河流水生態(tài)環(huán)境質(zhì)量監(jiān)測與評價技術(shù)指南（征求意見稿）

中華人民共和國國家環(huán)境保護(hù)標(biāo)準(zhǔn)

HJ□□□-20□□

河流水生態(tài)環(huán)境質(zhì)量監(jiān)測與評價

技術(shù)指南

TechnicalGuidelinesforWaterEco-environmentalQualityMonitoring

andEvaluatingofRiverandStream

（征求意見稿）

前言

為貫徹《中華人民共和國環(huán)境保護(hù)法》《中華人民共和國水污染防治法》和《水污染防

治行動計劃》（簡稱“水十條”），落實讓江河湖泊休養(yǎng)生息的要求，加強(qiáng)流域生態(tài)環(huán)境保護(hù)，

維護(hù)流域生態(tài)系統(tǒng)健康，指導(dǎo)我國河流水生態(tài)環(huán)境質(zhì)量監(jiān)測和評估工作，為河流水生態(tài)環(huán)境

保護(hù)和可持續(xù)發(fā)展提供技術(shù)支撐，制定本標(biāo)準(zhǔn)。

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了河流水生態(tài)質(zhì)量監(jiān)測中的監(jiān)測要素、水環(huán)境質(zhì)量監(jiān)測、生境調(diào)查、水生生

物監(jiān)測、質(zhì)量保證與質(zhì)量控制、河流水生態(tài)環(huán)境質(zhì)量評價等技術(shù)內(nèi)容。

本標(biāo)準(zhǔn)的附錄A～附錄M為資料性附錄。

本標(biāo)準(zhǔn)為首次發(fā)布。

本標(biāo)準(zhǔn)由生態(tài)環(huán)境部生態(tài)環(huán)境監(jiān)測司、法規(guī)與標(biāo)準(zhǔn)司組織制訂。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：中國環(huán)境監(jiān)測總站、生態(tài)環(huán)境部長江流域生態(tài)環(huán)境監(jiān)督管理局生態(tài)環(huán)

境監(jiān)測與科學(xué)研究中心、遼寧省生態(tài)環(huán)境監(jiān)測中心、黑龍江省生態(tài)環(huán)境監(jiān)測中心、哈爾濱師

范大學(xué)、南京農(nóng)業(yè)大學(xué)。

本標(biāo)準(zhǔn)由生態(tài)環(huán)境部負(fù)責(zé)解釋。

ii

河流水生態(tài)環(huán)境質(zhì)量監(jiān)測與評價技術(shù)指南

1適用范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了河流水生態(tài)環(huán)境質(zhì)量監(jiān)測中監(jiān)測要素、水環(huán)境質(zhì)量監(jiān)測、生境調(diào)查、水生

生物監(jiān)測、質(zhì)量保證和質(zhì)量控制、河流水生態(tài)環(huán)境質(zhì)量評價的相關(guān)指數(shù)和計算方法，以及河

流水生態(tài)環(huán)境質(zhì)量狀況的評價等級。本標(biāo)準(zhǔn)適用于淡水水體中可涉水溪流和不可涉水河流的

水生態(tài)環(huán)境質(zhì)量監(jiān)測和評價。

2規(guī)范性引用文件

本標(biāo)準(zhǔn)引用了下列標(biāo)準(zhǔn)中的內(nèi)容。凡未注明發(fā)布年份的引用文件，其有效版本適用于本

標(biāo)準(zhǔn)。

GB3838地表水環(huán)境質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

GB/T12990水質(zhì)-微型生物群落監(jiān)測PFU法

HJ493水質(zhì)采樣樣品的保存和管理技術(shù)規(guī)定

HJ494水質(zhì)采樣技術(shù)指導(dǎo)

HJ495水質(zhì)采樣方案設(shè)計技術(shù)規(guī)定

HJ/T52水質(zhì)河流采樣技術(shù)指導(dǎo)

HJ/T91地表水和污水監(jiān)測技術(shù)規(guī)范

3術(shù)語與定義

下列術(shù)語和定義適用于本標(biāo)準(zhǔn)。

3.1

河流River

由一定區(qū)域內(nèi)地表水和地下水補(bǔ)給，經(jīng)?；蜷g歇地沿著狹長凹地流動的水流。

3.2

生物監(jiān)測BiologicalMonitoring

利用生物個體、種群、群落等不同層次的狀況和變化闡明環(huán)境質(zhì)量狀況，從生物角度為

環(huán)境質(zhì)量的監(jiān)測和評價提供依據(jù)。

3.3

水生態(tài)環(huán)境質(zhì)量WaterEco-environmentQuality

以生態(tài)學(xué)理論為基礎(chǔ)，在特定的時間和空間范圍內(nèi)，不同尺度水體生態(tài)系統(tǒng)的組成要素

總的性質(zhì)及變化狀態(tài)。

3.4

生境Habitat

又稱棲息地，指生物個體、種群或群落生活地域的環(huán)境，包括必需的生存條件和其他對

1

生物起作用的生態(tài)因素。

3.6

參照點(diǎn)位ReferenceSite

能夠代表監(jiān)測和評價的水域內(nèi)，未受人為干擾（或所受人為干擾較?。┑木哂凶顑?yōu)的生

物及生境狀態(tài)的點(diǎn)位。

3.7

生物指數(shù)BioticIndex（BI）

基于特定類群的相對豐度、功能類群和其敏感性或耐受性而形成的單一指數(shù)或記分值。

3.8

生物完整性BiologicalIntegrity

是指在一個地區(qū)的棲息地中的群落所具有的種類組成、多樣性和功能結(jié)構(gòu)特征，以及該

群落所具有的維持自身平衡、保持結(jié)構(gòu)完整和適應(yīng)環(huán)境變化的能力。

3.9

生物完整性指數(shù)IndexofBiologicalIntegrity（IBI）

將一組與周圍環(huán)境關(guān)系密切、受干擾后反應(yīng)敏感、可代表目標(biāo)生物群落的各種結(jié)構(gòu)和功

能屬性的生物參數(shù)整合成單一記分值的指數(shù)，可以對水體進(jìn)行生物完整性評價。

4監(jiān)測要素

4.1監(jiān)測頻次與時間

4.1.1一般原則

充分考慮水域環(huán)境條件、生物類群的時空分布特點(diǎn)、監(jiān)測目的及人力、費(fèi)用投入，確定

監(jiān)測頻次和監(jiān)測時間。

4.1.1.1生物監(jiān)測應(yīng)依據(jù)生物的生命周期、生活史特征（如羽化期或繁殖期）、季節(jié)變化特

征、調(diào)查目的等因素確定監(jiān)測頻次，避開雨水集中時期，選擇合適的采樣時間；針對污染性

事故的監(jiān)測頻率必須同時考慮污染物影響的嚴(yán)重程度、持續(xù)時間，以及各生物類群的生命周

期及恢復(fù)能力。

4.1.1.2確保監(jiān)測結(jié)果在時間上的統(tǒng)一性，應(yīng)同一時期內(nèi)開展監(jiān)測，盡量縮短不同監(jiān)測位點(diǎn)

的時間跨度。

4.1.2監(jiān)測頻次

生物至少每年監(jiān)測2次。大型底棲無脊椎動物（簡稱底棲動物）生命周期長，屬于中長

期影響指標(biāo)，建議根據(jù)水期或季度開展監(jiān)測。著生藻類生命周期短，季節(jié)演替明顯，建議按

月開展監(jiān)測。

生境原則上每年調(diào)查1次；河岸帶植被隨季節(jié)變化顯著的建議每次監(jiān)測時同步開展調(diào)

查；當(dāng)發(fā)現(xiàn)生境受到人為干擾或特殊自然環(huán)境變化影響時要及時跟蹤調(diào)查。

水質(zhì)理化監(jiān)測可與生物采樣同時進(jìn)行，也可在生物采樣時間附近單獨(dú)進(jìn)行。水質(zhì)理化監(jiān)

測的時間頻次要求按照HJ/T91相關(guān)要求執(zhí)行。

2

4.1.3監(jiān)測時間

按年度監(jiān)測，一般選擇兩個不同水期（豐水期、平水期、枯水期）進(jìn)行，避開雨水集中

的時間；按季節(jié)監(jiān)測，分別在春、夏、秋、冬季進(jìn)行；按月度監(jiān)測，每月1次。

注：（1）若進(jìn)行季度或月度監(jiān)測，各季或各月監(jiān)測的時間間隔應(yīng)盡量一致；（2）季節(jié)間溫度變化不明

顯的河流水體可根據(jù)歷史數(shù)據(jù)變化情況，減少監(jiān)測頻次，但每年不少于2次；（3）若監(jiān)測時間無

法滿足實際采樣需求，如豐水期水量過大或枯水期斷流難以采樣，可根據(jù)河流水文氣候條件進(jìn)行

調(diào)整；（4）監(jiān)測頻次和時間應(yīng)根據(jù)人為干擾或特殊自然環(huán)境變化的影響程度和時間進(jìn)行調(diào)整。（5）

除各類群監(jiān)測內(nèi)容有單獨(dú)注明監(jiān)測時間，按照本節(jié)內(nèi)容確定監(jiān)測時間。

4.2點(diǎn)位設(shè)置

4.2.1設(shè)置原則

4.2.1.1連續(xù)性原則：盡可能沿用歷史觀測點(diǎn)位，保持監(jiān)測數(shù)據(jù)的連續(xù)性和可比性。

4.2.1.2一致性原則：生物監(jiān)測點(diǎn)位盡可能與水文測量、水質(zhì)監(jiān)測、生境調(diào)查點(diǎn)位相一致，

盡可能獲取足夠信息，用于解釋觀測到的生態(tài)環(huán)境質(zhì)量狀況。

4.2.1.3代表性原則：監(jiān)測點(diǎn)位應(yīng)具有足夠的代表性；如果監(jiān)測目的是大范圍、全面的流域

水生態(tài)質(zhì)量監(jiān)測，點(diǎn)位需覆蓋整個流域范圍；如果監(jiān)測目的是評估人為活動（挖沙、筑壩、

建設(shè)水電站等）或者污染事故的影響，則需在受影響及可能受影響區(qū)域設(shè)置點(diǎn)位。

4.2.1.4可行性原則：在確保達(dá)到監(jiān)測目的、保證必要的采樣精度和樣本量前提下，要兼顧

監(jiān)測采樣的可實施性，以期用最少的點(diǎn)位和人力、物力、時間投入，獲得最有效的數(shù)據(jù)。

4.2.2前期調(diào)查

選擇監(jiān)測點(diǎn)位前，需要對研究區(qū)域進(jìn)行前期調(diào)查，全面了解研究區(qū)域河流水文特征、生

境狀況、水環(huán)境質(zhì)量、生物群落特征等相關(guān)信息。

4.2.2.1調(diào)查水文、氣候、地質(zhì)（包括沉積類型）、地貌資料，如水位、水量、流速及流向

的變化，降水量、蒸發(fā)量及歷史水情變化。

4.2.2.2調(diào)查水體周圍城市和人口分布、工業(yè)布局、污染源及其排污情況、城市給排水情況、

農(nóng)業(yè)灌溉排水情況和農(nóng)藥、化肥的使用種類、數(shù)量及時間，掌握污染物的時空分布，以便選

擇適當(dāng)?shù)牟蓸訒r間、區(qū)域范圍和界限。

4.2.2.3調(diào)查水利工程的概況，如水電站、閘壩等分布情況和規(guī)模。

4.2.2.4調(diào)查水體沿岸土地利用和水資源（包括森林、礦產(chǎn)、土壤、耕地、水資源）現(xiàn)狀，

特別是植被破壞和水土流失情況。

4.2.2.5調(diào)查水體功能區(qū)情況，各類水功能區(qū)的分布，特別是飲用水源地分布和重點(diǎn)水源保

護(hù)區(qū)。

4.2.2.6實地調(diào)查采樣點(diǎn)的河寬、水深、河床結(jié)構(gòu)、河岸帶形態(tài)、交通狀況和可到達(dá)性等。

4.2.3設(shè)置方法

4.2.3.1溪流（可涉水河流）點(diǎn)位設(shè)置方法

根據(jù)4.2.2調(diào)查結(jié)果，將研究區(qū)域內(nèi)河流水文特征、生境狀況、水環(huán)境質(zhì)量、生物群落

3

特征差異明顯的區(qū)域分為不同的河段（初期監(jiān)測河段長度建議小于10km）。按照4.2.1設(shè)置

原則，在每個河段設(shè)置2～5個監(jiān)測點(diǎn)位。以監(jiān)測點(diǎn)位為中心，以上下游各50m（監(jiān)測河段

總長100m）的范圍為采樣區(qū)域。

4.2.3.2大型河流（不可涉水河流）點(diǎn)位設(shè)置方法

根據(jù)4.2.2調(diào)查結(jié)果，將研究區(qū)域內(nèi)河流水文特征、生境狀況、水環(huán)境質(zhì)量、生物群落

特征差異明顯的區(qū)域分為不同的河段（初期監(jiān)測河段長度應(yīng)小于50km，大江大河干流可根

據(jù)河段差異情況適當(dāng)放寬）。按照4.2.1設(shè)置原則，在每個河段設(shè)置2～5個監(jiān)測點(diǎn)位。以監(jiān)

測點(diǎn)位為中心，以上下游各500m（監(jiān)測河段總長1km）或上下游20倍河寬（監(jiān)測河段總

長為40倍河寬）范圍為采樣區(qū)域。

注1：根據(jù)監(jiān)測目的設(shè)置點(diǎn)位，建議在大型河流采樣區(qū)域內(nèi)等間隔設(shè)置6～11個生物采樣斷面，在每

個斷面左右5m區(qū)域進(jìn)行生物樣品采集。

注2：長期評估河段的確定應(yīng)根據(jù)初期監(jiān)測的結(jié)果進(jìn)行放寬調(diào)整。

注3：生物采樣避開橋梁下、閘壩下方和渡口等區(qū)域。

4.3參照點(diǎn)位的確定

4.3.1確定原則

4.3.1.1所選參照點(diǎn)位能反映未受干擾或干擾極小的生物群落、棲息地和水化學(xué)特征。

4.3.1.2所測定的人為產(chǎn)生污染物濃度應(yīng)處于較低水平。

4.3.1.3所測定的非人為產(chǎn)生污染物濃度應(yīng)保持在背景值水平范圍之內(nèi)。

4.3.1.4難以滿足4.3.1.1至4.3.1.3的要求，經(jīng)人為干擾變化較大的區(qū)域，可借助歷史數(shù)據(jù)

確立參照狀態(tài)，或根據(jù)調(diào)查區(qū)域中可獲得的最優(yōu)狀態(tài)建立參照狀態(tài)。

4.3.2確定方法

采用參照點(diǎn)位法，在河流水體自然環(huán)境調(diào)查基礎(chǔ)上綜合生境、水質(zhì)和生物三要素定性和

定量指標(biāo)確定參照點(diǎn)位。具體指標(biāo)如下：

4.3.2.1生境要素：調(diào)查區(qū)域上游無點(diǎn)源污染；農(nóng)田和城鎮(zhèn)覆蓋率低，調(diào)查點(diǎn)周邊區(qū)域無明

顯人類活動干擾跡象。

4.3.2.2水質(zhì)要素：水體清澈，透明度高，無異味。

4.3.2.3生物要素：生物優(yōu)勢種以清水種或敏感種為主。

5水環(huán)境質(zhì)量監(jiān)測

5.1監(jiān)測指標(biāo)

按照GB3838中常規(guī)監(jiān)測項目及對河流水環(huán)境質(zhì)量有指示意義的其他特征指標(biāo)。

5.2監(jiān)測方法

河流水質(zhì)樣品采集、保存和運(yùn)輸?shù)染凑誋J/T91、HJ493、HJ494、HJ495、HJ/T52

等標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行，實驗室分析方法均采用國家標(biāo)準(zhǔn)方法。

4

6生境調(diào)查

6.1設(shè)備及器材

6.1.1照相器具

照相機(jī)或攝像機(jī)、無人機(jī)等。

6.1.2測量工具

記錄標(biāo)志（標(biāo)尺）、現(xiàn)場水質(zhì)分析儀、全球衛(wèi)星定位系統(tǒng)設(shè)備、深度桿（探棒或聲波定

位儀）、激光測距儀。

6.1.3遙感解譯衛(wèi)片及解譯結(jié)果

選擇空間分辨率優(yōu)于2m的高分遙感數(shù)據(jù)對河流生境開展遙感調(diào)查。

6.2生境調(diào)查要素

6.2.1調(diào)查點(diǎn)位基本信息

調(diào)查記錄河流類型（冷水性、暖水性，山區(qū)型、平原型、河口型，間歇性、常年性），

河流的年內(nèi)或年際變化（如季節(jié)性干涸、潮汐）的時間變化性，河流的發(fā)源地（如冰川、山

區(qū)、濕地或沼澤）等特征信息。

記錄河流名稱、調(diào)查人員、調(diào)查日期和時間、采樣點(diǎn)編號、經(jīng)緯度和海拔等信息。

6.2.2天氣條件

調(diào)查記錄當(dāng)天、過去24h和過去7d內(nèi)的天氣狀況。

6.2.3河流岸邊帶及水域特征

6.2.3.1土地利用類型

調(diào)查記錄調(diào)查區(qū)域及周邊內(nèi)主要的土地利用類型，以及其他可能影響水質(zhì)的土地利用類

型，及土地使用中產(chǎn)生的污染類型和特征。

6.2.3.2沿岸侵蝕

觀察記錄調(diào)查區(qū)域是否存在或可能存在土壤流失、沿岸侵蝕，估測沿岸的穩(wěn)定程度和侵

蝕比例。

6.2.3.3沿岸生境

觀測并記錄河岸帶兩側(cè)和湖（庫）岸帶50m的區(qū)域內(nèi)植被特征、覆蓋度、多樣性、優(yōu)

勢植被類型及物種，觀測寬度可根據(jù)實際情況進(jìn)行調(diào)整。

6.2.3.4水域內(nèi)特征

觀察記錄調(diào)查區(qū)域大型木質(zhì)殘體分布特征、大型采砂、河道內(nèi)疏浚、建設(shè)閘壩和橋梁等

5

情況。

6.2.4河道特征

6.2.4.1河段：評價河段河長根據(jù)4.2.3內(nèi)容確定，或者根據(jù)調(diào)查目的確定評價河段起始位

置并獲取河段長度信息。監(jiān)測河段河長：一般不可涉水河流監(jiān)測斷面上、下游各500m范圍

內(nèi)為監(jiān)測河段河長；可涉水河流監(jiān)測斷面上、下游各50m范圍內(nèi)為監(jiān)測河段河長。

6.2.4.2河寬：推薦使用激光測距儀測量河段典型橫斷面的兩岸距離，若寬度不同，則采用

平均值。

6.2.4.3流速和水量：測量或估算河流流速、流量、水量（即河水淹沒區(qū)域與河道面積比例。）

6.2.4.4水深：推薦用深度桿、探棒或聲波定位儀進(jìn)行深度測量，計算平均深度。

6.2.4.5林冠蓋度：注明開闊區(qū)與覆蓋區(qū)的大體比例，可用密度計代替肉眼估測。

6.2.5常規(guī)水環(huán)境特征

6.2.5.1水體表觀性狀

觀察記錄水體顏色、氣味、表面漂浮物、表層油污、水體懸浮物等特征。

6.2.5.2基本水質(zhì)參數(shù)

現(xiàn)場測量并記錄水溫、水深、透明度、電導(dǎo)率、pH、渾濁度、溶解氧等參數(shù)值。

6.2.6常規(guī)沉積物和底層環(huán)境特征

6.2.6.1沉積物表觀性狀

描述記錄沉積物顏色、氣味、油污情況。

6.2.6.2底質(zhì)類別

描述記錄底質(zhì)類別（淤泥、泥沙、黏土、粗砂、礫石、卵石、巖石或其他）及其出現(xiàn)比

例。

6.2.6.3水生植物生長情況

描述記錄大型水生植物生長情況、類型、分布面積、優(yōu)勢物種等。

6.3記錄打分表

通過目測及無人機(jī)影像，在監(jiān)測河段和監(jiān)測湖庫區(qū)域內(nèi)，對6.2中內(nèi)容進(jìn)行調(diào)查，現(xiàn)場

方法難以確定生境狀態(tài)時應(yīng)結(jié)合遙感解譯結(jié)果進(jìn)行判定，填寫可涉水及不可涉水河流生境調(diào)

查數(shù)據(jù)表（附表A.1、附表A.2）?？晒串嬚{(diào)查河段簡圖，河流以箭頭標(biāo)明水流方向，必要時

應(yīng)附監(jiān)測水體的水系圖。記錄和保留現(xiàn)場調(diào)查的照片、影像資料。

評價參數(shù)由10個指標(biāo)構(gòu)成，詳見可涉水及不可涉水河流生境評分表（附表B.1、附表

B.2）?？缮嫠恿靼ǖ踪|(zhì)、棲息地復(fù)雜性、流速-深度結(jié)合特性、河岸穩(wěn)定性、河道變化、

河水水量狀況、河岸帶植被多樣性、水質(zhì)狀況、人類活動強(qiáng)度、河岸土地利用類型；不可涉

6

水河流包括底質(zhì)、棲息地復(fù)雜性、大型木質(zhì)殘體分布、河岸穩(wěn)定性、河道護(hù)岸變化、河水水

量狀況、河岸帶植被覆蓋率、水質(zhì)狀況、河道內(nèi)人類活動強(qiáng)度、河岸土地利用類型，評分范

圍為0～20。評價按照附表B.1和附表B.2評分并累計計算生境總得分。

進(jìn)行生境狀態(tài)評價時，應(yīng)注意以下問題：

（1）利用遙感解譯結(jié)果和近距離觀察相結(jié)合的方式進(jìn)行客觀評價；

（2）避免干擾采樣棲息地；

（3）至少由2人共同完成生境評價。

7水生生物監(jiān)測

7.1大型底棲無脊椎動物

7.1.1設(shè)備及材料

7.1.1.1采樣器材和器具

7.1.1.1.1D型網(wǎng)（圖1A）：紗網(wǎng)為40目篩絹，用于采集處于游動狀態(tài)的、在草叢、枯

枝落葉和底泥表層的底棲動物，可用于定性或定量樣品采集。

7.1.1.1.2踢網(wǎng)（圖1B）：40目篩絹，邊長1m×1m，主要適用于底質(zhì)為卵石或礫石且水

深小于1m的流水區(qū)定性或半定量樣品采集。

7.1.1.1.3索伯網(wǎng)（圖1C）：底邊50cm（長）×50cm（寬）×50cm（高）或25cm（長）

×25cm（寬）×25cm（高），網(wǎng)兜用40目的篩絹縫制，前者適用于深度小于50cm的溪流或

淺河定量樣品采集，后者適用于深度小于25cm的溪流或淺河定量樣品采集。

7.1.1.1.4抓斗采泥器（圖1D）：開口面積一般為1/16m2、1/12m2和1/10m2，用于水

深大于50cm的河流定量樣品采集，其僅適用于軟底質(zhì)河床且水流較緩的區(qū)域。

7.1.1.1.5籃式采樣器（圖1E）：屬于人工基質(zhì)采樣器，高20cm、直徑18cm的圓柱形

鐵籠，用8號和14號鐵絲編織，孔徑面積為4～6cm2，使用時，籠底先鋪一層40目尼龍

篩絹，再放上長約8cm的卵石。用于水深大于20cm的河流定量樣品采集。

7.1.1.1.6十字采樣器（圖1F）：屬于人工基質(zhì)采樣器，邊長40cm，高20cm，中間十

字分格，用鐵絲編織或用塑料網(wǎng)包圍，分別放入鵝卵石、水草、泥和沙。鵝卵石、水草下面

放一層40目的尼龍篩絹鋪底，泥、沙放入尼龍篩絹制作的網(wǎng)兜里，用于水深大于20cm的

河流定量樣品采集。

（A）D形網(wǎng)（B）踢網(wǎng)（C）索伯網(wǎng)

7

（D）抓斗采泥器（E）籃式采樣器（F）十字采樣器

圖1常見底棲動物采樣器材

7.1.1.1.7防護(hù)工具：防水連靴褲（齊胸靴褲或防水長靴）、橡膠手套（長袖）、蚊帽、長

探桿等；

7.1.1.1.8測量工具：溫度計、pH計、溶解氧測定儀、米尺、GPS、測距儀、測深儀（或

等效儀器）等；

7.1.1.1.9樣品收集及固定：鐵鍬、毛刷、白瓷盤、臉盆、塑料水桶、尖頭鑷子、40目

分樣篩、標(biāo)本瓶（30ml~100ml）、樣品瓶標(biāo)簽、固定液、標(biāo)準(zhǔn)網(wǎng)格托盤（30cm×36cm，約

30個6cm×6cm網(wǎng)格）等；

7.1.1.1.10照相器具：照相機(jī)或攝像機(jī)等；

7.1.1.1.11記錄工具：記錄紙、防水筆、底棲動物野外數(shù)據(jù)表等。

7.1.1.1.12鑒定設(shè)備及器材：解剖鏡、光學(xué)顯微鏡、培養(yǎng)皿、載玻片及蓋玻片、尖頭鑷子、

解剖針等。

7.1.1.2試劑：5%甲醛，70%左右乙醇。

7.1.2樣品采集

7.1.2.1溪流（可涉水河流）

7.1.2.1.1定量采集

推薦使用D型網(wǎng)、索伯網(wǎng)、采泥器、人工基質(zhì)籃式采樣器或十字采樣器。填寫采樣記

錄表，見附錄C。

用D形網(wǎng)采定量樣品時，將D形網(wǎng)放置于河底，使D形網(wǎng)的直邊緊貼河流底部，逆水

流方向從河流下游向上游移動一定距離（如1m），使樣品隨著攪動和流水的沖刷進(jìn)入網(wǎng)內(nèi)，

根據(jù)生物密度大小確定采樣面積。

用索伯網(wǎng)采樣時，將網(wǎng)口正對上游，先用手刷將框內(nèi)石塊、樹枝等基質(zhì)上的樣品順?biāo)?/p>

方向刷入網(wǎng)中，其余部分用鐵鍬挖深20cm～30cm，將框中的樣品趕入網(wǎng)中。每個點(diǎn)位采

集4筐，如果密度過低，應(yīng)適當(dāng)增加采樣筐數(shù)。

用采泥器采樣時，將采泥器打開，掛好提鉤，將采泥器緩緩放至底部，然后抖脫提鉤，

輕輕上提20cm，待兩頁閉合后，將其拉出水面，置于桶或盆內(nèi)，用雙手打開兩頁，使底質(zhì)

傾入桶內(nèi)，經(jīng)40目分樣篩篩去污泥濁水后揀出樣品。同一點(diǎn)位一般選擇3～5個樣點(diǎn)，每個

樣點(diǎn)采集2次～3次。如果采泥器未完全閉合，需重新采集。

8

用人工基質(zhì)籃式采樣器采樣時，采樣點(diǎn)要選擇采樣斷面上下一定范圍內(nèi)生境最好的（最

具代表性）點(diǎn)位，以便表達(dá)出水質(zhì)最佳（最具代表性）的狀態(tài)。每個采樣點(diǎn)至少放置兩個采

樣器，兩個采樣器用5m～6m的尼龍繩連接，或用尼龍細(xì)繩固定岸邊的固定物上，或用浮

漂做標(biāo)記。采樣器安放的位置要考慮到流速和生境的不同，放置時間為14d。取樣時，采樣

器提出水面后，放置到白磁盤或盆里（以免采到的樣品丟失）運(yùn)到岸邊，為了將人為的干擾

或破壞降到最低，應(yīng)避開走航、觀光河流的主干道。如果在樣品孵育期間發(fā)生洪水或沖刷等

情況，待水體平穩(wěn)后，重新安置人工基質(zhì)。定期了解采樣器材放置情況，如果樣品丟失要及

時補(bǔ)樣。如果條件允許可以雇漁民看護(hù)。

用十字采樣器采樣時，采樣器中分別放置不同的基質(zhì)，方法與人工基質(zhì)籃式采樣器采集

方法相同。

7.1.2.1.2定性采集

推薦使用D形網(wǎng)和踢網(wǎng)。填寫采樣記錄表，見附錄D。

用D形網(wǎng)采定性樣品時，迎水站立，深水可以采用“弓”字采法，采集一定面積；淺

水可一手將手抄網(wǎng)迎水插到底質(zhì)表面并握緊，用另一只手將其前面50cm～60cm見方小面

積上的石塊等基質(zhì)撿起，在手抄網(wǎng)前將附著的底棲動物剝離，以水流沖入網(wǎng)兜，然后用腳擾

動底質(zhì)，使底棲動物受到擾動，沖入網(wǎng)兜，持續(xù)大約30s。提起手抄網(wǎng)，轉(zhuǎn)移采集的樣品，

樣點(diǎn)周邊各種小生境均應(yīng)采樣。

用踢網(wǎng)采樣時，一人將踢網(wǎng)正對上游展開并固定在水體底部，另一人用腳或手?jǐn)_動網(wǎng)前

1m的河床底質(zhì)，利用水的流速將底棲動物沖刷入網(wǎng)。用踢網(wǎng)進(jìn)行采樣，移動性強(qiáng)的一些物

種會向側(cè)方游動而不被采獲。一般采集3～5個樣方，視樣品量而定，記錄采集樣方個數(shù)。

注1：不同位置的樣品：采樣區(qū)域在采樣點(diǎn)位上下50m范圍內(nèi)，每個點(diǎn)位需要采集至少3次；采樣人

員應(yīng)下水，在不同的基質(zhì)上采集；采樣范圍應(yīng)包括左右岸。

注2：不同生境的樣品：同一個點(diǎn)位要盡量采集石頭、沉水植物、沙子、草叢、底泥等各種生境（對

于生境復(fù)雜的樣點(diǎn)，根據(jù)不同生境的比例進(jìn)行采集，比如河道內(nèi)石塊占50%，沙子占20%，沉水

植物占30%）；單一生境采樣可采用梅花布點(diǎn)、一字布點(diǎn)，還可以采用S形布點(diǎn)，樣方的大小視

環(huán)境而定，一般不少于3個樣方；復(fù)合生境生采樣要考慮到生境、水深、流速等要素進(jìn)行布點(diǎn)。

注3：不同流速的樣品：要設(shè)主流（可涉）、淺灘、回水灣等不同流速的樣點(diǎn)。

注4：采集的順序應(yīng)該從下游至上游依次采集，避免上游采集時對下游采集點(diǎn)造成影響。

7.1.2.2大型河流（不可涉水河流）

不可涉河流底棲動物的樣品采集應(yīng)結(jié)合點(diǎn)位的底質(zhì)、水流、水深等環(huán)境條件確定相應(yīng)的

采樣方法。

7.1.2.2.1定量采集

軟底質(zhì)區(qū)域推薦使用抓斗采泥器，采樣方法同7.1.2.1.1；還可配合使用人工基質(zhì)籃式采

樣器或十字采樣器，采樣方法同7.1.2.1.1。

若采樣點(diǎn)位于河岸處淺水區(qū)或可涉水濕地，定量樣品的采集可參考7.1.2.1.1溪流及可涉

河流方法。

9

7.1.2.2.2定性采集

除用定量采樣方法采集定性樣品外，還可（但不限于）用三角拖網(wǎng)、D形網(wǎng)、人工基質(zhì)、

徒手采樣等方法采集定性樣品，應(yīng)盡可能在各種生境采樣。

用三角拖網(wǎng)采樣時，將拖網(wǎng)（帶有重錘）拋入水中，在船上緩慢拖行（船速2節(jié)左右），

至一定距離后提起拖網(wǎng)。將樣品連同底質(zhì)合并裝入樣品瓶中，貼上標(biāo)簽，帶回實驗室處理。

在一些特殊生境，如水中大型植物根部、倒木、大石塊基部等采樣點(diǎn)進(jìn)行定性樣品采集

時，可使用D形網(wǎng)。在根株生境采樣時，將D形網(wǎng)放在根株下游，用踢擊的方法促使生物

分離；在底質(zhì)粗糙（混合礫石、卵石或大石塊）生境采樣時，可將D形網(wǎng)底部緊貼在底質(zhì)

上，踢擊D形網(wǎng)上游0.5m2～1m2范圍內(nèi)的底質(zhì)，使生物從底質(zhì)上分離，多次踢擊后將樣

品合并；或者將D形網(wǎng)的直邊緊貼河流底部，向前拖動D形網(wǎng)，使樣品隨著攪動和流水的

沖刷進(jìn)入網(wǎng)內(nèi)。

7.1.3樣品挑揀與固定

在40目網(wǎng)篩中徹底沖洗樣品，清除雜質(zhì)和細(xì)小沉積物，直至水體澄清。沖洗大型有機(jī)

物質(zhì)（整片葉子、細(xì)枝、藻或大型水生植物根莖等）及雜質(zhì)，肉眼檢查無底棲生物后棄去。

盡量現(xiàn)場挑揀樣品，現(xiàn)場無法完成時，可加5%甲醛或70%左右乙醇保存固定，帶回實驗室

進(jìn)行挑揀。

一般情況下，樣品中的生物個體需全部挑揀。但當(dāng)某些種類生物數(shù)量極大時，可對該樣

品在混合均勻的情況下，采用網(wǎng)格法進(jìn)行分樣。分樣前，應(yīng)先隨機(jī)取少量樣品觀察，根據(jù)該

樣品的生物數(shù)量預(yù)估分樣量。分樣時，必須將全部樣品充分混勻，分樣樣品與剩余樣品分開，

單獨(dú)揀選并保存，以便進(jìn)行質(zhì)量控制檢查。

需挑揀樣品量不多時按二分法逐級減少取樣量（如1/2樣、1/4樣、1/8樣、1/16樣），

使每份樣中的較小型動物個體數(shù)量介于20～50個為宜，正常情況下揀出的生物總個體數(shù)應(yīng)

不少于100個。

需挑揀樣品量極多且樣品生物數(shù)量也極多則使用以下的基于200個個體的分樣方案，也

可使用其他分樣大?。?00個、300個或500個等）。

將沖洗后需分樣樣品放在帶標(biāo)記的標(biāo)準(zhǔn)網(wǎng)格托盤（見圖2）里均勻攤開。在實驗室記錄表中

需注明大型生物或明顯較多的生物，但不要將其從托盤中移走。

123456

1

236cm2

3

4

5

圖2網(wǎng)格托盤示意圖

隨機(jī)選擇網(wǎng)格托盤中的4個網(wǎng)格，移出所有材料（生物和殘體），將其放入4個單獨(dú)的

白色搪瓷盤，加人少量水，便于揀選。如果大約（經(jīng)粗略計數(shù)或觀察）有200個（±20%）

個體（4格累積），分樣即可完成。壓住網(wǎng)格線的個體，將其計入頭部所在的網(wǎng)格。如果無

10

法確定其頭部的位置（如蠕蟲），則將其計入大部分身體所在的網(wǎng)格。

如果生物密度足夠高，4個網(wǎng)格的生物體數(shù)量遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過200個，再將這4個網(wǎng)格內(nèi)的樣

品移到第2個網(wǎng)格托盤上。按第一次的做法，隨機(jī)選擇網(wǎng)格，進(jìn)行二級揀選，每次揀選一個

網(wǎng)格，直至分樣達(dá)到200個（±20%）。

為避免肉眼挑揀造成某些小個體物種的遺漏，用肉眼和解剖鏡相結(jié)合的方式進(jìn)行挑揀。

當(dāng)分樣挑揀時，逐份挑揀分樣樣品，當(dāng)所選分樣不斷有形態(tài)大小各異的個體揀出時，需

增加分樣進(jìn)行挑揀，直至沒有新的形態(tài)大小各異的個體揀出，同時必須保證揀出的動物樣本

個數(shù)不小于100個，記錄挑揀的分樣份數(shù)。

挑揀出的樣品可保存在加有少量5%甲醛或70%左右乙醇的廣口瓶中。挑揀過程中發(fā)現(xiàn)

小個體或罕見生物樣本時，應(yīng)單獨(dú)分裝保存，并予以記錄。樣品的挑揀以采樣當(dāng)天完成為最

佳，當(dāng)日挑揀工作出現(xiàn)中斷時應(yīng)將待挑揀樣品置0～4℃冷藏保存，保存時間一般不超過24h。

7.1.4鑒定和計數(shù)

7.1.4.1鑒定

樣品應(yīng)鑒定到盡可能低的分類單元，其中昆蟲綱（搖蚊除外）、甲殼綱、蛭綱、多毛綱

等應(yīng)盡可能鑒定到科，寡毛綱、昆蟲綱搖蚊科幼蟲應(yīng)盡可能鑒定到屬，腹足綱、雙殼綱應(yīng)盡

可能鑒定到種。鑒定過程中保留分類特征鑒定的照片憑證及標(biāo)本。底棲動物分類鑒定主要參

考檢索資料（建議）見附錄E。記錄下鑒定期間遇到的任何問題，填寫實驗室記錄表，檢查

分樣編號。

7.1.4.2計數(shù)

記錄下樣品中發(fā)現(xiàn)的種類及數(shù)量，同時標(biāo)明采樣點(diǎn)位、時間、采樣器材、種類鑒定的主

要特征。所有底棲動物都按頭部計數(shù)；軟體動物的死殼不計數(shù)。

7.1.4.2.1定量樣品

實測個體總數(shù)量除以采樣總面積（或人工基質(zhì)籠的總數(shù)），即可得該種類的棲息密度

（ind/m2或ind/籠）或生物量（g/m2）。

7.1.4.2.2定性樣品

采集的樣品中同一種類個體數(shù)在1～9個之間計“＋”，表示“出現(xiàn)”；在10～29個之間

計“＋＋”，表示“多”；大于30個計“＋＋＋”，表示“很多”。

7.1.4.3結(jié)果計算與表達(dá)

某一種（類）的個體密度（ind/m2或ind/籠）或生物量（g/m2）按照公式（1）計算：

d(b)icA

D(Bi)=（1）

A

2

式中，Di——i種的個體密度，ind/m或ind/籠；

2

Bi——i種的生物量，g/m；

11

di——i種的計數(shù)個體數(shù)，ind；

bi——i種的重量，g；

Ac——挑揀分樣數(shù)（二分法為1/2等，網(wǎng)格法為4/30等），無單位；

A——采樣面積，m2。

采樣點(diǎn)位（斷面）大型底棲無脊椎動物總個體密度和生物量（ind/m2）按照公式（2）

計算：

DB=ΣNDB（2）

()i=1()i

式中，D——采樣點(diǎn)位（斷面）總個體密度，ind/m2；

B——采樣點(diǎn)位（斷面）總生物量，g/m2；

2

Di——i種的個體密度，ind/m；

2

Bi——i種的生物量，g/m；

N——總分類單元數(shù)，個。

通過結(jié)果計算在底棲動物計數(shù)記錄表（附錄F）填寫該種類的個體密度、生物量。

7.1.5樣品保存

鑒定后的底棲動物樣品按點(diǎn)位和日期歸類放置在加有5%甲醛或70%左右乙醇的廣口瓶

中，封住瓶口。定期檢查補(bǔ)充保護(hù)劑。在廣口瓶外側(cè)附可黏貼標(biāo)簽，標(biāo)明樣品識別碼、日期

以及防腐劑。將永久性標(biāo)簽附于標(biāo)本瓶內(nèi)外側(cè)，附以下信息：水體名稱、點(diǎn)位編號、日期、

采集人姓名、防腐劑類型。原則上樣品至少保留4個月，有條件的實驗室可長期保存。

7.1.6結(jié)果填報

現(xiàn)場定量和定性采樣填寫現(xiàn)場記錄表附錄C和附錄D。各點(diǎn)位的數(shù)據(jù)整理后填寫在鑒

定結(jié)果表格附錄F中。

7.2著生藻類

7.2.1設(shè)備及材料

7.2.1.1野外采集器材

7.2.1.1.1采集與處理器材

不銹鋼勺、牙刷、鑷子、抹刀、刀片、剪刀、硅藻計、載玻片、托盤、一端帶膠圈的

PVC管、吸盤或吸管、洗瓶（裝蒸餾水用）、培養(yǎng)皿、帶冰塊的冷藏箱、丙烯酸纜繩、鋁箔、

500mL樣品瓶、透明膠帶。

7.2.1.1.2記錄工具

記號筆、鉛筆、標(biāo)簽紙、采集記錄本。

7.2.1.1.3實驗室保存和鑒定器材

配備10×、20×、40×、100×（油鏡）物鏡及10×、15×目鏡的相差或微分干涉顯微

12

鏡、浮游生物計數(shù)框、載玻片、蓋玻片、電熱平板、鑷子、200μl移液槍、酒精燈，恒溫水

浴鍋，膠頭滴管，1.5ml離心管、防酸手套、護(hù)目鏡、防護(hù)服、通風(fēng)櫥、紗布等。

7.2.1.2固定和前處理試劑器材

7.2.1.2.1樣品固定試劑

魯哥氏液（60g碘化鉀溶于少量水中，再加入40g碘，待碘溶解后定容至1000mL）；

福爾馬林（市售40%甲醛溶液）。

7.2.1.2.2硅藻前處理器材及試劑

酒精燈、膠頭滴管、移液槍、槍頭、燒杯、天平、試管、試管夾、試管架，1.5ml離心

管、記號筆、白膠布、剪刀，鑷子、防酸手套、乳膠手套，離心機(jī)、離心管及震蕩器，條件

具備可以用CEMMars微波消解儀等。

濃鹽酸（95%～98%）、濃硫酸（98%）、濃硝酸（65%～68%）、雙氧水（30%）、75％酒

精及蒸餾水等。

7.2.1.2.3藻類封片器材及試劑

載玻片、蓋玻片（20×20mm）、膠頭滴管、加熱板、標(biāo)本盒、磚石筆、鑷子、Naphrax

膠（折射率1.703）或加拿大樹膠；二甲苯或甲苯；蒸餾水等。

7.2.2野外采樣程序

7.2.2.1采樣點(diǎn)設(shè)置

著生藻類的采樣點(diǎn)位應(yīng)盡量與底棲動物以及常規(guī)理化監(jiān)測采樣點(diǎn)位保持一致。

7.2.2.1.1溪流（可涉河流）

一般情況下溪流著生藻類的采樣點(diǎn)位與底棲動物及常規(guī)理化監(jiān)測采樣點(diǎn)位應(yīng)保持一致。

7.2.2.1.2大型河流（不可涉河流）

通常在目標(biāo)河段上通過GPS以50m為間隔，設(shè)置11個橫斷面。選擇低潮線附近的岸

邊以及0.3m等深線附近的河邊作為著生藻類樣品采集區(qū)域。為避免受到人為活動干擾，盡

量選擇在河段上游區(qū)域采樣，遠(yuǎn)離排污口、大壩等。若采集現(xiàn)場無可用基質(zhì)或出于安全考慮

無法完成采集時，可對個別采樣點(diǎn)位置進(jìn)行修改?？紤]到大型河流水體的相對穩(wěn)定性、氣候

及著生藻類的生態(tài)特點(diǎn)，采樣時間優(yōu)先選擇每年的7月初至9月底。也可根據(jù)實際要求按不

同水期采集（例如，亞熱帶河流通常選擇枯水期采樣）。

7.2.2.2樣品采集

7.2.2.2.1定量樣品的采集

著生藻類定量樣品采集，一般選擇硅藻計法。

采樣器材的固定應(yīng)避開溪流中的急流和漩渦。硅藻計可以與底棲動物的籃式采樣器相

13

連，通過調(diào)節(jié)繩子的長短，保證硅藻計距離水面5cm～10cm，也可以參照GB/T12990的

掛放方式放置采樣器材。為避免丟失，每個采樣點(diǎn)至少放置2塊人工基質(zhì)。要求盡量將人工

基質(zhì)隱藏，避開走航、觀光河流的主干道。定期了解著生藻類建群情況，如采樣前發(fā)生洪水

或沖刷等情況，待水體平穩(wěn)后，需重新安置人工基質(zhì)，如樣品丟失應(yīng)及時補(bǔ)樣。條件允許可

以雇漁民照看，放置時間至少14d。取樣時填寫采樣記錄表（附錄G）。

因大型河流水流湍急無法固定采樣器材時，可根據(jù)現(xiàn)場情況選擇容易刮取和測量的天然

基質(zhì)，如粗礫石、鵝卵石以及樹木殘干等，從其表面刮取一定面積的樣品進(jìn)行定量分析。將

采集的基質(zhì)放置于漏斗中，用牙刷刷取基質(zhì)表面5cm×5cm的面積，用蒸餾水或純凈水沖

洗牙刷，使用樣品瓶收集沖洗混合物。若基質(zhì)無法從水體取出，使用刀片或鑷子刮取基質(zhì)表

面5cm×5cm的面積，用蒸餾水或純凈水沖刷刀片或鑷子，收集沖洗混合物進(jìn)樣品瓶。若

樣點(diǎn)內(nèi)無硬基質(zhì)，則使用注射器（或吸管）吸取25cm2的松散基質(zhì)，如：細(xì)砂、淤泥及黏

土等，收集至樣品瓶中。此外，也可將培養(yǎng)皿壓入松散基質(zhì)中，并在其下方滑動抹刀，將采

集到的松散基質(zhì)從培養(yǎng)皿中取出，收集至樣品瓶中。將采集到的樣品混合在樣品瓶中，加入

蒸餾水或純凈水至樣品瓶2/3處，立即放入4℃冰箱或在樣品瓶周圍加冰并避光保存。若樣

點(diǎn)為硬質(zhì)底質(zhì)或細(xì)礫石，可在采樣點(diǎn)上下游5m范圍內(nèi)尋找合適的基質(zhì)取樣或選擇墩、碼頭

等代替。出于安全考慮無法完成采集的樣點(diǎn)，可放棄該樣點(diǎn)的著生藻類采集，并在著生藻類

現(xiàn)場采樣記錄表中做好記錄。

7.2.2.2.2定性樣品的采集

定性樣品采集通常使用天然基質(zhì)法。采集所有生境（淺灘、急流、淺池、近岸區(qū)域）不

同基質(zhì)上的著生藻類樣品，將所有樣品混合裝入樣品瓶中，貼上臨時標(biāo)簽（臨時標(biāo)簽可以只

標(biāo)注樣品號或一次采集的統(tǒng)一編號）（見表1）。

表1著生藻類采集技術(shù)

基質(zhì)類型采集技術(shù)

砂礫、卵石、圓石及將基質(zhì)從水中緩慢移出，將表面較為光滑和略帶綠色、藍(lán)綠色或棕黃色的部分用牙

樹木殘骸刷或小刀刮取到裝有蒸餾水的樣品瓶中

苔蘚、大型藻類、維

刮取表面滑膩的部分放入樣品瓶，加少量蒸餾水

管植物及根塊

大塊巖石、河床巖石、將一端帶有膠圈的PVC管固定在基質(zhì)上，使其緊密相接。用牙刷或刮刀將基質(zhì)上的

原木及樹木藻類直接刮下，用水沖洗入PVC管，用吸管將藻類吸入樣品瓶中

沙子、淤泥和黏土等用培養(yǎng)皿壓入松散基質(zhì)中，并在其下方滑動抹刀，將培養(yǎng)皿中采集到的松散基質(zhì)沖

松散基質(zhì)洗到樣品瓶中。此外，也可使用勺子及吸管等采集

注：若采集地點(diǎn)沒有可以采集的基質(zhì)，建議使用25號浮游生物網(wǎng)對水體的浮游生物種類進(jìn)行定性采

集，以獲取較為豐富的種類類群。

7.2.2.3樣品的固定與保存

7.2.2.3.1定性樣品固定：按5%比例加入魯哥試液，如需長期保存需加入3%甲醛溶液。

7.2.2.3.2定量樣品固定：按5%比例加入魯哥試液，鑒定完成后如需長期保存加入3%

14

甲醛溶液。

7.2.2.3.3樣品保存：在樣品瓶外貼好標(biāo)簽，標(biāo)明采樣點(diǎn)信息、采樣日期以及樣品體積等。

用透明膠帶粘貼于標(biāo)簽外層，以防止標(biāo)簽脫落。將樣品置于樣品柜中密封并避光保存。

7.2.2.4標(biāo)識與記錄

7.2.2.4.1標(biāo)識：標(biāo)簽需標(biāo)注采樣地點(diǎn)、站位編號、日期、采集人姓名、固定液類型。

7.2.2.4.2記錄：在野外記錄本或著生藻類采樣記錄表中記錄下河流名稱、采樣位置、點(diǎn)

位編碼、采樣日期、采集人姓名、采樣方法及相關(guān)的生態(tài)信息，建立電子檔案保存。

7.2.3實驗室分析

7.2.3.1定性樣品

7.2.3.1.1非硅藻樣品

1）預(yù)處理：

方法一：常規(guī)制片法

將采集到的樣品根據(jù)其樣品中個體密度適當(dāng)沉淀、濃縮至適宜體積，觀察時，將樣品充

分搖晃均勻后靜置5～10s，用移液槍吸取液體中間略偏下位置的樣品滴放到載玻片上，制

成臨時裝片鑒定、計數(shù)。

注：由于著生樣品中多含有大量的泥沙，泥沙的重量普遍大于藻類，需靜置使其迅速沉淀至樣品瓶底，

以減少大量雜質(zhì)對鑒定造成的干擾，靜置的同時會導(dǎo)致藻類輕微沉降，所以吸取液體中下部的樣品。

方法二：甘油制片法

甘油封片法：①配置甘油封片試劑：按照甲醛：甘油：蒸餾水的體積比為4：10：86

配置甘油封片試劑；②按照一份（滴）樣品加兩份（滴）甘油封片試劑的比例置于載玻片上；

③待蒸餾水揮發(fā)后（根據(jù)室溫、濕度條件不同有一定的差異，一般為24h）補(bǔ)充封片試劑一

次（兩份/兩滴）；④待蒸餾水再次揮發(fā)后蓋上蓋玻片置于顯微鏡下進(jìn)行鑒定，使用時間與外

界條件有關(guān)，一般為2d～3d。

注：由于接觸生物監(jiān)測時間較短的人員開展種類鑒定較為困難，而受空氣、光源等因素影響，臨時裝

片樣品中的水分可能快速揮發(fā)，影響對樣品的觀察。因此也可以將樣品制成甘油封片，減少鑒定中因

外界因素產(chǎn)生的困難。

2）種類鑒定

將樣品裝片置于10×40倍顯微鏡下觀察鑒定至屬或種。推薦采用的鑒定參考資料見附

錄E。

7.2.3.1.2硅藻樣品

（1）預(yù)處理

硅藻種類的形態(tài)學(xué)鑒別主要依據(jù)其紋飾和殼體形狀，因此，在鑒定之前，首先要進(jìn)行樣

品預(yù)處理去除硅藻細(xì)胞中的原生質(zhì)，僅保留主要帶花紋和紋飾的硅質(zhì)外殼。檢測人員可根據(jù)

實驗室情況從以下兩種推薦方法中選擇合適的方法進(jìn)行硅藻樣品的預(yù)處理。

方法一：三酸法

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根據(jù)樣品藻密度酌情吸取15～20ml樣品置于離心管內(nèi)，1500r/min離心8min；棄去上

清液，保留沉淀（1～2ml）；（以下步驟需在通風(fēng)櫥中進(jìn)行）

①用試管夾夾住試管在酒精燈上加熱，至標(biāo)本中的液體全部蒸發(fā)；

②加入3～4滴濃鹽酸繼續(xù)加熱，至顏色變深，液體大部分蒸發(fā)；

③加入2～4滴濃硫酸加熱，至試管中的液體逐漸變黑，并產(chǎn)生大量氣泡；

④加熱直至試管中的液體變?yōu)樘亢谏?，不再產(chǎn)生氣泡并伴有白色氣體冒出；

⑤加入2～3滴濃硝酸，此時反應(yīng)劇烈并伴有響聲，有大量棕紅色氣體冒出；

⑥繼續(xù)加熱直至沉淀物變?yōu)榈S色或無色，氣體變?yōu)榘咨?/p>

方法二：微波硝酸消解法

①搖勻硅藻樣品，吸取10ml至離心管內(nèi)，1500r/min離心8min，去上清液后將離心管

內(nèi)的沉淀物轉(zhuǎn)至消解管內(nèi)（如果野外采集的標(biāo)本里有水草、苔蘚等移液槍不能吸取的物質(zhì)，

首先震蕩標(biāo)本瓶，盡可能使附著在這些基質(zhì)上的硅藻脫落，然后在吸取完10ml液體以后，

再用鑷子鑷取少許水草、苔蘚等基質(zhì)入消解管等待下一步處理）；

②在消解管內(nèi)加入10ml濃硝酸，蓋好消解管的內(nèi)外蓋后放入消解儀內(nèi)，選擇180℃程

序消解2h（消解過程中應(yīng)將與消解儀連通的通風(fēng)廚打開）；

③待消解完成后，在通風(fēng)廚下打開消解管蓋使其冷卻，冷卻后的樣品轉(zhuǎn)移到容量為15ml

的離心管內(nèi)。

（2）處理后樣品的洗滌

將預(yù)處理后的樣品以3000r/min的速度離心5min，用膠頭滴管棄去上清液，保留沉淀

物，加入蒸餾水反復(fù)沖洗后再次離心。整個過程重復(fù)5～7次。

（3）處理后樣品的保存

最后一次離心結(jié)束后，用移液槍小心移去上清液，盡可能移取干凈，然后在離心管內(nèi)加

入0.5ml無水乙醇，用移液槍搖勻后將樣品轉(zhuǎn)移至1.5ml的離心管中，用無水乙醇清洗幾

次離心管，盡可能將所有樣品都轉(zhuǎn)移到離心管中，貼好樣品標(biāo)簽，放入標(biāo)本盒保存。由于酒

精具有揮發(fā)性，需要每隔一段時間補(bǔ)充酒精。永久封片制作方法如下：

方法一：加拿大樹膠封片

①用二甲苯浸泡加拿大樹膠，使其變?yōu)檎吵頎畹囊后w（大約需要兩周的時間）；

②將載玻片和蓋玻片洗凈、擦干，放到一旁保持干燥；

③搖晃裝有干凈標(biāo)本的微型離心管，使標(biāo)本沉淀與酒精均勻混合成懸濁液；

④用移液槍吸取10μl～20μl硅藻的懸濁液，滴在蓋玻片上并涂勻，放在熱平板（60℃～

70℃）上干燥；

⑤在載玻片中間滴一滴泡好的加拿大樹膠，將蓋玻片涂有標(biāo)本的一面向下蓋在膠上，使

膠慢慢散開，接近或完全擴(kuò)散到整張蓋片上；

⑥用記號筆在載玻片上做好標(biāo)記，防止混亂，室溫干燥；

⑦封片完全干燥后（大約需要3d～4d），即可觀察；

⑧待一次樣品封片全部制作完畢后統(tǒng)一制作、粘貼標(biāo)簽。

方法二：Naphrax膠封片

①用甲苯浸泡Naphrax膠，使其達(dá)到合適的粘稠度；

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②將載玻片和蓋玻片洗凈、擦干，放到一旁保持干燥；

③搖勻裝有干凈標(biāo)本的微型離心管，使標(biāo)本沉淀與酒精均勻混合成懸濁液；

④用移液槍吸取10μl～20μl的懸濁液，滴在蓋玻片上涂勻，放在熱平板上干燥；

⑤在載玻片中間滴一滴泡好的Naphrax膠，將蓋玻片涂有標(biāo)本的一面向下蓋在膠上，使

膠慢慢散開，接近或完全擴(kuò)散到整張蓋片上；

⑥將載玻片放在150℃～160℃的加熱板上加熱3min～5min，使封片膠充分液化且氣

泡完全被排出（將甲苯揮發(fā)完）；

⑦用記號筆在載玻片做好標(biāo)記，防止混亂，待封片冷卻干燥后即可觀察；

⑧待一次樣品封片全部制作完畢后統(tǒng)一制作、粘貼標(biāo)簽。

（4）種類鑒定

將藻類封片樣品置于10×100倍油鏡（含DIC相差功能的顯微鏡）下觀察，樣品盡量

鑒定至屬及以下。對于光學(xué)顯微鏡下形態(tài)特征難以鑒定的種類，可通過掃描電子顯微鏡進(jìn)行

鑒定。

掃描電子顯微鏡觀察標(biāo)本的準(zhǔn)備方法如下：

在銅制樣品臺上貼上導(dǎo)電膠，在膠上貼上圓形蓋玻片，滴上5μl～10μl處理后的標(biāo)本，

自然干燥。標(biāo)本干燥后，在真空條件下噴金3min，即可觀察鑒定。

種類鑒定推薦鑒定參考資料見附錄E。

7.2.3.1.3結(jié)果記錄

鑒定、計算后填寫定性鑒定記錄表（見附錄H）。

7.2.3.2定量樣品（沉降計數(shù)法）

7.2.3.2.1藻類預(yù)處理

選用合適的器皿，盡量減少樣品轉(zhuǎn)移的次數(shù)，將著生藻類樣品濃縮、沉淀后，定容至

20ml～50ml（根據(jù)不同樣品中生物個體的密度調(diào)整定容的體積）。將濃縮樣品充分搖晃均

勻后，取0.1ml置于浮游生物計數(shù)框中（圖3）鑒定計數(shù)。

圖3浮游生物計數(shù)框

7.2.3.2.2藻類鑒定

在10×40顯微鏡下，將藻類鑒定至屬或種級分類水平，其中優(yōu)勢種要求鑒定到種。如

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有大量硅藻出現(xiàn)，建議按照定性樣品中對硅藻的處理方法進(jìn)行封片，在10×100的顯微鏡下

進(jìn)行鑒定，用此結(jié)果對10×40倍鏡的鑒定結(jié)果進(jìn)行校正。

7.2.3.2.3藻類計數(shù)

（1）長條計數(shù)法

選取兩相鄰刻度從計數(shù)框的左邊一直計數(shù)到計數(shù)框的右邊稱為一個長條。與下沿刻度相

交的個體，應(yīng)計數(shù)在內(nèi)，與上沿刻度相交的個體，不計數(shù)在內(nèi)，與上、下沿刻度都相交的個

體，以生物體的中心位置作為判斷的標(biāo)準(zhǔn)，也可在低倍鏡下，按上述原則單獨(dú)計數(shù)，最后加

入總數(shù)之中。一般計數(shù)三條，即第2、5、8條（如圖4A所示），若藻體數(shù)量太少，則應(yīng)全

片計數(shù)。

（A）長條計數(shù)法（B）對角線計數(shù)法

圖4計數(shù)方法示意圖

（2）對角線計數(shù)法

對于剛開始從事生物監(jiān)測工作的人員，在長期鑒定計數(shù)中，推薦對計數(shù)框中的樣品按照

對角線進(jìn)行計數(shù)（如圖4B所示），每0.1ml樣品計數(shù)5或10個小格，重復(fù)計數(shù)多次，共計

數(shù)30個小格。

對絲狀體和一些較小的群體，可以先計算個體數(shù)，然后求出該種類個體的平均細(xì)胞數(shù)，

對于群體，可通過加熱、超聲波振蕩等方法使其散開成為單個細(xì)胞或少數(shù)細(xì)胞的群體，進(jìn)而

完成計數(shù)。

（3）硅藻的計數(shù)

若需要對硅藻群落進(jìn)行精細(xì)分析，可在硅藻封片中計數(shù)400～600個硅藻殼面（羽紋綱

硅藻一個完整的藻體由兩個殼面組成，中心綱硅藻鏈狀由兩個殼面組成），計算每個種類的

相對豐度，以此分析群落組成情況。

注：當(dāng)硅藻細(xì)胞嚴(yán)重?fù)p壞（損壞超過3/4），上下殼面完全分離以及空無紋飾時不計數(shù)。

7.2.3.2.4結(jié)果計算

樣品中單位面積藻類的個體數(shù)量n（cell/cm2）按照公式（3）計算：

nV

n=ii（3）

VS

式中，n——單位面積藻類個體數(shù)量，cell/cm2；

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ni——抽樣的總個體數(shù)量，cell；

V——抽樣體積，ml；

Vi——定容總體積，ml；

S——采樣總面積，cm2。

7.2.3.2.5結(jié)果記錄

鑒定、計算后填寫定量鑒定記錄表（見附錄I）。

8質(zhì)量保證與質(zhì)量控制

8.1野外質(zhì)量保證與控制

8.1.1樣品的采集

8.1.1.1制定合理的采樣計劃，用符合質(zhì)量要求的統(tǒng)一設(shè)備采樣，采樣地點(diǎn)以GPS定位為

準(zhǔn)，保證采集樣品的代表性和可比性。

8.1.1.2采集現(xiàn)場要設(shè)負(fù)責(zé)人，對采樣點(diǎn)位、采樣實施、采集效果進(jìn)行評估。

8.1.1.3野外設(shè)備應(yīng)處于良好狀態(tài)，野外監(jiān)測、記錄數(shù)據(jù)必須完整、規(guī)范、清晰。

8.1.1.4合理安排現(xiàn)場監(jiān)測與樣品采集順序，一般順序為物理生境記錄、水樣采集、著生藻

類采集、底棲動物采集，盡量避免生物類群在采集前受到較大擾動。定量采樣應(yīng)在定性采樣

前進(jìn)行。

8.1.1.5生物樣品采集過程中，要由指定人員檢查樣品采集過程是否符合采集要求，保存方

法是否符合規(guī)范。

8.1.1.6生境調(diào)查至少應(yīng)有2人同時完成記錄和評價；不同調(diào)查周期下同一河段的生境調(diào)查

建議由同批人員完成。

8.1.1.7正確填寫現(xiàn)場采樣記錄表及樣品標(biāo)簽，包括樣品編號、日期、水體名稱、采樣位置、

采樣量以及采樣人姓名等。如果某個點(diǎn)位某個項目的樣品瓶超過1個，還應(yīng)當(dāng)標(biāo)明樣品的總

瓶數(shù)及編號。樣品記錄表包含的信息必須與樣品瓶標(biāo)簽一致。

8.1.1.8及時清洗所有接觸過樣品的采樣設(shè)備，并仔細(xì)檢查，防止采樣污染。

8.1.2樣品的保存

及時現(xiàn)場處理及保存樣品。水質(zhì)樣品按相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)及規(guī)定保存，不同的生物樣品需要按照

本標(biāo)準(zhǔn)各類群生物保存要求進(jìn)行單獨(dú)分裝，按規(guī)定冷藏或固定，同時按規(guī)定時間完成后續(xù)操

作。

8.1.3樣品的運(yùn)輸

8.1.3.1運(yùn)輸前根據(jù)采樣記錄或登記表核對清點(diǎn)樣品，以免有誤或丟失。

8.1.3.2樣品運(yùn)輸中貯存溫度不超過采樣時的溫度，必要時準(zhǔn)備冷藏設(shè)備。

8.1.3.3運(yùn)輸中應(yīng)避免強(qiáng)光照射及強(qiáng)烈震動，確保樣品無破損、無污染。

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8.1.4記錄

詳細(xì)記錄采樣時間、地點(diǎn)、水溫、氣溫、水文、植被等相關(guān)信息，確?，F(xiàn)場數(shù)據(jù)的完整

性。

現(xiàn)場樣品運(yùn)輸交接過程中需仔細(xì)核對實際樣品信息和記錄信息的一致性，防止丟失、混

淆等。

8.2實驗室質(zhì)量保證與控制

8.2.1樣品交接與記錄

8.2.1.1樣品交接時，應(yīng)辦理正式交接手續(xù)，檢查采樣記錄表信息與樣品是否一致，由接收

樣品的工作人員記錄其狀態(tài)，檢查是否異常或與方法中標(biāo)準(zhǔn)狀態(tài)是否有所偏離。同一任務(wù)的

樣品應(yīng)保存在相對獨(dú)立、集中的區(qū)域，并放置明顯的標(biāo)識。

8.2.1.2實驗室應(yīng)建立送檢樣品的唯一識別系統(tǒng)，以保證樣品不會發(fā)生混淆。

8.2.2物種鑒定和計數(shù)

8.2.2.1樣品鑒定應(yīng)基于統(tǒng)一的分類資料進(jìn)行，命名需要與環(huán)境監(jiān)測部門發(fā)布的物種名錄或

物種多樣性數(shù)據(jù)庫名稱相吻合，必要時應(yīng)請專家對命名進(jìn)行核定。

8.2.2.2有疑問或不確定的物種，需要請分類學(xué)專家對該物種進(jìn)行確認(rèn)。

8.2.2.3新種、新記錄種必須留出典型、完好的樣品制作標(biāo)本，永久保存，并請分類學(xué)專家

進(jìn)行確認(rèn)。

8.2.2.4抽取一定比例的樣品（如10%），分別由2名工作人員重復(fù)計數(shù)，以評估分類和計

數(shù)的精確性及偏差。

8.2.2.5定期聘請相關(guān)專業(yè)人員對樣品進(jìn)行抽檢，抽檢比例為10%，以評估該實驗室分類

鑒定和計數(shù)結(jié)果的準(zhǔn)確性，并記錄偏差情況。

8.