DB32T3652-2019鐵皮石斛嫩莖液體培育生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程

ICS65.020.20

B31

DB32/T××××

DB32

江蘇省地方標(biāo)準(zhǔn)

DB32/T3652-2019

鐵皮石斛嫩莖液體培育生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程

Technicalregulationofthecultivationfortenderstemsof

Dendrobiumofficinaleinsubmergedculture

2019-09-19發(fā)布2019-10-31實(shí)施

江蘇省市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布

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DB32/T3652—2019

鐵皮石斛嫩莖液體培育生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了鐵皮石斛嫩莖液體培育的術(shù)語(yǔ)和定義、生產(chǎn)條件、種源培育、培育生產(chǎn)、規(guī)模化生

產(chǎn)、日常管理、采收、質(zhì)量等劃分和包裝、運(yùn)輸及貯存。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于鐵皮石斛嫩莖液體培育。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期引用文件，僅所注日期版本適用于本文件。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有修改單）適用于本文件。

GB5749生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)

GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法

3術(shù)語(yǔ)和定義

下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。

3.1

鐵皮石斛嫩莖液體培育（ThecultivationfortenderstemsofDendrobiumofficinalein

submergedculture）

從鐵皮石斛中分離植物愈傷組織，經(jīng)誘導(dǎo)分化及馴化篩選，利用離體培養(yǎng)生物技術(shù)擴(kuò)增培育的無

農(nóng)藥殘留、重金屬含量較低、高醇浸出物含量鐵皮石斛幼嫩莖的培育技術(shù)。

4生產(chǎn)條件

室內(nèi)環(huán)境為十萬級(jí)以上潔凈度的潔凈間。保持室溫25oC~28oC。均勻柔和人工光，增補(bǔ)4:1紅藍(lán)

光，光照強(qiáng)度為2000Lux，光暗周期8h:16h?？諝庀鄬?duì)濕度40%~70%。生產(chǎn)環(huán)境、生產(chǎn)用水和過濾水

應(yīng)分別符合GB5749和GB/T6682的規(guī)定。

5種源培育與增殖

5.1培養(yǎng)基配制

采用MS培養(yǎng)基+0.5mg/LNAA+0.5mg/LKT+20g/L葡萄糖+10g/L瓊脂固體培養(yǎng)基進(jìn)行種源細(xì)胞固

體培養(yǎng)。采用MS培養(yǎng)基+0.5mg/LNAA+0.5mg/LKT+20g/L葡萄糖培養(yǎng)液進(jìn)行種源細(xì)胞液體培養(yǎng)。

5.2種源細(xì)胞增殖

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DB32/T3652—2019

將成熟鐵皮石斛莖段插入固體培養(yǎng)基中培養(yǎng)，獲得愈傷組織細(xì)胞。在相同固體培養(yǎng)基條件下增殖

種源細(xì)胞。

5.3種源細(xì)胞培育

按照鮮重20g/L~30g/L接種量，采用無菌操作，將種源細(xì)胞轉(zhuǎn)接至2L~5L玻璃瓶中進(jìn)行液體培養(yǎng)。

培養(yǎng)過程中向培養(yǎng)液中通入無菌空氣，空氣流速為0.75L/min~1L/min，培養(yǎng)周期為30d~45d。

6培育生產(chǎn)

6.1培養(yǎng)基配制

采用MS培養(yǎng)基+0.5mg/LNAA+1mg/LKT+20g/L葡萄糖+5%麥芽糖培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。

6.2培育操作

按40g/L~50g/L接種量，將種源細(xì)胞轉(zhuǎn)接至10L玻璃瓶中。在培養(yǎng)過程中，將無菌空氣通入培養(yǎng)

瓶中，空氣流速為0.75L/min~1L/min，培養(yǎng)周期為30d~45d。待嫩莖生長(zhǎng)總體積至培養(yǎng)瓶總體積的2/3

時(shí)，采收或留做下一階段種源。

7規(guī)?；a(chǎn)

按40g/L~50g/L接種量，將采收的種源細(xì)胞轉(zhuǎn)接至50L~100L生物反應(yīng)器中培養(yǎng)生產(chǎn)，其它按本

標(biāo)準(zhǔn)第6章的規(guī)定執(zhí)行。

8日常管理

一旦發(fā)現(xiàn)細(xì)菌或真菌的污染，立即將污染品移出培育生產(chǎn)間并進(jìn)行濕熱高溫滅菌。

9采收

采收時(shí)剔除褐化植株，用過濾水緩慢沖洗嫩莖3min~5min，300rpm/min脫水離心3min，甩脫浮水

后可直接制備成鐵皮石斛嫩莖鮮品，或65℃烘干制備為干品。

10質(zhì)量等級(jí)劃分

鐵皮石斛嫩莖質(zhì)量等級(jí)劃分要求見表1。

表1鐵皮石斛嫩莖質(zhì)量等級(jí)劃分要求

等級(jí)要求

特一級(jí)足干，形態(tài)規(guī)則，長(zhǎng)度大于6mm，嫩莖分枝簇狀均一排列，翠綠色。

特級(jí)足干，形態(tài)基本規(guī)則，長(zhǎng)度在3~6mm，嫩莖偶見小嫩葉，黃綠或翠綠色。

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DB32/T3652—2019

一級(jí)足干，形態(tài)相似，長(zhǎng)度在1~3mm，嫩莖混有嫩葉，黃綠或翠綠色。

工業(yè)級(jí)足干，形態(tài)相似，長(zhǎng)度小于1mm，嫩莖混有嫩葉，黃綠或翠綠色。

11包裝、運(yùn)輸、儲(chǔ)存

11.1包裝

分級(jí)后分別密封包裝，包裝上應(yīng)標(biāo)注品名、規(guī)格、產(chǎn)地、生產(chǎn)批號(hào)、合格標(biāo)志。

11.2運(yùn)輸

運(yùn)輸工具應(yīng)清潔、衛(wèi)生，無毒、無污染。運(yùn)輸時(shí)應(yīng)防潮、防暴曬、防污染。

11.3貯存

貯存于陰涼、通風(fēng)、清潔、干燥室內(nèi)，不得與有毒、有害和有異味的物品同倉(cāng)存放。

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DB32/T3652—2019

前言

本標(biāo)準(zhǔn)按GB/T1.1-2009《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)構(gòu)與編寫規(guī)則》給出的規(guī)則編寫。

本標(biāo)準(zhǔn)由江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院提出并歸口。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：蘇州天成新農(nóng)生物科技有限公司，江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院。

本標(biāo)準(zhǔn)起草人：張杰、周燕群、關(guān)劍、余向陽(yáng)、杜平、王昕怡、吳紅升。

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DB32/T3652—2019

鐵皮石斛嫩莖液體培育生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了鐵皮石斛嫩莖液體培育的術(shù)語(yǔ)和定義、生產(chǎn)條件、種源培育、培育生產(chǎn)、規(guī)?；?/p>

產(chǎn)、日常管理、采收、質(zhì)量等劃分和包裝、運(yùn)輸及貯存。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于鐵皮石斛嫩莖液體培育。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期引用文件，僅所注日期版本適用于本文件。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有修改單）適用于本文件。

GB5749生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)

GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法

3術(shù)語(yǔ)和定義

下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。

3.1

鐵皮石斛嫩莖液體培育（ThecultivationfortenderstemsofDendrobiumofficinalein

submergedculture）

從鐵皮石斛中分離植物愈傷組織，經(jīng)誘導(dǎo)分化及馴化篩選，利用離體培養(yǎng)生物技術(shù)擴(kuò)增培育的無

農(nóng)藥殘留、重金屬含量較低、高醇浸出物含量鐵皮石斛幼嫩莖的培育技術(shù)。

4生產(chǎn)條件

室內(nèi)環(huán)境為十萬級(jí)以上潔凈度的潔凈間。保持室溫25oC~28oC。均勻柔和人工光，增補(bǔ)4:1紅藍(lán)

光，光照強(qiáng)度為2000Lux，光暗周期8h:16h?？諝庀鄬?duì)濕度40%~70%。生產(chǎn)環(huán)境、生產(chǎn)用水和過濾水

應(yīng)分別符合GB5749和GB/T6682的規(guī)定。

5種源培育與增殖

5.1培養(yǎng)基配制

采用MS培養(yǎng)基+0.5mg/LNAA+0.5mg/LKT+20g/L葡萄糖+10g/L瓊脂固體培養(yǎng)基進(jìn)行種源細(xì)胞固

體培養(yǎng)。采用MS培養(yǎng)基+0.5mg/LNAA+0.5mg/LKT+20g/L葡萄糖培養(yǎng)液進(jìn)行種源細(xì)胞液體培養(yǎng)。

5.2種源細(xì)胞增殖

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DB32/T3652—2019

將成熟鐵皮石斛莖段插入固體培養(yǎng)基中培養(yǎng)，獲得愈傷組織細(xì)胞。在相同固體培養(yǎng)基條件下增殖

種源細(xì)胞。

5.3種源細(xì)胞培育

按照鮮重20g/L~30g/L接種量，采用無菌操作，將種源細(xì)胞轉(zhuǎn)接至2L~5L玻璃瓶中進(jìn)行液體培養(yǎng)。

培養(yǎng)過程中向培養(yǎng)液中通入無菌空氣，空氣流速為0.75L/min~1L/min，培養(yǎng)周期為30d~45d。

6培育生產(chǎn)

6.1培養(yǎng)基配制

采用MS培養(yǎng)基+0.5mg/LNAA+1mg/LKT+20g/L葡萄糖+5%麥芽糖培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。

6.2培育操作

按40g/L~50g/L接種量，將種源細(xì)胞轉(zhuǎn)接至10L玻璃瓶中。在培養(yǎng)過程中，將無菌空氣通入培養(yǎng)

瓶中，空氣流速為0.75L/min~1L/min，培養(yǎng)周期為30d~45d。待嫩莖生長(zhǎng)總體積至培養(yǎng)瓶總體積的2/3

時(shí)，采收或留做下一階段種源。

7規(guī)?；a(chǎn)

按40g/L~50g/L接種量，將采收的種源細(xì)胞轉(zhuǎn)接至50L~100L生物反應(yīng)器中培養(yǎng)生產(chǎn)，其它按本

標(biāo)準(zhǔn)第6章的規(guī)定執(zhí)行。

8日常管理

一旦發(fā)現(xiàn)細(xì)菌或真菌的污染，立即將污染品移出培育生產(chǎn)間并進(jìn)行濕熱高溫滅菌。

9采收

采收時(shí)剔除褐化植株，用過濾水緩慢沖洗嫩莖3min~5min，300rpm/min脫水離心3min，甩脫浮水

后可直接制備成鐵皮石斛嫩莖鮮品，或65℃烘干制備為干品。

10質(zhì)量等級(jí)劃分

鐵皮石斛嫩莖質(zhì)量等級(jí)劃分要求見表1。

表1鐵皮石斛嫩莖質(zhì)量等級(jí)劃分要求

等級(jí)