任務(wù)四 微生物培養(yǎng)基制作技術(shù)

食品微生物檢驗(yàn)任務(wù)四培養(yǎng)基的制備任務(wù)目標(biāo)知識(shí)目標(biāo)1.了解培養(yǎng)基的配制原理和分類。2.掌握配置培養(yǎng)基的制備過(guò)程。素質(zhì)目標(biāo)技能目標(biāo)培養(yǎng)學(xué)生形成生物安全意識(shí)、環(huán)保意識(shí)、標(biāo)準(zhǔn)意識(shí)、社會(huì)服務(wù)意識(shí)。

1.熟練掌握基礎(chǔ)培養(yǎng)基的制作過(guò)程。2.掌握高壓蒸汽滅菌鍋的工作原理及應(yīng)用范圍。1.定義：培養(yǎng)基是指人工配制的、含有六大營(yíng)養(yǎng)要素、適合微生物生長(zhǎng)繁殖或產(chǎn)生代謝產(chǎn)物用的混合營(yíng)養(yǎng)料。（六大營(yíng)養(yǎng)素：C源、N源、能源、水、生長(zhǎng)因子、無(wú)機(jī)鹽）知識(shí)點(diǎn)一培養(yǎng)基基礎(chǔ)知識(shí)1.定義知識(shí)點(diǎn)一培養(yǎng)基基礎(chǔ)知識(shí)2.分類按營(yíng)養(yǎng)成分來(lái)源天然培養(yǎng)基：價(jià)格低廉半合成培養(yǎng)基：培養(yǎng)真菌的LB培養(yǎng)基和馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基等合成培養(yǎng)基：重復(fù)性強(qiáng)、成分精確知識(shí)點(diǎn)一培養(yǎng)基基礎(chǔ)知識(shí)2.分類按物理狀態(tài)液體培養(yǎng)基：不含瓊脂半固體培養(yǎng)基：0.2%-0.8%瓊脂固體培養(yǎng)基：1%-2%瓊脂知識(shí)點(diǎn)一培養(yǎng)基基礎(chǔ)知識(shí)2.分類按用途劃分基礎(chǔ)培養(yǎng)基：含一般基本營(yíng)養(yǎng)成分加富培養(yǎng)基：加入某些特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)選擇培養(yǎng)基：只適于目的菌生長(zhǎng)繁殖的環(huán)境，而抑制其他微生物的生長(zhǎng)鑒別培養(yǎng)基：鑒別不同類型微生物的培養(yǎng)基知識(shí)點(diǎn)一培養(yǎng)基基礎(chǔ)知識(shí)3.配制原則濃度合適目的明確pH適宜經(jīng)濟(jì)節(jié)約知識(shí)點(diǎn)二制備流程培養(yǎng)基的制備一般程序：選擇原料→計(jì)算→稱重→混合溶解→調(diào)整pH→（加指示劑）→過(guò)濾→分裝→加塞→包扎→滅菌→鑒定→保存。知識(shí)點(diǎn)三實(shí)驗(yàn)器材、試劑的準(zhǔn)備試劑名稱稱取量酵母浸膏2.5g胰蛋白胨5.0g無(wú)水葡萄糖1.0g瓊脂粉15.0g水1000mL試劑準(zhǔn)備名稱規(guī)格數(shù)量燒杯1000mL1個(gè)牛皮紙或報(bào)紙

數(shù)張棉線

2根錐形瓶250mL1個(gè)試管15×150mm4根以上棉塞90mm8個(gè)酒精燈

1個(gè)酒精棉球罐500mL1個(gè)鑷子9mm1個(gè)剪刀

1把一次性手套

1副玻璃棒

1根pH試紙1-14

量筒1000mL

1mol/LNaOH

1mol/LHCl

天平

電爐

記號(hào)筆

電熱鼓風(fēng)干燥箱

高壓蒸汽菌鍋

器皿準(zhǔn)備知識(shí)點(diǎn)四培養(yǎng)基的制備過(guò)程1、原料的選擇、計(jì)算與稱量根據(jù)培養(yǎng)基的配方，計(jì)算所配培養(yǎng)基需要原料的準(zhǔn)確數(shù)量，選擇不同精密的稱量工具進(jìn)行原料的稱取。用普通天平準(zhǔn)確稱量出所需藥品用量筒量出相應(yīng)的蒸餾水的量知識(shí)點(diǎn)四培養(yǎng)基的制備過(guò)程（2）混合溶解

將稱量好的各種原料根據(jù)要求將先后放入燒杯或其它容器中進(jìn)行混合溶解，注意先加少于總量的水，在電爐上加熱溶解，溶解時(shí)需不斷攪拌。注意：固體培養(yǎng)基需要最后加入瓊脂，邊加邊攪拌，待完全溶解后，補(bǔ)足所失水分。（3）調(diào)整pH值：用pH試紙或pH計(jì)測(cè)定培養(yǎng)基的pH，常用1moL/LNaOH溶液或1moL/LHCL溶液調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的pH到所需范圍。注意：逐滴加入酸堿調(diào)節(jié)劑，邊加邊攪拌，并隨時(shí)測(cè)定。知識(shí)點(diǎn)四培養(yǎng)基的制備過(guò)程知識(shí)點(diǎn)四培養(yǎng)基的制備過(guò)程（4）加指示劑對(duì)某些培養(yǎng)基，按要求加入一定量指示劑。知識(shí)點(diǎn)四培養(yǎng)基的制備過(guò)程（5）過(guò)濾培養(yǎng)基配制后一般都有沉渣或渾濁出現(xiàn)，需要過(guò)濾方可使用，可用濾紙或2～4層的紗布過(guò)濾。固體培養(yǎng)基最好趁熱用紗布過(guò)濾。（6）分裝：將過(guò)濾后的培養(yǎng)基根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要分裝于不同容器內(nèi)，注意各容器的分裝量要求。

三角燒瓶：不超過(guò)容量的1/2，高度的1/3。試管：液體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基約裝試管容量的1/4～1/3；斜面培養(yǎng)基：約裝試管容量的1/5。

知識(shí)點(diǎn)四培養(yǎng)基的制備過(guò)程知識(shí)點(diǎn)四培養(yǎng)基的制備過(guò)程（7）加塞：由紗布包棉花做成的棉塞（形如未打開(kāi)傘之幼嫩蘑菇，大小和松緊適中）和現(xiàn)在的硅膠塞。知識(shí)點(diǎn)四培養(yǎng)基的制備過(guò)程（8）包扎標(biāo)記：加好塞后，在棉塞外再包上一層牛皮紙，以防滅菌時(shí)冷凝水直接沾濕棉塞及存放中防止塵埃等污染。知識(shí)點(diǎn)四培養(yǎng)基的制備過(guò)程（9）滅菌：最常用的是高壓蒸汽滅菌法，將待滅菌的培養(yǎng)基放入加壓滅菌鍋內(nèi)，培養(yǎng)基滅菌時(shí)的溫度和滅菌時(shí)間，按照不同種類的培養(yǎng)基的規(guī)定進(jìn)行操作。以保證滅菌效果和不損壞培養(yǎng)基的必要成分。知識(shí)點(diǎn)四培養(yǎng)基的制備過(guò)程（10）鑒定：將消毒冷卻后的培養(yǎng)基置于37℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)24-48h后觀察有無(wú)雜菌生長(zhǎng)，如無(wú)雜菌生長(zhǎng)則可接入微生物菌種，經(jīng)培養(yǎng)后觀察微生物生長(zhǎng)發(fā)育情況，以便確定培養(yǎng)基是否合于實(shí)驗(yàn)要求。知識(shí)點(diǎn)四培養(yǎng)基的制備過(guò)程（11）保存：經(jīng)驗(yàn)定合格的培養(yǎng)基，可存放于冰箱（4℃左右）內(nèi)或暗涼處清潔的柜內(nèi)，避免干燥、氧化、pH值的改變和雜菌的污染，這樣保存數(shù)星期仍然可用。但不宜保存時(shí)間過(guò)久，以少量勤做為宜。知識(shí)點(diǎn)五倒平板倒平板斜面培養(yǎng)基的制作

注意事項(xiàng)（1）稱藥品用的各種藥匙不要混用；稱完藥品應(yīng)及時(shí)蓋緊瓶蓋，瓶蓋切莫張冠李戴，尤其是易吸潮的蛋白胨等更應(yīng)注意及時(shí)蓋緊瓶塞與旋緊瓶蓋。（2）調(diào)pH時(shí)要小心操作，盡量避免回調(diào)而帶入過(guò)多的無(wú)機(jī)離子。（3）配制半固體或固體培養(yǎng)基時(shí)，瓊脂的用量應(yīng)根據(jù)市售瓊脂的牌號(hào)而定，否則培養(yǎng)基的軟硬程度也會(huì)影響某些實(shí)驗(yàn)結(jié)果。知識(shí)點(diǎn)六注意事項(xiàng)知識(shí)鞏固1.[單選題]瓊脂在培養(yǎng)基中的作用是（

）。A.碳源B.氮源C.凝固劑D.生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑2.[單選題]固體培養(yǎng)基分裝于試管的量是（

）。A.1/4B.1/5C.1/3D.1/23.[單選題]高壓蒸汽滅菌的溫度為（

）。A.105℃B.121℃C.160℃D.170℃4.[單選題]實(shí)驗(yàn)室常用于培養(yǎng)細(xì)菌的溫度為（

）。A.10℃B.28℃C.37℃D.50℃

5.[單選題]使用時(shí)，高壓蒸汽滅菌鍋打開(kāi)排氣閥的目的是（

）。A.防止高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)壓力過(guò)高，使培養(yǎng)基成分受到破壞。B.排盡高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)有害氣體。C.防止高壓蒸汽滅菌鍋壓力過(guò)高，造成滅菌鍋爆炸。D.排盡鍋內(nèi)冷空氣。知識(shí)鞏固6.[單選題]下列關(guān)于微生物營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的敘述中正確的是（

）A.同一物質(zhì)不可能既作碳源又作氮源B.凡是碳源都能提供能量C.除水以外的無(wú)機(jī)物僅提供無(wú)機(jī)鹽D.無(wú)機(jī)氮源也可提供能量7.[單選題]在用微生物發(fā)酵生產(chǎn)味精的過(guò)程中，所用的培養(yǎng)基成分中的生長(zhǎng)因子是（

）。A.豆餅水解液B.生物素C.玉米漿D.尿素8.[單選題]在合成培養(yǎng)基中加人含有C、0、H、N四種元素的某種大分子化合物，其作用是（

）A.作為異養(yǎng)生物的氮源和能源物質(zhì)B.作為異養(yǎng)生物的碳源和能源物質(zhì)C.作為異養(yǎng)生物的氮源、碳源和能源物質(zhì)D.作為自養(yǎng)生物的氮源、碳源和能源物質(zhì)9.[判斷題]凡是碳源都能提供能量。10.[判斷題]同一種微生物生長(zhǎng)和代謝所需要的培養(yǎng)基是相同的。11.[判斷題]同一物質(zhì)有時(shí)可以既作碳源又作氮源。12.[填空題]光能自養(yǎng)菌以

作能源，以