糖化血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)化及檢測方法比較

糖化血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)化及檢測方法比較_圖文.pptx1糖化血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)化及檢測方法比較5/9/2024內(nèi)容目錄糖化血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)化糖化血紅蛋白（GHB）檢測方法及產(chǎn)品示例常用檢測方法之比較12342糖化血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)化及檢測方法比較5/9/2024糖化血紅蛋白（GHb）GHb是指結(jié)合了任何形式碳水化合物的血紅蛋白，血紅蛋白與糖基發(fā)生非酶促，形成了不可逆的復(fù)合物。HbHbA0HbA1HbA1aHbA1bHbA1cHbA(

??)HbA2(

)HbF(

)95%<2%1-3.5%成人血紅蛋白分三種，HbA為主要成人Hb非糖化Hb糖化Hb6-8%87-89%血紅蛋白<1%<1%4%-6%3糖化血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)化及檢測方法比較5/9/2024糖化血紅蛋白的形成血紅蛋白HbA由兩個(gè)α亞基和兩個(gè)β亞基組成，α和β亞基上都有糖化位點(diǎn)，其中β亞基第1位纈氨酸主鏈氨基糖化率最高。根據(jù)糖種類，糖基化血紅蛋白可分為葡萄糖糖化、果糖糖化及乳糖糖基化血紅蛋白等。人體內(nèi)游離的葡萄糖含量遠(yuǎn)高于其他糖類物質(zhì)，β亞基的氮端纈氨酸主鏈氨基的糖化概率最高，因此體內(nèi)大部分糖基化血紅蛋白為β亞基氮端纈氨酸與葡萄糖的加合物，該物質(zhì)被命名為HbA1c。HbA1c糖基化位點(diǎn)結(jié)構(gòu)圖α亞基β亞基血紅素血紅素血紅素血紅素4糖化血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)化及檢測方法比較5/9/2024檢測方法學(xué)分類1、親和層析2、免疫法3、酶法4、顯色法根據(jù)Ghb和非GHb帶電不同01基于Hb上糖基化基團(tuán)的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)1、離子交換層析2、電泳法3、等電點(diǎn)聚焦法025糖化血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)化及檢測方法比較5/9/2024檢測方法：離子交換層析主要有高效液相色譜法(highperformanceliquidchromatography，HPLC)和手工微柱法。此方法是基于血紅蛋白β鏈N末端纈氨酸糖化后所帶電荷不同而建立。在中性pH條件下，HbA1c攜帶的正電荷相對較少，因此可通過離子交換層析法將其與其他組分分離。6糖化血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)化及檢測方法比較5/9/2024檢測方法：毛細(xì)管電泳法毛細(xì)管電泳能分離檢測糖化血紅蛋白和血紅蛋白的變異體，樣品用量少、操作簡便、重復(fù)性好、省時(shí)、高效。完全自動(dòng)化操作，簡單易用，在減少人為誤差的基礎(chǔ)上，重復(fù)性也得到了極大提高。SEBIA全自動(dòng)高壓液相毛細(xì)管電泳儀7糖化血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)化及檢測方法比較5/9/2024檢測方法：瓊脂凝膠電泳法Hb于酸性緩沖液條件下(pH6.0)，在瓊脂糖凝膠上的電泳遷移取決于Hb在凝膠上的吸附情況及其所帶的電荷。HbA0因其Ｎ末端的纈氨酸殘基對凝膠的負(fù)電荷有高度的親和力，因此它的遷移速率減慢。HbA1c因它所連接的糖的阻斷作用，不可再與凝膠結(jié)合，利用HbA1c和HbA0對凝膠的親和力不同，導(dǎo)致的電泳遷移速率也不同，通過電泳將各成分分開。SEBIA蛋白質(zhì)電泳儀8糖化血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)化及檢測方法比較5/9/2024檢測方法：等電點(diǎn)聚集法在聚丙烯酞凝膠中加入載體兩性介質(zhì)（如ampholin）的薄板上形成一個(gè)由陽極到陰極逐漸增加的pH梯度。溶血液中各個(gè)組分將移動(dòng)到各自等電點(diǎn)的pH位置上，這樣就得到比一般電泳法更好的分劃效果和比較集中的色帶。GEEttanIPGphor3等電聚焦電泳儀9糖化血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)化及檢測方法比較5/9/2024檢測方法：親和層析法由交聯(lián)了間氨基苯硼酸的瓊脂糖珠作為分離載體。當(dāng)總的GHb通過載體時(shí)，硼酸可與整合在血紅蛋白分子中的葡萄糖順位二醇基發(fā)生可逆性結(jié)合，使糖化的Hb選擇性地結(jié)合于凝膠柱上，其他非糖化Hb等隨緩沖液流出；然后用另一種含糖或多羥化合物的緩沖液將GHb洗脫下來，利用兩部分Hb本身的顏色，在415nm條件下測定并計(jì)算出親和色譜所測的GHb。伯樂In2it糖化血紅蛋白儀AlereAfinion?AS100Analyzer10糖化血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)化及檢測方法比較5/9/2024檢測方法：免疫法化學(xué)發(fā)光法：又叫離子捕獲法，采用離子捕捉免疫分析法，應(yīng)用抗原抗體反應(yīng)原理，聯(lián)合熒光標(biāo)記物，通過連接帶負(fù)電的多陰離子復(fù)合物，吸附到帶正電的纖維表面，經(jīng)過一系列徹底清洗等步驟后，測定熒光強(qiáng)度變化率，計(jì)算濃度。11糖化血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)化及檢測方法比較5/9/2024檢測方法：免疫法比濁法：又有膠乳凝集法和免疫比濁法兩種?？蓪?shí)現(xiàn)和自動(dòng)化分析儀很好地結(jié)合起來，具有快速、準(zhǔn)確、特異性強(qiáng)、重復(fù)性好、靈敏度高、線性范圍寬等優(yōu)點(diǎn)，可以使用自動(dòng)化分析儀進(jìn)行批量檢測。12糖化血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)化及檢測方法比較5/9/2024檢測方法：免疫法免疫層析法：免疫層析法操作簡便易行、快速準(zhǔn)確、試劑穩(wěn)定。更易于實(shí)現(xiàn)POC檢測，有助于醫(yī)生即時(shí)獲悉患者血糖水平，并及時(shí)給予患者醫(yī)療指導(dǎo)，以避免糖尿病診斷和治療的延誤，未來有著較為廣闊的應(yīng)用前景。Bayer拜安時(shí)手持式糖化檢測儀13糖化血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)化及檢測方法比較5/9/2024檢測方法：酶法全血經(jīng)溶血處理后，用特異蛋白內(nèi)切酶將Ｈｂ酶解消化成果糖氨基酸，再經(jīng)果糖氨基酸氧化酶作用下產(chǎn)生過氧化氫（H2O2），H2O2的濃度與血液中GHb的含量呈正比。H2O2在過氧化物酶的作用下與相應(yīng)的色原耦聯(lián)，發(fā)生顏色變化，根據(jù)其變化程度可得H2O2濃度，進(jìn)而得知樣本中GHb的含量。積水醫(yī)療酶法生化試劑14糖化血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)化及檢測方法比較5/9/2024糖化血紅蛋白檢測標(biāo)準(zhǔn)化瑞典MonoS方法日本JDS/JSCC方法美國NGSP方法對不同的HbA1c檢測方法采用統(tǒng)一參考標(biāo)準(zhǔn)(采用HPLCBio-Rex70陽離子交換柱)進(jìn)行校準(zhǔn)，使不同方法所測結(jié)果具有可比性2000年，JSCC啟用KO500陽離子HPLC，與JDS合作設(shè)計(jì)了新的HbA1c檢測校準(zhǔn)物，通過新校準(zhǔn)品校準(zhǔn)后的KO500HPLCHbA1c檢測法，成為JDS/JSCC的參考標(biāo)準(zhǔn)化方案2004年，GEHealthcare在其離子交換操作手冊中，詳細(xì)介紹了MonoSHPLC方法用于檢測HbA1c的操作步驟。證實(shí)MonoS5/50GL柱檢測精度上具有優(yōu)越性。IFCC法：2007年國際臨床化學(xué)聯(lián)合會(huì)(IFCC)重新明確了HbA1c的命名、性質(zhì)、單位:全稱為β鏈血紅蛋白β鏈N末端脫氧果糖基血紅蛋白