動物細胞工程常用的技術手段

關于動物細胞工程常用的技術手段動物細胞工程常用的技術手段：動物細胞培養(yǎng)、動物細胞核移植、動物細胞融合、單克隆抗體動物細胞培養(yǎng)技術是其他動物細胞工程技術的基礎。提問：植物細胞工程常用的技術手段有哪些？植物組織培養(yǎng),植物體細胞雜交第2頁,共45頁，2024年2月25日，星期天動物細胞培養(yǎng)和核移植技術動物細胞培養(yǎng)就是從動物機體內取出相關的組織，將它分散成單個細胞，然后，放在適宜的培養(yǎng)基中，讓這些細胞生長和增殖。1、選材：

動物胚胎或幼齡動物的組織、器官，它們細胞增殖能力強，分裂旺盛，分化程度低，容易培養(yǎng)。第3頁,共45頁，2024年2月25日，星期天在進行動物細胞培養(yǎng)時，用胰蛋白酶分散細胞，說明細胞間的物質主要是蛋白質。動物細胞培養(yǎng)適宜的PH為7.2—7.4，此環(huán)境下胃蛋白酶（2.0）沒有活性，而胰蛋白酶(7.2-8.4)的活性較高。2.分散成單個細胞第4頁,共45頁，2024年2月25日，星期天3.動物細胞生長特性：細胞貼壁：懸液中分散的細胞很快就貼附在瓶壁上，稱為細胞貼壁。要求：

培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿的內表面光滑、無毒、易于貼附。細胞的接觸抑制：當貼壁細胞分裂生長到表面相互接觸時，細胞就會停止分裂增殖，這種現象稱為細胞的接觸抑制。

第5頁,共45頁，2024年2月25日，星期天4.過程：第6頁,共45頁，2024年2月25日，星期天細胞懸浮液10代細胞50代細胞無限傳代原代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)細胞株細胞系5.如何界定原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)；細胞株和細胞系？多數組織細胞固定在表面生長和分裂。隨細胞增多，細胞就會停止分裂增殖遺傳物質改變第7頁,共45頁，2024年2月25日，星期天動物胚胎或幼齡動物的組織、器官胰蛋白酶剪碎單個細胞加培養(yǎng)液制成細胞懸浮液細胞株細胞系細胞增值無限傳代去掉組織間蛋白動物細胞培養(yǎng)不能最終培養(yǎng)成生物體第8頁,共45頁，2024年2月25日，星期天動物細胞培養(yǎng)條件：1、無菌、無毒的環(huán)境（添加一定量的抗生素，定期更換培養(yǎng)液）2、營養(yǎng)（葡萄糖、氨基酸、無機鹽、維生素、動物血清等。）3、溫度和PH

36.5+（-）0.5度,7.2-7.44、氣體環(huán)境：

O2和CO2（95%空氣和5%CO2）保證細胞順利的生長增殖第9頁,共45頁，2024年2月25日，星期天動物細胞培養(yǎng)液的主要成分：葡萄糖、氨基酸、無機鹽、維生素和動物血清等。與植物培養(yǎng)基相比其特點是：（1）液體培養(yǎng)基（2）含有動物血清（一）動物細胞培養(yǎng)動物體細胞大都生活在液體的環(huán)境第10頁,共45頁，2024年2月25日，星期天細胞的全能性細胞株、細胞系植物體培養(yǎng)結果獲得細胞或細胞產物快速繁殖、培育無病毒植株等培養(yǎng)目的葡萄糖、動物血清蔗糖、植物激素培養(yǎng)基特有成分液體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基培養(yǎng)基性質細胞增殖原理動物細胞培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)比較項目植物細胞和動物細胞培養(yǎng)的比較第11頁,共45頁，2024年2月25日，星期天動物細胞培養(yǎng)應用大規(guī)模培養(yǎng)生產生物制品（病毒疫苗、干擾素、單克隆抗體）作為基因工程中的受體細胞培養(yǎng)的動物細胞可以用于檢測有毒物質，判斷某種物質的毒性為治療和預防癌癥及其他疾病提供理論依據第12頁,共45頁，2024年2月25日，星期天二、動物體細胞核移植技術:將動物的一個細胞的細胞核，移入一個已經去掉細胞核的卵母細胞中，使其重組并發(fā)育成一個新的胚胎，這個新的胚胎最終發(fā)育成動物個體。用核移植的方法得到的動物稱為克隆動物核移植胚胎細胞核移植體細胞核移植（難度高）受體細胞：MⅡ期的卵母細胞第13頁,共45頁，2024年2月25日，星期天卵細胞Ａ母綿羊Ｂ母綿羊乳腺細胞細胞質細胞核細胞核移植早期胚胎卵裂C母綿羊子宮胚胎移植多莉羊分娩妊娠多莉羊的培育過程融合后的卵細胞第14頁,共45頁，2024年2月25日，星期天克隆動物的研究意義1.克隆動物作為生物反應器，生產醫(yī)用蛋白2.改良動物品種3.治療人類疾病，作為供體4.保護瀕危動物體細胞核移植技術存在的問題：許多克隆動物表現出遺傳和生理缺陷，如體型過大，異常肥胖，發(fā)育困難，臟器缺陷，免疫失調等。第15頁,共45頁，2024年2月25日，星期天1、在動物細胞培養(yǎng)過程中遺傳物質發(fā)生改變的細胞是--------------------（）

A．細胞系B．細胞株

C．原代細胞D．傳代細胞2、動物細胞工程技術的基礎是------（）

A.動物細胞融合B.單克隆抗體

C.胚胎移植D.動物細胞培養(yǎng)

AD第16頁,共45頁，2024年2月25日，星期天3、用于動物細胞培養(yǎng)的組織和細胞大都取自胚胎或出生不久的幼齡動物的器官或組織，其主要原因是這樣的組織細胞（）

A.容易產生各種變異

B．具有更強的全能性

C.取材十分方便

D．分裂增殖的能力強D第17頁,共45頁，2024年2月25日，星期天4.動物細胞培養(yǎng)與植物細胞培養(yǎng)的重要區(qū)別在于------------------------------（）

A.培養(yǎng)基不同；

B.動物細胞培養(yǎng)不需要在無菌條件下進行；

C.動物細胞可以傳代培養(yǎng)，而植物細胞不能；

D.動物細胞能夠大量培養(yǎng)，而植物細胞只能培養(yǎng)成植株。A第18頁,共45頁，2024年2月25日，星期天植物體細胞雜交的意義：打破生殖隔離，克服遠緣雜交不親和的障礙，培育作物新品種第19頁,共45頁，2024年2月25日，星期天（二）動物細胞融合1.過程：誘導方式物理法化學法生物法：滅活的病毒仙臺病毒紫外線喪失感染性（不感染細胞）保留融合活性（誘導細胞融合）第20頁,共45頁，2024年2月25日，星期天（二）動物細胞融合1.過程：滅活的病毒顆粒黏附于細胞表面細胞膜被病毒顆粒穿通細胞膜連接細胞融合，形成雜種細胞（細胞膜具有一定的流動性）第21頁,共45頁，2024年2月25日，星期天(三）單克隆抗體1.其由何種細胞產生？2.主要分布在哪里？3.如何得到抗體？提問？第22頁,共45頁，2024年2月25日，星期天(三）單克隆抗體抗體1?？乖瓌游矬w內刺激效應B抗原動物體內刺激效應B抗體抗原不純抗體不純篩選單一效應B細胞不能增值產生大量抗體2。特異性差、純度低；產量低、反應不夠靈敏第23頁,共45頁，2024年2月25日，星期天(三）單克隆抗體設計方案：一個B淋巴細胞－－只分泌一種特異性抗體小鼠骨髓瘤細胞－－能無限增殖-化學性質單一、特異性強的抗體。雜種細胞第24頁,共45頁，2024年2月25日，星期天？

？誘導其融合的方法有哪些？抗原效應B細胞(三）單克隆抗體2.制備過程：第25頁,共45頁，2024年2月25日，星期天BBBB瘤瘤瘤瘤細胞融合后培養(yǎng)液中有幾種細胞篩選雜種細胞已知細胞合成DNA有D和S兩條途徑，其中D途徑能被氨基嘌呤阻斷。人淋巴細胞中有這兩條DNA合成途徑，但一般不分裂增值。鼠骨髓瘤細胞中盡管沒有S途徑，但能不斷分裂增值，將這兩種細胞在試管中混合，加PEG促融，獲得雜種細胞。第26頁,共45頁，2024年2月25日，星期天主要用于制備單克隆抗體獲得雜種植株用途物理、化學方法（同左）滅活的病毒物理（離心、振動、電刺激）化學（聚乙二醇）誘導方法使細胞分散后誘導細胞融合去除細胞壁后誘導原生質體融合細胞融合的方法細胞膜的流動性細胞膜的流動性、植物細胞全能性原理動物細胞融合植物體細胞雜交比較項目植物、動物細胞融合的比較第27頁,共45頁，2024年2月25日，星期天除通過雜交瘤細胞產生單克隆抗體外，還有什么方法？第28頁,共45頁，2024年2月25日，星期天3.單克隆抗體的應用：①在基礎理論研究中具有重要意義②在疾病診斷、治療和預防方面，具有特異性高、靈敏度高等優(yōu)越性。③生物導彈(三）單克隆抗體第29頁,共45頁，2024年2月25日，星期天總結一種誘導細胞融合的新方法一種新細胞滅活病毒雜交瘤細胞一個優(yōu)勢單克隆抗體特異性強、靈敏度高的優(yōu)勢第30頁,共45頁，2024年2月25日，星期天多莉與“母親”第31頁,共45頁，2024年2月25日，星期天卵細胞Ａ母綿羊Ｂ母綿羊乳腺細胞細胞質細胞核細胞核移植早期胚胎卵裂C母綿羊子宮胚胎移植多莉羊分娩妊娠多莉羊的培育過程融合后的卵細胞第32頁,共45頁，2024年2月25日，星期天克隆動物的研究意義1.用于生物學和醫(yī)學研究的實驗動物2.改良動物品種3.治療人類疾病4..保護瀕危動物第33頁,共45頁，2024年2月25日，星期天6.世界上第一只克隆綿羊“多莉”的培育等程序如圖所示。請仔細看圖后回答問題：黑面綿羊去核卵細胞白面綿羊卵腺細胞核重組細胞早期胚胎另一頭母綿羊子宮克隆綿羊多莉ab電脈沖處理妊娠、出生⑴寫出ａ、ｂ所指的細胞工程各稱：ａ

ｂ

。⑵實施細胞工程ａ時，所需的受體細胞大多采用動物卵細胞的原因是：。⑶多莉面部的毛色是

，判斷依據：

。⑷繼植物組織培養(yǎng)之后，克隆綿羊培育成功，證明動物細胞也具有

。⑸請舉例說明克隆綿羊培育成功的實際意義：。第34頁,共45頁，2024年2月25日，星期天動物的胚胎移植解決某些妊娠時間長、每胎產子數量少的優(yōu)良種畜的繁殖速度問題。第35頁,共45頁，2024年2月25日，星期天1、科學家用小鼠骨髓瘤細胞與某種細胞融合，得到雜交細胞，經培養(yǎng)可產生大量的單克隆抗體，與骨髓疤細胞融合的是（）A.經過免疫的B淋巴細胞B.沒經過免疫的T淋巴細胞

C.經過免疫的T淋巴細胞D.沒經過免疫的Ｂ淋巴細胞A鞏固練習第36頁,共45頁，2024年2月25日，星期天2..動物細胞融合的目的中最重要的是----------------（）A.克服遠緣雜交不親和B.制備單克隆抗體C.培育新品種D.生產雜種細胞3.動物細胞融合與植物體細胞雜交的比較中，正確的是（）誘導融合的方法完全相同B.所用的技術手段基本相同C.所采用的原理完全相同D.都能形成雜種細胞AD第37頁,共45頁，2024年2月25日，星期天4.單克隆抗體制備過程中培育的雜交細胞是------（）A.由小鼠能產生抗體的B淋巴細胞與肝細胞融合B.由小鼠一個B淋巴細胞誘導融合而成C.由小鼠一個B淋巴細胞與肌瘤細胞誘導融合而成D.由小鼠一個B淋巴細胞與骨髓瘤細胞誘導融合而成D第38頁,共45頁，2024年2月25日，星期天再見第39頁,共45頁，2024年2月25日，星期天（二）動物細胞融合1.過程：第40頁,共45頁，2024年2月25日，星期天2.動物細胞培養(yǎng)技術的應用（1）生產蛋白生物制品：病毒疫苗、干擾素、單克隆抗體等。（3）用于檢測有毒物質（2）