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主講老師:邢煜騫轉(zhuǎn)化子的篩選轉(zhuǎn)化子通常將攝取外源DNA分子并在其中穩(wěn)定維持的受體細(xì)胞稱為克隆子,把采用轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)染或轉(zhuǎn)導(dǎo)等方法獲得的克隆子稱為轉(zhuǎn)化子。篩選方法可分為以下三類:根據(jù)載體標(biāo)記基因篩選轉(zhuǎn)化子根據(jù)報(bào)告基因篩選轉(zhuǎn)化子根據(jù)形成噬菌斑篩選轉(zhuǎn)化子根據(jù)載體標(biāo)記基因篩選轉(zhuǎn)化子法利用載體抗生素抗性基因相對(duì)應(yīng)的選擇藥物利用載體除草劑抗性基因相對(duì)應(yīng)的選擇藥物利用lacZ’基因互補(bǔ)顯色試劑利用生產(chǎn)調(diào)節(jié)劑非依賴性利用核苷酸合成代謝相關(guān)酶基因缺失互補(bǔ)試劑利用載體抗生素抗性基因相對(duì)應(yīng)的選擇藥物篩選選擇標(biāo)記基因選擇藥物及其濃度β-丙酰胺酶基因(bla、Apr或Ampr)氨芐西林(Ap或Amp),

30~50μg/mL氯霉素?;D(zhuǎn)移酶基因(cat或Cmr)氯霉素(Cm或Cmp),30μg/mL卡那霉素抗性基因(npt、Knr或Kanr)卡那霉素(Kn或Kan),5μg/mL四環(huán)素抗性基因(tetR、Tcr或Tetr)四環(huán)素(Tc或Tet),12.5~15μg/mL鏈霉素抗性基因(str、Smr或Strr)鏈霉素(Sm或Str),25μg/mLlacZ’基因互補(bǔ)顯色試劑篩選(藍(lán)白篩選)lacZ’基因片段插入外源基因lacZ’基因片段未插入外源基因白色斑點(diǎn)藍(lán)色斑點(diǎn)X-gal和IPTG培養(yǎng)基根據(jù)報(bào)告基因篩選轉(zhuǎn)化子法β-葡聚糖酸糖苷酶基因(gus)篩選螢火蟲熒光素酶基因(luc)篩選綠色熒光蛋白基因(gfp)篩選綠色熒光蛋白基因(gfp)篩選轉(zhuǎn)化子根據(jù)形成噬菌斑篩選轉(zhuǎn)

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