾不能完全消除，在指紋區(qū)可要求3-5個(gè)待測成份特征吸收峰（cm-1），其誤差應(yīng)小于0.5%。22/273薄層色譜一、儀器與材料1、固定相或載體粒徑10~40μm→5~40μm2、噴霧器、顯色劑與熒光檢測二、操作方法1、點(diǎn)樣點(diǎn)樣直徑2~4μm，點(diǎn)間距1.0~2.0cm2、展開單向、雙向、屢次3、薄層掃描（刪去）三、系統(tǒng)適用性試驗(yàn)（新增）1、檢測靈敏度程度對(duì)照溶液再經(jīng)適當(dāng)稀釋，應(yīng)顯示清楚斑點(diǎn)23/2732、比移值判別，雜質(zhì)定位3、分離度待測物中難分離物質(zhì)對(duì)應(yīng)能清楚分離判別待測對(duì)照品與結(jié)構(gòu)相同參考物應(yīng)分離雜質(zhì)檢驗(yàn)雜質(zhì)對(duì)照品與待測物主成份應(yīng)分離四、測定法（新增）判別同濃度對(duì)照品溶液顏色與位置應(yīng)一致斑點(diǎn)大小與顏色深淺也應(yīng)大致相同雜質(zhì)檢驗(yàn)雜質(zhì)對(duì)照品、本身對(duì)照雜質(zhì)斑點(diǎn)數(shù)、單個(gè)雜質(zhì)量、雜質(zhì)總量（預(yù)計(jì)）五、檢視（新增）本色、顯色、熒光、熒光猝滅等24/273高效液相色譜法1、色譜柱：柱性能（載體形狀、粒徑、孔徑、表面積等、化學(xué)修飾），手性柱2、檢測器：UV、F、DR、EC、ELS、MS等采用ELSD時(shí)，由試驗(yàn)決定是否需要進(jìn)行對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換3、系統(tǒng)適用性試驗(yàn)（1）難分離物質(zhì)正確分離度（2）柱效4、拖尾因子0.95<T

<1.05峰高法定量25/2735、明確了雜質(zhì)測定中準(zhǔn)確積分涵義C<0.5%,RSD<10%0.5%≤C≤2%,RSD<5%C＞2%,RSD<2%6、在加校正因子本身對(duì)照法中，明確了相對(duì)于主成份相對(duì)保留時(shí)間，用于要求雜質(zhì)定位，并與校正因子一起載入品種正文中。26/273干燥失重測定法恒溫減壓干燥條件：溫度60℃，壓力<20mmHg27/273熾灼殘?jiān)鼨z驗(yàn)法明文要求，當(dāng)供試品分子中含有堿金屬或氟元素時(shí)，應(yīng)使用鉑坩堝。28/273溶液顏色檢驗(yàn)法增加了序言溶液顏色反應(yīng)純度無色顏色與純?nèi)軇┫嗤瑤缀鯚o色供試液淺于用水稀釋一倍后對(duì)應(yīng)一號(hào)標(biāo)準(zhǔn)比色液顏色。29/273注射液中不溶性微粒檢驗(yàn)法1、名稱：>50μm澄明度可見異物2~50μm不溶性微粒不可見微粒2、光阻法和顯微鏡法檢驗(yàn)結(jié)論不一樣時(shí)，以后者為準(zhǔn)。3、取樣體積5ml或隨容器標(biāo)示體積決定4、環(huán)境及溶劑10ml,≥10μm，<10粒；≥25μm，<2粒光阻法50ml，≥10μm，<20粒；≥25μm，<2粒顯微鏡法5、增加小針劑檢驗(yàn)≥25ml5ml×3<25ml合并數(shù)支使總體積大于20ml5ml×3

或逐支檢驗(yàn)（取樣體積以不吸入氣泡為限）30/2736、供試品數(shù)量3支以上7、判定光阻法：>100ml，>10μm≤25粒/ml，

>25μm≤3粒/ml≤100ml>10μm≤6000粒/支，

>25μm≤600粒/支（含無菌粉針）顯微鏡法：>100ml，>10μm≤12粒/ml，

>25μm≤2粒/ml≤100ml>10μm≤3000粒/支，

>25μm≤300粒/支（含無菌粉針）31/273滲透壓摩爾濃度測定法1、深入明確了滲透壓與滲透壓摩爾濃度關(guān)系2、明確了冰點(diǎn)下降法測定滲透壓摩爾濃度依據(jù)3、定義：mOsmol/Kg濃度由每升溶液中溶解溶質(zhì)克數(shù)改為每千克溶劑中溶解溶質(zhì)克數(shù)4、由一點(diǎn)校正法改為二點(diǎn)校正法5、制劑處方中氯化鈉，若其作用主要為調(diào)整制劑滲透壓，則可經(jīng)過毫滲摩爾測定取代氯化鈉含量測定32/273可見異物檢驗(yàn)法1、名稱澄明度，>50μm2、測定方法（1）燈檢法照度無色注射劑1000~1500Lx透明塑料容器或有色注射劑~3000Lx混懸液4000Lx視力好于4.9矯正后好于5.0①注射液取樣數(shù)20支判定未見可見異物為合格如一支中檢出異物，可另取20支，均不得檢出異物33/273（2）光散射法取樣數(shù)與判定同燈檢法3、可見異物（白點(diǎn)、塊狀物等）特殊異物（金屬屑、玻璃屑、色塊、粗纖維等）34/2734、《澄明度檢驗(yàn)細(xì)則和判斷標(biāo)準(zhǔn)》與《中國藥典》比較《澄明度檢驗(yàn)細(xì)則和判斷標(biāo)準(zhǔn)》《中國藥典》項(xiàng)目名稱澄明度檢驗(yàn)可見異物檢驗(yàn)光照度要求無色1000~1500Lx有色~3000Lx無色1000~1500Lx有色~3000Lx混懸4000Lx僅檢驗(yàn)色塊、外來異物人員條件遠(yuǎn)、近距離視力≥4.9不包含矯正后視力遠(yuǎn)、近距離視力≥4.9矯正后視力≥5.035/273《澄明度檢驗(yàn)細(xì)則和判斷標(biāo)準(zhǔn)》《中國藥典》項(xiàng)目名稱澄明度檢驗(yàn)可見異物檢驗(yàn)檢視距離20~25厘米明視距離，通常25厘米供試品數(shù)量200支20支檢驗(yàn)方法3~6支/次，15~21秒/次未要求程度要求出廠時(shí)≤5%效期內(nèi)≤7.5%不得檢出；如僅檢出1支，另取20支復(fù)檢，不得檢出。主要用水針進(jìn)行比較。經(jīng)典燈檢法不會(huì)被淘汰，光散射法必將被廣泛應(yīng)用。36/273溶出度測定法1、適合用于難溶性固體制劑，增加顆粒劑溶出度檢驗(yàn)2、儀器裝置材料：不應(yīng)有顯著吸附和溶出網(wǎng)篩：絲徑由0.254mm改為0.25mm網(wǎng)孔0.425mm改為0.40mm轉(zhuǎn)速：刪去50~200rpm,改為各論要求轉(zhuǎn)速±4%取樣點(diǎn)位置：轉(zhuǎn)籃頂端與液面中點(diǎn)，距溶出杯內(nèi)壁10mm處，與原要求差2~3mm溶劑：溶出介質(zhì)比溶出液更適當(dāng)，脫氣，pH±0.0537/2733、測定法：品種各論中應(yīng)明確溶出條件，通常出介質(zhì)為900ml取樣時(shí)間45′程度為標(biāo)示量70%，并要求取出溶出液體積如大于1%溶出介質(zhì)體積時(shí)，應(yīng)補(bǔ)足或校正計(jì)算。4、過濾：取消原0.8μm濾膜，改為“用適當(dāng)微孔濾膜過（自動(dòng)采樣濾頭1~10μm）”5、處方或工藝不一樣同品種，可并列溶出條件6、極難溶物溶出條件（1）加大轉(zhuǎn)速、增加時(shí)限或降低程度要求（2）加表面活性劑，如SDS或吐溫80＜1%（3）加有機(jī)溶劑，如乙醇、異丙醇等＜5%7、小規(guī)格藥劑每杯仍以1片為宜，低吸光度溶出液可改用長光路吸收池，刪支“取用量如為2片或2片以上時(shí)…..”。38/2738、囊殼干擾空白讀數(shù)＞標(biāo)示量25%方法無效空白讀數(shù)＜標(biāo)示量2%無須校正9、結(jié)果與判斷合格：6（6Q）6（Q＞1~2＞Q-10%，6（1~2Q，Q-10%＞1＞Q-20%），+6復(fù)試12（3＜Q，Q-10%＞1＞Q-20%，Q平均≥Q）不合格：6（1＜Q-20%）6（2＜Q-10%）6（3＜Q）6（Q平均＜Q）12（4＜Q）12（2＜Q-10%）12（1＜Q-20%）12（Q平均＜Q）

39/273含量均勻度檢驗(yàn)法1、計(jì)算方法CHP計(jì)量法BP/EURP計(jì)數(shù)法USP計(jì)量-計(jì)數(shù)混正當(dāng)2、適用范圍小劑量口服固體制劑，粘稠型注射劑，注射用無菌粉末、透皮貼劑；栓劑、單劑包裝口服混懸劑、單劑量包裝眼用、耳用、鼻用混懸劑、固體或半固體制劑。每片≤10mg（主藥含量＜片重5%）其它制劑≤2mg（主藥含量＜單劑量2%）增加每劑≤25mg（有效濃度與毒性濃度較靠近或混勻工藝較困難品種）40/273片劑脆碎度檢驗(yàn)法對(duì)于形狀或大小在檢驗(yàn)時(shí)形成不規(guī)則滾動(dòng)或由特殊工藝生產(chǎn)片劑而不適于本法檢驗(yàn)時(shí)，可不進(jìn)行本項(xiàng)檢驗(yàn)。41/273片劑通則一、劑通則介紹片劑是制劑中最常見品種最多劑型。在各國藥典中都有收載。定義：片劑系指藥品與適宜輔料混勻壓制成圓片狀或異型片狀固體制劑。分類：片劑以口服普通片為主，另外，：中國藥典收載片劑還有含片、舌下片、口腔貼片、咀嚼片、分散片、可溶片、泡騰片、陰道片及陰道泡騰片、緩釋片、控釋片、腸溶片中國藥典暫未收載片劑：口崩片、脈沖片。冊去有速釋片…..42/273口服普通片：大多數(shù)片劑包含非包衣片、包衣片（薄膜衣片、糖衣片）均屬于口服普通片，應(yīng)符合片劑項(xiàng)下相關(guān)要求：重量差異、崩解時(shí)限、含量、含量均勻度、溶出度、相關(guān)物質(zhì)、微生物程度、包衣片在必要時(shí)進(jìn)行殘留溶劑檢驗(yàn)（介釋）43/273二、外觀（中控或內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)）應(yīng)完整、光潔、色澤均勻，有適宜硬度和耐磨性，非包衣片除另有要求外（如泡騰片、冷凍干燥成型片劑….）進(jìn)行片劑脆碎度檢驗(yàn)和硬度檢驗(yàn)。片劑脆碎度檢驗(yàn)法：見中國藥典附錄XG片重為≤0.65g者，取總量約為6.5g。片重＞0.65g者，取10片，25Rpm,4′減失重量不得＞1%，且不得檢出斷裂、龜裂或粉碎片子。可復(fù)查2~3次，但平均減失重量不得＞1%。44/273附：片劑外觀檢驗(yàn)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)（參考用）項(xiàng)目/標(biāo)準(zhǔn)合格品（內(nèi)控）優(yōu)級(jí)品備注片劑外觀外觀完整、光潔、片型薄厚一致，色澤均勻一致，字跡圖案清楚外觀完整、光亮細(xì)膩、片型薄厚一致，色澤均勻一致，字跡圖案清楚每批取800片，用平板法黑點(diǎn)異物80~100目黑點(diǎn)不得超出14片/800片80~100目黑點(diǎn)不得超出10片/800片麻面不得超出14片/800片不得超出10片/800片掉蓋不得超出1片/800片不得超出1片/1250片45/273項(xiàng)目/標(biāo)準(zhǔn)合格品（內(nèi)控）優(yōu)級(jí)品備注碎片不得超出2片/800片不得超出1片/800片磕邊小于2mm，不得超出14片/800片小于2mm，不得超出10片/800片粘結(jié)不得超出14片/800片不得超出10片/800片綜合（總?cè)秉c(diǎn)）不得超出14片/800片不得超出10片/800片46/2732、重量差異概念：指定片重：理論投料量計(jì)算理論片重。顆粒平均片重：按顆粒總重量平均片重。按指定片重計(jì)算重量差異為廠定標(biāo)準(zhǔn)。按平均片重計(jì)算重量差異為法定標(biāo)準(zhǔn)。相對(duì)而言，理論片重是合理，因?yàn)轭w粒收得量計(jì)算平均片重沒有減除有形損耗（機(jī)器粘附、丟灑部分）和無形損耗（隨氣流排除部分）。不過以往片劑輔料中慣用輔料為玉米淀粉，水分在6~14%之間通常為10~11%，而干顆粒水分通常在1~2.5%之間，為此按理論片重計(jì)算會(huì)造成片重偏高。現(xiàn)在輔料應(yīng)用已發(fā)生改變，所以按理論片重計(jì)算是較合理。糖衣片須檢驗(yàn)片芯符合重量差異后方可包衣，包糖衣后不再檢驗(yàn)重量差異。薄膜包衣后檢驗(yàn)重量差異，應(yīng)符合要求。47/273藥典要求主藥規(guī)格＜10mg片劑須作含量均勻度。凡作含量均勻度檢驗(yàn)片劑可不作重量差異檢驗(yàn)。3、崩解時(shí)限片劑除另有要求外，取6片，分別置吊籃玻璃管中，在37℃±1℃水溫測定，15′內(nèi)應(yīng)全部崩解，如有1~2片崩解不完全，可復(fù)測2次。總共18片中超出要求不得多于2片。從95版開始，不加檔板，篩網(wǎng)內(nèi)徑為2mm，為10目篩網(wǎng)。薄膜包衣片亦可改在鹽酸溶液（9→1000）中進(jìn)行檢驗(yàn)，30分鐘內(nèi)全部崩解，如有1片不能完全崩解，可復(fù)測一次，均應(yīng)符合要求。（當(dāng)前薄膜包衣材料已采取水溶性或水分散性包衣材料，可用水作介質(zhì)）。凡要求進(jìn)行溶出度檢驗(yàn)片劑，可不作崩解時(shí)限檢驗(yàn)。48/273三、詳細(xì)介紹含片：系指含于口腔中，藥品遲緩溶解產(chǎn)生持久局部作用片劑。含片中藥品應(yīng)是易溶，主要起局部消炎、殺菌、收斂、止痛或局部麻醉作用，除另有要求外，30分鐘內(nèi)應(yīng)全部崩解。藥典要求進(jìn)行釋放度檢驗(yàn)，但附錄上未能提供測定方法、取樣時(shí)間點(diǎn)及標(biāo)準(zhǔn)，中國藥典從實(shí)際需要出發(fā)，給予刪除。舌下片：系指置于舌下能快速溶化，藥品經(jīng)舌下粘膜吸收發(fā)揮全身作用片劑。除另有要求外，各片均應(yīng)在5分鐘內(nèi)全部崩解或溶化（片將融化改為溶化）。舌下片中藥品與輔料應(yīng)是易溶性，主要用于急癥治療，最慣用如硝酸甘油片屬于舌下片，作為血管擴(kuò)張藥，治療心絞痛等急癥，除符合片劑項(xiàng)下相關(guān)要求外，要求2分鐘內(nèi)起鎮(zhèn)痛作用鹽酸丁諾啡舌下片，也已收載入中國藥典。49/273可溶片（片劑通則中新增內(nèi)容）：系指能溶解于水非包衣片或薄膜包衣片。可溶片按崩解時(shí)限檢驗(yàn)法檢驗(yàn)，應(yīng)于3分鐘內(nèi)全部崩解并溶化。如有1片不能完全崩解，應(yīng)另取6片復(fù)試，均應(yīng)符合要求。除另有要求外，水溫為15℃~25℃。關(guān)于口腔崩解片：本品作為普通片補(bǔ)充，主要處理無水條件下，于口腔中（舌面）快速崩解，隨吞咽動(dòng)作進(jìn)入消化道，在口腔內(nèi)應(yīng)無粘膜吸收，體內(nèi)行為與普通片一致，處理老年人吞咽困難及工作奏快、缺水條件下仍可能用特點(diǎn)。口崩片普通要求主藥含量較小為宜，大部分采取直接壓片法、凍干法等所以硬度和耐磨度較差。為了遮蓋苦味也有采取明膠、微晶纖維素等包裹主藥成小顆粒掩蓋不適口味，再加甘露醇、矯味劑、崩解劑、潤滑劑等以較小壓力直接壓片。50/273藥典暫不收載是鑒于當(dāng)前尚無適當(dāng)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)作為崩解度測定方法，通常要求：1）口感好，在口腔中20-30秒以內(nèi)崩解后無粗糙沙礫感。2）采取改進(jìn)崩解度測定法溶出度測定通常采取常規(guī)溶出度測定法檢驗(yàn)，同普通片。鑒于口崩片特點(diǎn)，在進(jìn)行穩(wěn)定性考查時(shí)必須將“口崩”項(xiàng)作為檢察項(xiàng)目，加以確證。溶出度測定法參考：JP溶出度改良法、靜置試管法、燒杯法、崩解儀法、濾紙法、潤濕崩散法、其它方法1、靜置試管法：玻管（直徑1.5cm）、投入藥片、加入37℃水2ml，靜置，觀察崩散情況。51/2732、燒杯法：燒杯一個(gè)（10ml，直徑2cm，高35cm)加入藥片,加入3ml，37℃水，計(jì)時(shí),60s倒入復(fù)以1號(hào)篩燒杯中，應(yīng)完全經(jīng)過.必要時(shí)再加入5ml水快速?zèng)_洗，同法檢驗(yàn)6片均應(yīng)全部經(jīng)過篩網(wǎng)崩解儀法：采取中國藥典片劑崩解儀改造，降低移動(dòng)速度，提升篩網(wǎng)細(xì)度。BP采取崩解儀法：NMT3分鐘。關(guān)于脈沖片：脈沖片屬于遲釋制劑一個(gè)系指口服后不馬上釋放藥品片劑，而在某種條件下如在體液中經(jīng)過一定時(shí)間或一定pH值或一些酶作用下，一次或?qū)掖瓮蝗会尫潘幤菲瑒Ｈ缧呐K病患者在半液易發(fā)病，睡前服用后可預(yù)防午夜或凌晨發(fā)病。國外報(bào)道FDA同意上52/273市哌甲酯脈沖片有精神興奮作用，屬于脈沖釋藥技術(shù)。每日早晨服用后4小時(shí)有一個(gè)釋藥高峰，方便學(xué)生用藥。53/273

制藥用水中總有機(jī)碳測定法（新增）

TOC基本概念TOC—總有機(jī)碳DOC—可溶性有機(jī)碳NPOC—難氣洗有機(jī)碳POC—易氣洗有機(jī)碳VOC—揮發(fā)性有機(jī)碳TIC（IC）—無機(jī)碳TC—總碳，是TOC和IC總和54/273水中有機(jī)碳起源自然界：動(dòng)植物腐爛工業(yè)排放：石化，造紙，有機(jī)試劑農(nóng)業(yè)：殺蟲劑，化肥家庭：清洗劑，人畜排泄物55/273無機(jī)碳IC=CO2（水溶液）+HCO3-+CO32-（pH＜4.3）（pH＞10.3）CO2（液）二氧化碳水溶液HCO3-碳酸氫根CO32-碳酸根56/273USP及EP對(duì)水中TOC規(guī)范USP測試方法采取日期硫酸根1840鈣離子 1840二氧化碳 1850氯離子 1890銨離子 1890易氧化物 1890重金屬 1900總固體量 1947大腸菌 1947pH值 1970內(nèi)毒素細(xì)菌 198357/273USP對(duì)水要求總有機(jī)碳總有機(jī)碳測定被確認(rèn)為對(duì)純化水（PW）和注射用水（WFI）可行測定方法，并被引入U(xiǎn)SP這個(gè)測定方法自1996年11月15日有效。從96/11/15起，TOC方法和易氧化物方法并存，可使用其中任何一個(gè)。58/273USP第23版中純化水注射用水總有機(jī)碳方法于1998年5月15日起被正式起用USP-23版第八增版正式去除了易氧化物法59/273USP對(duì)水專題篇改進(jìn)從前測試現(xiàn)在測試pH值1998年5月15日被刪除內(nèi)毒素細(xì)菌（BET）被保留鈣電導(dǎo)率（1996年11月15日生效）硫酸根氯銨二氧化碳易氧化物1998年5月15日起被刪除（必測TOC）重金屬刪除總固體刪除大腸菌刪除60/273歐洲藥典（EP）采取了“快速、貫施”政策于1999年3月，EP第2.2.44章是采取了TOC方法TOC方法將于今年七月正式生效并將載入今年七月出版EP版EPTOC測試要求：對(duì)注射用水必須使用TOC法對(duì)純化水可用TOC法，也可有易氧化物法61/273TOC方法優(yōu)越性準(zhǔn)確-氧化完全，由人或環(huán)境產(chǎn)生干擾小簡單-操作方法簡單自動(dòng)化-可進(jìn)行在線自動(dòng)監(jiān)測管理科學(xué)化TOC法對(duì)TOC測定儀要求必須使用經(jīng)校準(zhǔn)測定儀測定儀必須得經(jīng)過系統(tǒng)適宜性試驗(yàn)62/273注射用水純化水TOC測試頻率一、隸屬方面二、水質(zhì)量方面1、取與易氧化物1、選擇在線一樣測試頻率 2、水系統(tǒng)里含有代表2、通常是每一周性部位一次或每個(gè)月一次 3、應(yīng)基于水系統(tǒng)工程3、對(duì)全部采樣點(diǎn)進(jìn)行驗(yàn)證和水質(zhì)控制4、對(duì)有代表性采樣點(diǎn)進(jìn)行不停監(jiān)測63/273注射用水純化水TOC測試點(diǎn)“用來進(jìn)行質(zhì)量屬性試驗(yàn)在線儀器可接收性取決于在水系統(tǒng)哪個(gè)部位采樣。這些采樣點(diǎn)和對(duì)應(yīng)值必須反應(yīng)在用水質(zhì)量?！痹囼?yàn)必須含有代表性，能代表全部使用點(diǎn)！64/273TOC測試技術(shù)全部TOC測定基本原理氧化物測定↓↓有機(jī)物→CO2→CO2一、氧化技術(shù)二、CO2測定技術(shù)1、高溫氧化1、非分散紅外探測（NDIR）2、加熱過硫氧化2、直接電異率探測3、紫外線加過硫氧化3、薄膜電異率探測4、紫外線氧化5、紫外線加二氧化鈦氧化65/273版《中國藥典》藥品微生物檢驗(yàn)修訂內(nèi)容及背景

66/273

年版藥典微生物程度標(biāo)準(zhǔn)修訂情況

67/273一、年版微生物程度標(biāo)準(zhǔn)制訂標(biāo)準(zhǔn)

：細(xì)菌數(shù)、酵母數(shù)和霉菌數(shù)按劑型制訂；控制菌（致病菌）按給藥路徑制訂。版：均按給藥路徑制訂。

68/273二、年版微生物程度標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用

本版藥典明確指出：藥品生產(chǎn)、貯存、銷售過程中檢驗(yàn)，原料及輔料（中藥品標(biāo)準(zhǔn)復(fù)核，考查藥品質(zhì)量及仲裁等，除另有要求外，其微生物程度均以本標(biāo)準(zhǔn)為依據(jù)。

69/273三、年版微生物程度標(biāo)準(zhǔn)控制項(xiàng)目

雜菌數(shù)：細(xì)菌數(shù)霉菌和酵母菌數(shù)控制菌（致病菌）：大腸埃希菌

大腸菌群沙門菌

銅綠假單胞菌

金黃色葡萄球菌

梭菌

70/273四、年版微生物程度標(biāo)準(zhǔn)分類

制劑通則、品種項(xiàng)下要求無菌制劑及標(biāo)示無菌制劑

71/273五、制劑通則項(xiàng)下微生物程度要求

化學(xué)藥制劑通則項(xiàng)下微生物程度要求無菌檢驗(yàn)：注射劑、植入劑、沖洗劑。

標(biāo)準(zhǔn)性要求：丸劑、口服片劑、膠囊、顆粒劑72/273六、品種項(xiàng)下微生物程度要求

輔料：乳糖、淀粉、糊精、玉米朊、精制玉米油等。

純化水：微生物程度

取本品，采取薄膜過濾法處理后，依法檢驗(yàn)（附錄XIJ），細(xì)菌、霉菌和酵母菌總數(shù)每1ml不得過100個(gè)。

注射用水：微生物程度取本品最少200ml，采取薄膜過濾法處理后，依法檢驗(yàn)（附錄XIJ），細(xì)菌、霉菌和酵母總數(shù)每100ml不得過10個(gè)。

73/273藥典微生物程度檢驗(yàn)法修訂情況74/273微生物程度檢驗(yàn)法起草指導(dǎo)思想：完善檢驗(yàn)法。增加試驗(yàn)可操作性。使方法更具科學(xué)性，確保檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確性。與國際接軌。75/273增、修訂內(nèi)容（1）-總則1操作環(huán)境潔凈度：微生物程度檢驗(yàn)應(yīng)在環(huán)境潔凈度10000級(jí)下局部潔凈度100級(jí)單向流空氣區(qū)域內(nèi)進(jìn)行。檢驗(yàn)全過程必須嚴(yán)格恪守?zé)o菌操作，預(yù)防再污染。潔凈度定時(shí)檢測：單向流空氣區(qū)域、工作臺(tái)面太環(huán)境應(yīng)定時(shí)按《醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）懸浮粒子、浮游菌、和沉降菌測試方法》現(xiàn)行國家標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行潔凈度驗(yàn)證。76/273增、修訂內(nèi)容（1）-總則2霉菌、酵母菌培養(yǎng)溫度為23~28℃。結(jié)果匯報(bào)：以1g、1ml、10g、10ml或10cm2為單位匯報(bào)。77/273增、修訂內(nèi)容（2）-檢驗(yàn)量隨機(jī)抽取不少于檢驗(yàn)量（兩個(gè)以上最小包裝單位）3倍。珍貴，微量樣品檢驗(yàn)量能夠酌減。要求檢驗(yàn)沙門菌供試品其檢驗(yàn)量應(yīng)增加10g或10ml。78/273增修訂內(nèi)容（3）-供試液制備1

表面活性劑、中和劑或滅活劑：應(yīng)證實(shí)其有效性及對(duì)微生物生長和存活無影響。供試液從制備至加入檢驗(yàn)用培養(yǎng)基，不得超出1小時(shí)。供試液制備若需用水浴加熱時(shí)，溫度不應(yīng)超出45℃。供試液體積：100ml。79/273增、修訂內(nèi)容（3）供試液制備2供試品分類液體供試品固體、半固體或黏稠液性供試品需用特殊供試液制備方法供試品非水溶性供試品膜劑供試品腸溶及結(jié)腸溶制劑供試品氣霧劑、噴霧劑供試品具抑菌活性供試品80/273增、修訂內(nèi)容（3）供試液制備3非水溶性供試品：增加“十四烷酸異丙酯法”。結(jié)腸溶制劑供試品：用pH7.6無菌磷酸鹽緩沖液溶解。具抑菌活性供試品：增加方法可操作性。81/273增、修訂內(nèi)容（4）——滅菌培養(yǎng)基及稀釋劑等滅菌：采取驗(yàn)證合格滅菌程序進(jìn)行滅菌。82/273增、修訂內(nèi)容（5）——稀釋劑稀釋劑：pH7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖溶液pH6.8無菌磷酸鹽緩沖液pH7.6無菌磷酸鹽緩沖液83/273增、修訂內(nèi)容（6）-細(xì)菌、霉菌及酵母菌計(jì)數(shù)計(jì)數(shù)方法：平皿法、薄膜過濾法按已驗(yàn)證計(jì)數(shù)方法進(jìn)行供試品細(xì)菌、霉菌及酵母菌菌數(shù)測定。84/273細(xì)菌、霉菌、酵母菌計(jì)數(shù)-平皿法培養(yǎng)時(shí)間：必要時(shí)，可適當(dāng)延長培養(yǎng)時(shí)間至5~7天。點(diǎn)計(jì)霉菌和酵母菌數(shù)。85/273細(xì)菌、霉菌、酵母菌計(jì)數(shù)-薄膜過濾法方法菌數(shù)匯報(bào)規(guī)則86/273增、修訂內(nèi)容（7）-控制菌檢驗(yàn)（1）修訂特點(diǎn)：降低篇幅不作詳細(xì)生化試驗(yàn)要求增加判定方法適應(yīng)微生物分類改變要求增加控制菌檢驗(yàn)項(xiàng)87/273增、修訂內(nèi)容（7）-控制菌檢驗(yàn)（2）修訂檢驗(yàn)法大腸埃希菌檢驗(yàn)法、銅綠假單胞菌檢驗(yàn)法、沙門菌檢驗(yàn)法、金黃色葡萄球菌檢查法。新增檢驗(yàn)法大腸菌群檢驗(yàn)法、梭菌檢驗(yàn)法。88/273微生物程度檢驗(yàn)用菌種、菌液制備及計(jì)數(shù)方法菌種要求：傳代次數(shù)，保藏技術(shù)制備方法：液體培養(yǎng)物直接稀釋法細(xì)菌標(biāo)準(zhǔn)濃度比濁法計(jì)數(shù)方法：平皿法菌液使用期89/273無菌檢驗(yàn)法修訂情況90/273無菌檢驗(yàn)法特點(diǎn)藥典附錄無菌檢驗(yàn)法較有較大改動(dòng)；增加試驗(yàn)可操作性；方法更具科學(xué)性，提升檢出率，確保檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確性；縮小與先進(jìn)國家藥典無菌檢驗(yàn)法差異。91/273增修訂內(nèi)容（1）—無菌檢驗(yàn)試驗(yàn)環(huán)境

環(huán)境：試驗(yàn)應(yīng)在潔凈度10000級(jí)下局部潔凈度100級(jí)單項(xiàng)流空氣區(qū)域內(nèi)或隔離系統(tǒng)中進(jìn)行。

監(jiān)測：應(yīng)定時(shí)按《醫(yī)藥工業(yè)潔凈（區(qū)）懸浮粒子、浮游菌和沉降菌測試方法》現(xiàn)行國家標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行潔凈級(jí)檢測。

隔離系統(tǒng)按相關(guān)要求進(jìn)行驗(yàn)證，其內(nèi)部環(huán)境潔凈潔凈度須符合無菌檢驗(yàn)要求。

92/273增修訂內(nèi)容（2）—無菌試驗(yàn)用培養(yǎng)基培養(yǎng)基命名

培養(yǎng)基裝量培養(yǎng)基適用性檢驗(yàn)：無菌性檢驗(yàn)，靈敏度檢驗(yàn)。培養(yǎng)基貯藏

93/273增修訂內(nèi)容（3）——稀釋液、沖洗液

0.1%蛋白胨水溶液

PH7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖液

94/273增修訂內(nèi)容（4）—滅菌

全部滅菌程序均應(yīng)驗(yàn)證，方可采取。預(yù)防滅菌不徹底或過渡滅菌。

95/273增修訂內(nèi)容（5）——無菌檢驗(yàn)方法驗(yàn)證

何時(shí)驗(yàn)證

驗(yàn)證用菌株選取擇及要求

驗(yàn)證方法

結(jié)果判斷

96/273增修訂內(nèi)容（6）——檢驗(yàn)數(shù)量

明確原“最低檢驗(yàn)量”是針對(duì)每種培養(yǎng)基。

修訂了大致積注射劑、抗生素原料藥、醫(yī)療器具批產(chǎn)品最低檢驗(yàn)數(shù)量。要求同一品種用直接接種法與薄膜過濾法檢驗(yàn)數(shù)量應(yīng)一致，實(shí)際上是增加了上市抽驗(yàn)樣品薄膜過濾法檢驗(yàn)數(shù)量。

各容器樣品裝量不夠接種兩種培養(yǎng)基，應(yīng)增加一倍檢驗(yàn)數(shù)量。

97/273增修訂內(nèi)容（7）——檢驗(yàn)量

另外要求了固體供試品檢驗(yàn)量。

采取直接接種法時(shí)，若每支（瓶）供試品裝量按要求足夠接種兩份培養(yǎng)基，則應(yīng)分別接種硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基和改良馬丁培養(yǎng)基，說明了檢驗(yàn)量比版增加了一倍。

薄膜過濾法檢驗(yàn)量應(yīng)不少于直接接種法總接種量，只要供試品特征允許，應(yīng)將全部容器內(nèi)全部內(nèi)容物過濾。

98/273增修訂內(nèi)容（8）——供試品無菌檢驗(yàn)（1）

檢驗(yàn)法選擇：要求只要供試品性狀允許，應(yīng)盡可能采取薄膜過濾法。

供試品處理：詳細(xì)描述了各類型供試品供試液制備法。

99/273增修訂內(nèi)容（8）——供試品無菌檢驗(yàn)（2）

檢驗(yàn)法：薄膜過濾法、直接接種法。

培養(yǎng)時(shí)間：版要求培養(yǎng)7天，版要求培養(yǎng)14天。

培養(yǎng)溫度：改良馬丁培養(yǎng)基置23~28℃培養(yǎng)。

100/273增修訂內(nèi)容（9）-結(jié)果判斷

以一次檢出為準(zhǔn),除非有證據(jù)充分證實(shí)檢出微生物非供試品本身所致，原檢驗(yàn)結(jié)果無效，可復(fù)試。修訂理由：操作環(huán)境、試驗(yàn)條件改進(jìn)；低污染供試品檢出率問題。復(fù)試。

101/273增修訂內(nèi)容（10）——無菌檢驗(yàn)法局限

本版藥典無菌檢驗(yàn)法指出：若供試品符合無菌檢驗(yàn)法要求，僅表明了供試品在該檢驗(yàn)條件下未發(fā)覺被微生物污染。

102/273鱟試劑與細(xì)菌內(nèi)毒素檢驗(yàn)法

103/273細(xì)菌內(nèi)毒素檢驗(yàn)相關(guān)理論及概念

細(xì)菌內(nèi)毒素鱟試劑鱟試劑與內(nèi)毒素反應(yīng)機(jī)理細(xì)菌內(nèi)毒素檢驗(yàn)104/273名詞解釋

細(xì)菌內(nèi)毒素檢驗(yàn)法

熱原檢驗(yàn)法

LALTAL105/2731、細(xì)菌內(nèi)毒素

細(xì)菌內(nèi)毒素與熱原關(guān)系熱原指臨床上能使哺乳類動(dòng)物產(chǎn)生熱原反應(yīng)物質(zhì)。細(xì)菌內(nèi)毒素革蘭氏陰性細(xì)菌細(xì)胞壁組成成份，含有各種生物活性，其化學(xué)結(jié)構(gòu)是脂多糖（LPS）。熱原與內(nèi)毒素關(guān)系在學(xué)術(shù)上仍有爭論，但在GMP條件下，，內(nèi)毒素是主要熱原物質(zhì)，能夠說無內(nèi)毒毒就無熱原，控制內(nèi)毒素就控制熱原。106/273細(xì)菌內(nèi)毒素定義改變過去一直認(rèn)為，細(xì)菌內(nèi)毒素起源于革蘭陰性細(xì)菌，但最近發(fā)覺非毒性革蘭陰性LPS結(jié)構(gòu)

全部內(nèi)毒素均為脂多糖（LPS），但并非全部脂多糖均為內(nèi)毒素，因?yàn)槠洳缓邢嚓P(guān)毒性。如：肽聚糖、葡聚糖。

107/273細(xì)菌內(nèi)毒素定義改變盡管對(duì)內(nèi)毒素，以及與LAL反應(yīng)物質(zhì)認(rèn)識(shí)有了很大改變，但最終并沒有改變作為當(dāng)前LAL試驗(yàn)基礎(chǔ)兩個(gè)標(biāo)準(zhǔn)。

1）內(nèi)毒素性與熱原性相關(guān)，家兔和LPL試驗(yàn)作為人類和炎癥反應(yīng)預(yù)測方法二者相關(guān)。

2）在注射劑生產(chǎn)環(huán)境下，經(jīng)過除外主要熱原物質(zhì)-內(nèi)毒素而得以排除熱原。

108/273細(xì)菌內(nèi)毒素生物活性致熱性

引發(fā)血液中粒細(xì)胞下降

激活凝血系統(tǒng)

血壓下降

引發(fā)淋巴細(xì)胞有絲分裂

與鱟試劑反應(yīng)

109/273細(xì)菌內(nèi)毒素特征

廣泛存在

非常穩(wěn)定

其疏水末斷非常易于本身或者與玻璃容器結(jié)合而聚集，而不是與水混合。

致熱活性高度不均一性

110/273細(xì)菌內(nèi)毒素參考品建立

不一樣細(xì)菌內(nèi)毒素對(duì)于鱟試劑反應(yīng)活性不一樣，為確保鱟試驗(yàn)平行性和重復(fù)性，要建立一個(gè)內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)作為試驗(yàn)中控制標(biāo)準(zhǔn)。

因?yàn)榇竽c桿菌內(nèi)毒素在天然內(nèi)毒素中致熱活性比較高，在各種細(xì)菌內(nèi)毒素對(duì)鱟試劑反應(yīng)靈敏性上處于中值位置，且其穩(wěn)定，可溶，所以普通都采取大腸桿菌內(nèi)毒素作為標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)毒素參考品。

111/273

標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)毒素與環(huán)境內(nèi)毒素

標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)毒素：指經(jīng)人工取提精制并經(jīng)生物效價(jià)測定細(xì)菌內(nèi)毒素，作為細(xì)菌內(nèi)毒檢驗(yàn)參考品。

標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)毒素包含參考標(biāo)準(zhǔn)品（RSE）、工作標(biāo)準(zhǔn)品（CSE）、其參考標(biāo)準(zhǔn)品又包含國際標(biāo)準(zhǔn)品（IS）和國家標(biāo)準(zhǔn)品（NS／RSE）。

112/273細(xì)菌內(nèi)毒素量值

80年代以前以重量作為內(nèi)毒素單位

1982年USP20引入以生物效價(jià)為量值內(nèi)毒素單位（EU）113/273環(huán)境內(nèi)毒素（EET）天然產(chǎn)生內(nèi)毒素，普遍存在于水、空氣中精制內(nèi)毒素與環(huán)境內(nèi)毒素差異：組成：精制毒素——脂、多糖環(huán)境內(nèi)毒素——脂、多糖、蛋白質(zhì)和雜質(zhì)致熱性：精制內(nèi)毒素——致熱性強(qiáng)環(huán)境內(nèi)毒素——致熱性較弱114/273細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品稀釋CP年版要求內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品溶解后國在旋渦混合器上混合15分鐘，以后每一步稀釋前地最少混合30秒，其它國家藥典也類似國求；含有兩極活性內(nèi)毒素分子在水中展現(xiàn)不均勻分布不按要求進(jìn)行旋渦混合會(huì)使所稀釋內(nèi)毒素效價(jià)偏低，造成靈敏度標(biāo)示偏高、陽性對(duì)照不凝等不正確試驗(yàn)結(jié)果充分振蕩后內(nèi)毒素疏水端在水相中均勻分布；若靜置一段時(shí)間，疏水端重新集成藏于器壁115/273世界上現(xiàn)存鱟種類鱟是一個(gè)海樣無脊椎動(dòng)物，藍(lán)色血液。種類以及分布：美洲鱟：北美洲東岸海域中國鱟：中國東南沿海南方鱟：泰國和馬來群島海域圓尾鱟：東南亞西部海域116/273世界上現(xiàn)存鱟種類3種亞洲東海岸1種北美大西洋沿岸117/273鱟試劑與分類鱟試劑：鱟血液變形細(xì)胞裂解物冷凍干燥制備而成鱟試劑種類：-依據(jù)鱟種類分：

?美洲鱟試劑（LAL）

?中國鱟試劑（TAL）

?圓尾鱟試劑（CAL）-依據(jù)檢驗(yàn)方法分：

?凝膠法鱟試劑和定量法鱟試劑-依據(jù)內(nèi)毒素和鱟試劑反應(yīng)專一程度分：

?普通鱟試劑和特異性鱟試劑118/273BET目標(biāo)和前提確保藥品不含有能造成患者發(fā)燒反應(yīng)發(fā)生足量細(xì)菌內(nèi)毒素。一定量細(xì)菌內(nèi)毒素能夠被人體耐受，也是SFDA允許。前提是假定引發(fā)發(fā)燒反應(yīng)熱原幾乎全部是內(nèi)毒素。119/273細(xì)菌內(nèi)毒素檢驗(yàn)法凝膠法光度測定法濁度法（終點(diǎn)濁度法和動(dòng)態(tài)濁度法）顯色基質(zhì)法（終點(diǎn)顯色法和動(dòng)態(tài)顯色法）120/273凝膠法最簡單、經(jīng)濟(jì)、應(yīng)用最廣泛，中國藥典“仲裁”方法對(duì)干擾相對(duì)不敏感。有兩倍誤差較光度測定法不靈敏121/273藥典細(xì)菌內(nèi)毒素檢驗(yàn)法修訂內(nèi)容結(jié)構(gòu)上調(diào)整方法學(xué)上修改細(xì)節(jié)描述上修改122/273一、結(jié)構(gòu)調(diào)整BP、USP25、JP14敘述是按試驗(yàn)步驟纂寫，輕易了解，比較合理。各種溶液配制采取表格形式，直觀易懂。檢驗(yàn)法改變敘述次序，以及表格形式，這是兩版藥典細(xì)菌內(nèi)毒素檢驗(yàn)法區(qū)分最大地方。123/273以凝膠限量試驗(yàn)溶液制備為例A：供試品溶液B：供試品陽性對(duì)照C：陽性對(duì)照D：陰性對(duì)照編號(hào)內(nèi)毒素濃度/配制內(nèi)毒素溶液平行管數(shù)A無/供試品溶液2B2λ/供試品溶液2C2λ/檢驗(yàn)用水2D無/檢驗(yàn)用水2124/273與藥典內(nèi)毒素檢驗(yàn)法整體結(jié)構(gòu)

（分為檢驗(yàn)法和指導(dǎo)標(biāo)準(zhǔn)）

檢驗(yàn)法（凝膠法）介紹試驗(yàn)準(zhǔn)備鱟試劑靈敏度復(fù)核試驗(yàn)供試品干擾試驗(yàn)細(xì)菌內(nèi)毒素檢驗(yàn)法（凝膠法和光度法）介紹試驗(yàn)準(zhǔn)備供試品溶液制備細(xì)菌內(nèi)毒素限值確實(shí)定確定最大有效稀釋倍數(shù)（MVD）125/273與藥典內(nèi)毒素檢驗(yàn)法整體結(jié)構(gòu)

（分為檢驗(yàn)法和指導(dǎo)標(biāo)準(zhǔn)）

檢驗(yàn)法結(jié)果判斷定方法一：凝膠法鱟試劑靈敏度復(fù)核干擾試驗(yàn)檢驗(yàn)法：1）凝膠限量試驗(yàn)2）凝膠半定量試驗(yàn)126/273與藥典內(nèi)毒素檢驗(yàn)法整體結(jié)構(gòu)

（分為檢驗(yàn)法和指導(dǎo)標(biāo)準(zhǔn)）

細(xì)菌內(nèi)毒素檢驗(yàn)法應(yīng)用指導(dǎo)標(biāo)準(zhǔn)細(xì)菌內(nèi)毒素限值確實(shí)定細(xì)菌內(nèi)毒素定量測定法（濁度法和顯色基質(zhì)法）試驗(yàn)準(zhǔn)備標(biāo)準(zhǔn)曲線可靠性試驗(yàn)定量法干擾試驗(yàn)供試品定量測定方法二、光度測定法標(biāo)準(zhǔn)曲線可靠性試驗(yàn)干擾試驗(yàn)光度法檢驗(yàn)法127/273二、方法學(xué)上修改1、藥典中只收載凝膠法，定量法只作為指導(dǎo)標(biāo)準(zhǔn)一部分收載。將指導(dǎo)標(biāo)準(zhǔn)合并入檢驗(yàn)法中，正式收載細(xì)菌內(nèi)毒素定量檢測法（光度法）。128/273方法學(xué)上修改修改原因檢驗(yàn)法為凝膠法指導(dǎo)標(biāo)準(zhǔn)中收載定量法。兩種方法：凝膠法和光度測定法。可使用其中任何一個(gè)方法，當(dāng)測定結(jié)果有爭議時(shí)，除另有要求外，以凝膠法結(jié)果為準(zhǔn)定量法發(fā)展日趨成熟，能夠廣泛使用，故將凝膠法和定量法合并收載。同時(shí)因?yàn)椤澳z法”和“光度法”是以檢測原理命名，“定量法”時(shí)相對(duì)于“定性”，所以，將“定量法”改為“光度測定法”更為妥當(dāng)。129/2732、增加了凝膠法半定量法修改原因凝膠法為凝膠限量法：判斷供試品中細(xì)菌內(nèi)毒素限量是否符合要求一個(gè)方法。凝膠法分為：凝膠限量試驗(yàn)判斷供試品中細(xì)菌內(nèi)毒素限量是否符合要求一個(gè)方法。凝膠半定量試驗(yàn)本方法系經(jīng)過確定終點(diǎn)濃度來量化供試品溶液中內(nèi)毒素試驗(yàn)。即使半定量法在我國使用不多，不過因?yàn)榘攵糠ㄔ谄渌鼑覒?yīng)用廣泛，許多進(jìn)口藥品申報(bào)材料及進(jìn)口復(fù)核都要求使用凝膠半定量法，所以添加此方法，與國際接軌。130/2733、將凝膠法干擾試驗(yàn)中供試品對(duì)照管由2支增加為4支，鱟試劑標(biāo)示靈敏度對(duì)照系列保持4支。修改原因凝膠法干擾試驗(yàn)中：供試品對(duì)照管2支。鱟試劑標(biāo)示靈敏度對(duì)照系列每一濃度平行4支。凝膠法干擾試驗(yàn)中：供試品對(duì)照管4支。鱟試劑標(biāo)示靈敏度對(duì)照系列每一濃度平行4支。協(xié)調(diào)案中要求供試品對(duì)照管4支，鱟試劑標(biāo)示靈敏度對(duì)照系列每一濃度濃度平2支試管。考慮到當(dāng)前鱟試劑質(zhì)量各廠家存在差異。131/2734、將凝膠法中各種對(duì)照數(shù)量由1支增加為2支。修改原因凝膠法中：每批供試品需做2支供試品管，1支供試品陽性對(duì)照，1支陽性對(duì)照和1支陰性對(duì)照，共5支。凝膠法中：每批供試品需做2支供試品管，2支供試品陽性對(duì)照，2支陽性對(duì)照和2支陰性對(duì)照，共8支。考慮至對(duì)照是試驗(yàn)是否成立標(biāo)準(zhǔn)，所以將各種對(duì)照增加為2支。132/2735、光度法試驗(yàn)中幾點(diǎn)改動(dòng)修改原因標(biāo)準(zhǔn)曲線可靠性試驗(yàn)：用標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)毒素配成溶液并制并制成最少3個(gè)等比系列稀釋液（稀釋度為2~10），設(shè)為、λ1、λ2……λn（n≥3），其中λ1為標(biāo)準(zhǔn)曲線最低內(nèi)毒素濃度。標(biāo)準(zhǔn)曲線可靠性試驗(yàn)：用標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)毒素配成溶液并制并制成最少3個(gè)等比系列稀釋液（稀釋度不得大于10），最低濃度不得供于所用鱟試劑標(biāo)示檢測限。因?yàn)橹苽錁?biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)不一定非是等比系列，所以去掉了對(duì)于等比系列稀釋液要求。另處，國際上對(duì)于光度法標(biāo)準(zhǔn)曲線中各點(diǎn)濃度不再使用λ1、λ2……λn概論，而只對(duì)其最低濃度稱為λ。133/2735、光度法試驗(yàn)中幾點(diǎn)改動(dòng)修改原因光度法陰性對(duì)照要求為：當(dāng)陰性對(duì)照結(jié)果不超出λ1時(shí)，將全部數(shù)據(jù)進(jìn)行線性回歸分析。光度法陰性對(duì)照要求為：當(dāng)陰性對(duì)照在設(shè)定反應(yīng)時(shí)間內(nèi)不發(fā)生反應(yīng)，將全部數(shù)據(jù)進(jìn)行線性回歸分析。使陰性對(duì)照控制更為嚴(yán)格。134/2735、光度法試驗(yàn)中幾點(diǎn)改動(dòng)修改原因光度法干擾試驗(yàn)中，在回收試驗(yàn)里添加內(nèi)毒素量為：λm，λm為標(biāo)準(zhǔn)曲線中最低濃度λ1和最高濃度λn（n≥3）間中間濃度光度法干擾試驗(yàn)中，在回收試驗(yàn)里添加內(nèi)毒素量為：標(biāo)準(zhǔn)曲線中點(diǎn)（或附近點(diǎn)）濃度（設(shè)為λm）。因?yàn)榭紤]到標(biāo)準(zhǔn)曲線上濃度數(shù)如為偶數(shù)上濃度數(shù)如為偶數(shù)則不存在中間點(diǎn)，所以改為“標(biāo)準(zhǔn)曲線中點(diǎn)（或附近點(diǎn)）更為合理。135/273三、細(xì)節(jié)描述上修改136/2731、因?yàn)樗幍鋵⒛z法與光度測定法同時(shí)收載，所以在介紹中對(duì)凝膠法和光度法都進(jìn)行了描述。而且也將兩種方法試驗(yàn)準(zhǔn)備及限值確實(shí)定一同敘述。2、因?yàn)樗幍渲袑?duì)于細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品要求“細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品中，每1ng細(xì)菌內(nèi)毒素效價(jià)應(yīng)大于2EU，小于50EU”為生產(chǎn)要求，并不針對(duì)用戶，在中刪除對(duì)工作品此項(xiàng)標(biāo)準(zhǔn)。3、因?yàn)榭紤]到供試品溶液中pH值等原因?qū)υ囼?yàn)影響，故在增加了“供試品溶液制備”項(xiàng)，并對(duì)供試品pH值提出了要求。4、因?yàn)閷⒛z法與光度法一同收載，所以也將原來分開敘述最大有效稀釋倍數(shù)（MVD）計(jì)算方法合并。137/2735、在干擾試驗(yàn)中，添加了“為確保所選擇處理方法能有效排除干擾且不會(huì)使內(nèi)毒素失去活性，要使用預(yù)先添加了標(biāo)內(nèi)毒素再經(jīng)過處理供試品溶液進(jìn)行干擾試驗(yàn)”。6、在光度測定法中，要求“供試品各鱟試劑加樣量、供試品和鱟試劑百分比以及保溫時(shí)間等，參考所用儀器和試劑相關(guān)說明進(jìn)行。每種溶液最少做2個(gè)平行管?！?38/273《中國藥典》細(xì)菌內(nèi)毒素檢驗(yàn)法介紹139/273整體結(jié)構(gòu)一、綜述部分檢驗(yàn)法描述試驗(yàn)準(zhǔn)備限值（L）確實(shí)定確定最大有效稀釋倍數(shù)（MVD）二、試驗(yàn)部分1、凝膠法2、光度測定法a、鱟試劑靈敏度復(fù)核a、標(biāo)準(zhǔn)曲線可靠性試驗(yàn)b、干擾試驗(yàn)b、干擾試驗(yàn)c、檢驗(yàn)法：限量試驗(yàn)c、檢驗(yàn)法半定量試驗(yàn)140/273一、綜述部分檢驗(yàn)法描述試驗(yàn)準(zhǔn)備限值（L）確實(shí)定確定最大有效稀釋倍數(shù)（MVD）141/2731、檢驗(yàn)法描述本法系利用鱟試劑來檢測或量化由革蘭陰性菌產(chǎn)生細(xì)菌內(nèi)毒素，以判斷供試品中細(xì)菌內(nèi)毒素限量是否符合要求一個(gè)方法。細(xì)菌內(nèi)毒素檢驗(yàn)包含兩種方法，即凝膠法和光度測定法，后者包含濁度法和顯色基質(zhì)法。供試品檢測時(shí)，可使用其中任何一個(gè)方法進(jìn)行試驗(yàn)。當(dāng)測定結(jié)果有爭議時(shí)，除另有要求外以凝膠法結(jié)果為準(zhǔn)。細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)國家標(biāo)準(zhǔn)品工作標(biāo)準(zhǔn)品142/2731、檢驗(yàn)法描述細(xì)菌內(nèi)毒素檢驗(yàn)用水凝膠法細(xì)菌內(nèi)毒素檢驗(yàn)用水系指內(nèi)毒素含量小于0.015EU/ml滅菌注射用水。光度測定用細(xì)菌內(nèi)毒素檢驗(yàn)用水，其內(nèi)毒素含量應(yīng)小于0.005EU/ml。143/2732、試驗(yàn)準(zhǔn)備試驗(yàn)器械要求試驗(yàn)所用器皿需經(jīng)處理，以去除可能存在內(nèi)毒素。慣用方法是在250℃干烤最少60分鐘，也可采取其它確證不干擾細(xì)菌內(nèi)毒素檢驗(yàn)適宜方法。若使用塑料器械，如微孔板與微量加樣器配套吸頭等，應(yīng)選取標(biāo)明無內(nèi)毒素而且對(duì)試驗(yàn)無干擾器械。試驗(yàn)操作過程應(yīng)預(yù)防微生物污染。144/2732、試驗(yàn)準(zhǔn)備供試品溶液制備一些供試品需進(jìn)行復(fù)溶、稀釋或在水性溶液中浸提制成供試品溶液。普通要求供試品溶液pH值在6.0~8.0范圍內(nèi)。對(duì)于過酸、過堿或本身有緩沖能力供試品，需調(diào)整被測溶液（或其稀釋液）pH值，可使用酸、堿溶液或鱟試劑生產(chǎn)廠家推薦適宜緩沖液調(diào)整pH值。緩沖液必須經(jīng)過驗(yàn)證不含內(nèi)毒素和干擾因子。145/2733、限值（L）確實(shí)定藥品、生物制品細(xì)菌內(nèi)毒素限值（L）普通按以下公式確定：L=K/M按人用劑量計(jì)算限值時(shí)，如遇特殊情況，可依據(jù)生產(chǎn)和臨床用藥實(shí)際情況做必要調(diào)整，但需說明理由。計(jì)算舉例：注射用阿莫西林鈉依據(jù)國家藥典委員會(huì)編纂《臨床用藥須知》：“肌肉注射或稀釋后靜脈滴注，一次0.5~1g，一日3~4次：小兒按體重每日50~100mg/Kg，分3~4次靜脈滴注?！盡成人=1000mg/h÷60Kg=16.67mg/(Kg?h)M成人=100mg/(Kg?h)÷3=33.3.mg/(Kg?h)L=K/M=5EU/(Kg?h)÷33.3.mg/(Kg?h)=0.150EU/mg146/2733、限值（L）確實(shí)定限值計(jì)算時(shí)做必要調(diào)整幾個(gè)情況從嚴(yán)標(biāo)準(zhǔn)聯(lián)適用藥特殊情況等147/2734、確定最大有效稀釋倍數(shù)（MVD）最大有效稀釋倍數(shù)是指供試品溶液被充許稀釋最大倍數(shù)，在不超出此稀釋倍數(shù)濃度下進(jìn)行內(nèi)毒素限值檢測。MVD=cL/λL：供試品細(xì)菌內(nèi)毒素限值C：供試品溶液濃度λ：在凝膠法中鱟試劑標(biāo)示靈敏度（EU/ml),或是在光度測定法中所使用標(biāo)準(zhǔn)曲線上低內(nèi)毒素濃度。（如標(biāo)準(zhǔn)曲線為50、5、0.5EU/ml三個(gè)濃度組成）148/2734、確定最大有效稀釋倍數(shù)（MVD）計(jì)算舉例：a、當(dāng)L以EU/ml表示時(shí)，則C等于1.0ml/ml適合用于供試品為狀態(tài)，而且要求限值為應(yīng)小于xxEU/ml。例：替硝唑注射液，計(jì)算限值為0.5EU/ml，使用靈敏度為0.125EU/ml，使用靈敏度為0.125EU/ml鱟試劑進(jìn)行檢驗(yàn)，則MVD=1.0ml/ml×0.5EU/ml÷0.125EU/ml=4倍b、當(dāng)L以EU/mg或EU/U表示時(shí)，濃度c單位需為mg/ml或U/ml。適合用于供試品為固體狀態(tài)，如粉針；或液不過要求限值為應(yīng)小于xxEU/mg或EU/U。149/273例：注射用阿莫西林鈉計(jì)算限值為0.15EU/mg，使用靈敏度為0.125EU/ml鱟試劑進(jìn)行檢驗(yàn)。需先稱取一定重量注射用阿莫西林鈉，在已除去外源性內(nèi)毒素容器中，用細(xì)菌內(nèi)毒素檢驗(yàn)用水配制成一定濃度溶液。如稱取100mg注射用阿莫西林鈉，用5ml內(nèi)毒素檢驗(yàn)用水溶解，即成為濃度為20mg/ml阿莫西林鈉溶液。MVD=20mg/ml×0.15EU/mg÷0.125EU/ml=24倍150/2734、確定最大有效稀釋倍數(shù)（MVD）如供試品為注射用無菌粉末或原料藥，則MVD取1，計(jì)算供試品最小有效稀釋濃度c=λ/L；適合用于供試品為固體情況。計(jì)算得到最小有效稀釋濃度即為MVD下該供試品濃度。例：注射用阿莫西林鈉計(jì)算限值為0.15EU/mg，使用靈敏度為0.125EU/ml鱟試劑行檢驗(yàn)。最小有效稀釋濃度C=0.125EU/ml÷0.15EU/mg=0.833mg/ml151/273二、試驗(yàn)部分1、凝膠法2、光度測定法a、鱟試劑靈敏度復(fù)核a、標(biāo)準(zhǔn)曲線可靠性試驗(yàn)b、干擾試驗(yàn)b、干擾試驗(yàn)c、檢驗(yàn)法：限量試驗(yàn)c、檢驗(yàn)法半定量試驗(yàn)152/273鱟試劑靈敏度復(fù)核試驗(yàn)□試管○陰性●陽內(nèi)毒素濃度2λλ0.5λ0.25λ陰性對(duì)照鱟試劑平行管□□□□□□□□□□□□□□□□□□153/273鱟試劑靈敏度復(fù)核試驗(yàn)放入37℃±1℃恒溫器中，保溫60分鐘±2分鐘。將試管從恒溫器中輕輕取出，緩緩倒轉(zhuǎn)180o，若管內(nèi)形成凝膠，而且凝膠不變形、不從管壁滑脫者為陽性；形成凝膠不堅(jiān)實(shí)、變形或從管壁滑脫者為陰性。保溫和拿取試管過程應(yīng)防止受到振動(dòng)造成假陰性結(jié)果。154/273鱟試劑靈敏度復(fù)核試驗(yàn)結(jié)果判斷：若最大濃度2λ管均為陽性，最低濃度0.25λ管均為陰性，陰性對(duì)照管為陰性，試驗(yàn)方為有效。結(jié)果計(jì)算：反應(yīng)終點(diǎn)濃度幾何平均值，即為鱟試劑靈敏度測定值（λc）。λc=lg-1（∑X/4）式中X為反應(yīng)終點(diǎn)濃度是指系列遞減內(nèi)毒素濃度中最終一個(gè)呈陽性結(jié)果濃度。155/273鱟試劑靈敏度復(fù)核試驗(yàn)內(nèi)毒素濃度2λλ0.5λ0.25λ陰性對(duì)照終點(diǎn)

鱟試劑平行管●●○○○λ●●○○○λ●●●○0.5λ●●●○0.5λλc=lg-1(lgλ+lgλ+lg0.5λ+lg0.5λ)4=0.707λ156/273 鱟試劑靈敏度復(fù)核試驗(yàn)當(dāng)λc在0.5λ~2λ(包含0.5λ和2λ）時(shí)，方可用于細(xì)菌內(nèi)毒素檢驗(yàn)。試驗(yàn)時(shí)，以標(biāo)示靈敏度λ為該批鱟試劑靈敏度。157/273凝膠法干擾試驗(yàn)?zāi)繕?biāo)：是確定供試品在多大稀釋倍數(shù)或濃度下對(duì)同位毒素和鱟試劑反應(yīng)不存在干擾作用，為能否使用細(xì)菌內(nèi)毒素檢驗(yàn)法提供依據(jù)。158/273凝膠法干擾試驗(yàn)造成干擾原因：pH值抗凝因子螯合劑葡聚糖……凝膠法干擾試驗(yàn)稀釋中和過濾加熱……159/273凝膠法干擾試驗(yàn)預(yù)試驗(yàn)?zāi)繕?biāo)：初步確定供試品最大不濃度（當(dāng)限值以EU/mg或EU/u活性單位表示）或最小不干擾稀釋倍數(shù)（當(dāng)限值以EU/ml表示），為正式干擾試驗(yàn)提供依據(jù)。優(yōu)點(diǎn)：降低探索過程、節(jié)約成本將供試品溶液進(jìn)行一系列倍數(shù)稀釋。使用鱟試劑對(duì)每一稀釋倍數(shù)進(jìn)行檢驗(yàn)。每一稀釋倍數(shù)下做2支供試品管和2支供試品陽性對(duì)照（即含2.0λ濃度標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)毒素該濃度供試品稀釋液）。加做2支陰性對(duì)照，和2支陽性對(duì)照。160/273凝膠法干擾試驗(yàn)預(yù)試驗(yàn)MVD0.5MVD0.25MVD0.125MVD0.06MVD0.03稀釋倍數(shù)原液5倍10倍20倍40倍供試品溶液□□□□□□□□□□PPC□□□□□□□□□□NC□□PC□□161/273凝膠法干擾試驗(yàn)預(yù)試驗(yàn)——結(jié)果判斷當(dāng)陰性對(duì)照為陰性，陽性對(duì)照為陽性時(shí)，試驗(yàn)為有效。當(dāng)系列濃度中出現(xiàn)供試品溶液2管為陰性，供試品陽性對(duì)照2管為陽性時(shí)，認(rèn)為供試品在該濃度下不干擾試驗(yàn)，此稀釋倍數(shù)即為最小不稀釋倍數(shù)。即可選擇該稀釋倍數(shù)進(jìn)行正式干擾試驗(yàn)。162/273凝膠法干擾試驗(yàn)預(yù)試驗(yàn)○陰性●陽性如上結(jié)果可初步確定該樣品最小不干擾稀釋倍數(shù)為20倍，可在此濃度下進(jìn)行正式干擾試驗(yàn)。普通提議：40倍稀釋倍數(shù)原液5倍10倍20倍40倍供試品溶液○○○○○○○○○○PPC○○○○○●●●●●NC○○PC●●163/273凝膠法干擾試驗(yàn)正式干擾試驗(yàn)?zāi)繕?biāo)：檢驗(yàn)在某一濃度下供試品對(duì)于鱟試劑與內(nèi)毒素反應(yīng)有沒有干擾作用。操作：用內(nèi)毒素檢驗(yàn)用水和供試品將同一支內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品分別制備一系列濃度內(nèi)毒素溶液。同時(shí)制備2支供試品陰性對(duì)照和2支陰性對(duì)照。按表1制備溶液A、B、C和D164/273編號(hào)內(nèi)毒素濃度/配制內(nèi)毒素溶液稀釋用液稀釋倍數(shù)所含內(nèi)毒素濃度平行管數(shù)A無/供試品溶液---2B2λ/供試品溶液供試品溶液12λ421λ440.5λ480.25λ4C2λ/檢驗(yàn)用水檢驗(yàn)用水12λ421λ440.5λ480.25λ4D無/檢驗(yàn)用水---2165/273凝膠法干擾試驗(yàn)正式干擾試驗(yàn)結(jié)果判斷：當(dāng)供試品陰性對(duì)照A和陰性對(duì)照D結(jié)果在鱟試劑靈敏度復(fù)核范圍內(nèi)時(shí)，試驗(yàn)方為有效。分別計(jì)算用檢驗(yàn)用水制成內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液反應(yīng)終點(diǎn)濃度幾何平均值（Es）和用供試品溶液或稀釋液制成內(nèi)毒素溶液反應(yīng)終點(diǎn)濃度幾何平均值（Et）。Es=lg-1(∑Xsλ/4）Et=lg-1(∑Xtλ/4）當(dāng)Es在0.5~2λ(包含0.5λ和2λ）及Et在0.5~2λ(包含0.5λ和2λ）時(shí)，認(rèn)為供試品在該濃度下無干擾作用。166/273內(nèi)毒素濃度2.0λλ0.5λ0.25λ內(nèi)毒素/檢驗(yàn)用水（系列溶液C）

□□□□□□□□□□□□□□陰性對(duì)照（溶液D）□□內(nèi)毒素/供試品溶液（系列溶液B）□□□□□□□□□□□□□□□□供試品陰性對(duì)照（溶液A）□□167/273內(nèi)毒素濃度2.0λλ0.5λ0.25λ終點(diǎn)內(nèi)毒素/檢驗(yàn)用水（系列溶液C）

●●○○λ●●○○λ●●○○λ●●○○λ陰性對(duì)照（溶液D）○○內(nèi)毒素/供試品溶液（系列溶液B）●●○○λ●●○○λ●○○○2.0λ●○○○2.0λ供試品（溶液A）○○Es=lg-1(∑Xsλ/4）=λEt=lg-1(∑Xtλ/4）=1.41λ168/273凝膠法干擾試驗(yàn)正式干擾試驗(yàn)當(dāng)存在干擾時(shí)，可經(jīng)過對(duì)供試品進(jìn)行更大倍數(shù)稀釋或經(jīng)過其它適宜方法（如過濾、中和、透析或加熱處理等）排除干擾。為確保所選擇處理方法能有效排除干擾且不會(huì)使內(nèi)毒素失支活性，要使用預(yù)先添加了標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)毒素再經(jīng)過處理供試品溶液進(jìn)行干擾試驗(yàn)。即，先在供試品溶液中添加2λ濃度標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)毒素，然后用所選擇方法處理溶液，而后再進(jìn)行稀釋、檢測。169/273凝膠法干擾試驗(yàn)正式干擾試驗(yàn)當(dāng)