小鼠遺傳學及其分類命名

關于小鼠遺傳學及其分類命名遺傳學基礎知識實驗小鼠起源實驗小鼠的分類及其命名遺傳監(jiān)測繁育體系第2頁,共96頁，2024年2月25日，星期天分子遺傳學第3頁,共96頁，2024年2月25日，星期天編碼特定蛋白產物的DNA序列基因可能存在可變形式，稱為等位基因（allele）基因（GENE）第4頁,共96頁，2024年2月25日，星期天homozygousheterozygoushemizygous等位基因(Alleles)野生型“wildtype”在自然群體中往往有一種占多數(shù)的（因此常被視為正常的）等位基因第5頁,共96頁，2024年2月25日，星期天基因的命名沒有特定的命名體系,因此比較混亂通過基因功能命名(通常為酶)Nos2,Sod1通過基因產物的大小命名p53,p21通過表型命名Apc,Rb,Mom1同物異名當基因功能確定后命名常會發(fā)生改變單個基因有多個功能時通常會有多個名字第6頁,共96頁，2024年2月25日，星期天基因型/表型

基因型(Genotype)狹義=個體特定基因的等位基因組成情況廣義=個體所有基因的整套等位基因(整個遺傳背景或基因組)表型(Phenotype)狹義=因特定基因的等位基因組成而引起的個體特征廣義=因個體的基因組組成而引起的一系列解剖,生理和行為學等特征第7頁,共96頁，2024年2月25日，星期天小鼠基因組學人基因組~3billionbp小鼠基因組~3billionbp其它模式生物基因組大小果蠅~140millionbp(21-foldless)線蟲~97millionbp(31-foldless)酵母~12millionbp(250-foldless)細菌(E.coli)~5millionbp(600-foldless)第8頁,共96頁，2024年2月25日，星期天小鼠基因組學小鼠是研究人類基因功能最好的模式動物C57BL/6,BALB/c,C3H是歷史上最常使用的小鼠C57BL/6,129,FVB最常使用的基因工程小鼠可獲取基因組序列的小鼠品系C57BL/6(NIHMouseSequencingConsortium)A/J2,DBA/2,129X1/SvJ,129S1/SvImJ(CeleraGenomics)第9頁,共96頁，2024年2月25日，星期天小鼠基因組學小鼠基因組大概包含30,000到50,000個不同基因(~2000個每染色體)至少50%與人類基因同源(相似的序列和功能)與人類基因同源的小鼠基因的命名

Nitricoxidesynthase2Humangene=NOS2(斜體,全大寫)Mousegene=Nos2(斜體,首字母大寫)Protein=NOS2(正體,全大寫)第10頁,共96頁，2024年2月25日，星期天小鼠功能基因組學基因型驅動的或”正向”基因組學引入突變(遺產工程)篩選表型改變具有人為偏好的特點表型驅動的或”反向”基因組學隨機突變后觀測表型改變或隨機引入點突變(byENU)觀測表型改變找出表型相關基因位點鑒定未知基因,基因功能需要大量篩選工作第11頁,共96頁，2024年2月25日，星期天實驗小鼠起源第12頁,共96頁，2024年2月25日，星期天第13頁,共96頁，2024年2月25日，星期天家鼠起源第14頁,共96頁，2024年2月25日，星期天M.musculus各亞種的地理分布第15頁,共96頁，2024年2月25日，星期天HistoryoftheLaboratoryMouse1100BC- color-variantmice(China)1909- firstinbredstrain1929- TheJacksonLaboratory1962- nudemouse1980- firsttransgenicmouse1989- firstknockoutmouse1990s- conditional/inducibleknockouts, knock-in,mousegenomeproject2002- RNAinterferenceknockouts?第16頁,共96頁，2024年2月25日，星期天JonA.Backetal.2000NatureGenetics,vol24,23-25第17頁,共96頁，2024年2月25日，星期天同基因型不同基因型近交系

?亞系F1雜合子同源突變近交系同源導入近交系

·混合近交系重組近交系/重組同類系Consomic/Conplasticstrain遠交系/封閉群根據(jù)遺傳學分類小鼠品系分類第18頁,共96頁，2024年2月25日，星期天同基因型不同基因型近交系

?亞系F1雜合子同源突變近交系同源導入近交系

·混合近交系重組近交系/重組同類系Consomic/Conplasticstrain遠交系/封閉群根據(jù)遺傳學分類小鼠品系分類第19頁,共96頁，2024年2月25日，星期天封閉群（遠交群）

ClosedColonyorOutbredStock以非近親交配方式進行繁殖生產的一個實驗動物種群，在不從其外部引入新個體的條件下，至少連續(xù)繁殖4代以上，封閉群亦稱遠交群。Labcode:stocksymble例如：N:NIH

表示由美國國立衛(wèi)生研究院（N）保持的NIH封閉群小鼠。

Lac:LACA

表示由英國實驗動物中心（Lac）保持的LACA封閉群小鼠。某些命名較早，又廣為人知的封閉群動物，名稱與上述規(guī)則不一致時，仍可沿用其原來的名稱。如：Wistar大鼠封閉群，日本的ddy封閉群小鼠等。第20頁,共96頁，2024年2月25日，星期天同基因型不同基因型第21頁,共96頁，2024年2月25日，星期天近交的結果第22頁,共96頁，2024年2月25日，星期天98.7％homozygosity第23頁,共96頁，2024年2月25日，星期天同基因型不同基因型近交系

?亞系F1雜合子同源突變近交系同源導入近交系

·混合近交系重組近交系/重組同類系Consomic/Conplasticstrain遠交系/封閉群根據(jù)遺傳學分類小鼠品系分類第24頁,共96頁，2024年2月25日，星期天近交系：經至少連續(xù)20代的全同胞兄妹交配培育而成，品系內所有個體都可追溯到起源于第20代或以后代數(shù)的一對共同祖先。經連續(xù)20代以上親代與子代交配與全同胞兄妹交配有等同效果。近交系Inbredstrain第25頁,共96頁，2024年2月25日，星期天近交系的命名基于毛色DBA(DiluteBrownnonAgouti,firstinbredmouse)基于起源NZW(NewZealandWhite)基于表型NOD(Non-ObeseDiabetic)其它BALB/c,C57BL,129第26頁,共96頁，2024年2月25日，星期天近交系的命名1．一般均用一個或幾個大寫英文字母表示，如A、AE、BA、AKR、DBA、NZB、STAR、NMRT、NYLR、NZBR等2．有些品系可在大寫英文字母間加入一些阿拉拍數(shù)字來表示，如C3H、C57BL、C57BR、C57L、CC57W、CC57BR等3．非正規(guī)的命名，如果已廣泛為國際所共知者，則可保留沿用，如：“129”、“101”、“615”等第27頁,共96頁，2024年2月25日，星期天近交系代數(shù)近交代數(shù)表示，一般是在品系符號后括號里寫上代數(shù)，并在代數(shù)前加寫“F”（Filial的縮寫），例如A（F78）。C57BL/6J(F？+10)C57BL/6JNga(F73+26)第28頁,共96頁，2024年2月25日，星期天同基因型不同基因型近交系

?亞系F1雜合子同源突變近交系同源導入近交系

·混合近交系重組近交系/重組同類系Consomic/Conplasticstrain遠交系/封閉群根據(jù)遺傳學分類小鼠品系分類第29頁,共96頁，2024年2月25日，星期天亞系的形成近交系的亞系分化是指一個近交系內各個分支的動物之間，已經發(fā)現(xiàn)或十分可能存在遺傳差異。通常下述三種情況會發(fā)生亞系分化。a)在兄妹交配代數(shù)達40代以前形成的分支（即分支發(fā)生于F20到F40之間）；b)一個分支與其他分支分開繁殖超過100代；c)已發(fā)現(xiàn)一個分支與其他分支存在遺傳差異。產生這種差異的原因可能是殘留雜合、突變或遺傳污染（geneticcontamination）（即一個近交系與非本品系動物之間雜交引起遺傳改變）。由于遺傳污染形成的亞系，通常與原品系之間遺傳差異較大，因此對這樣形成的亞系應重新命名。例如由GLaxo保持的A近交系在發(fā)生遺傳污染后，重新命名為A2G。第30頁,共96頁，2024年2月25日，星期天亞系的命名C57BL/6,C57BL/10C57BL/6J,C57BL/6N例外BALB/c、C57BR/cd第31頁,共96頁，2024年2月25日，星期天亞系的命名更復雜的亞系命名是通過把實驗室代碼按順序寫出,不添加斜杠BALB/cByJ,BALB/cAnN,BALB/cJC57BL=parentstraindesignation6JOlaHsdEi=substraindesignation6=linenumber

J=laboratorycode

Ola=laboratorycode

Hsd=laboratorycode

Ei=LaboratorycodeC57BL/6JOlaHsdEi第32頁,共96頁，2024年2月25日，星期天實驗室代碼由

InstituteforLaboratoryAnimalResearch(ILAR)來管理實驗室代碼

InternationalLaboratoryCodeRegistry(LabCodes).環(huán)境因素會影響一個品系的特征,所以標明一個品系是從哪來的是很重要的./ilar/codes.asp?id=codes

J：TheJacksonLaboratoryN：NationalInsititutesofHealthCrl：TheCharlesRiverLaboratoryRik：TheInstituteofPhysicalandChemicalResearch(RIKEN)第33頁,共96頁，2024年2月25日，星期天Reference:SpechtCG,SchoepferR.Deletionofthealpha-synucleinlocusinasubpopulationofC57BL/6Jinbredmice,BMCNeuroscience2001:2:11.亞系提供單位基因型表型C57BL/6JOlaHsdHarlan,Bicester,UKdeletionofthealpha-synuclein(Snca)locusImplicatedintheaetiologyofParkinsonandAlzheimerdiseasesC57BL/6JTheJacksonLaboratoryLocusintactNormalC57BL/6NCharlesRiver,Margate,UKLocusintactNormal近交系亞系之間的差異第34頁,共96頁，2024年2月25日，星期天BALB/c的家譜1932,Snell(addedthe/c),UniversityofTexas???,NCI,Amsterdam1935,F?,Andervont(An),NIH1967,F99,Bailey(By),JAXBALB/cAJcl1951,F72,NIHBALB/cAnN1975,F136,JAXBALB/cByJ1935,F26,SnellmovedtoJAX1961,Bailey,NIH1923,Little&MacDowell,startinbreeding1927,F12,Muller,UniversityofTexas1913,HalseyJ.Baggalbino1973,CIEA,Japan1989,CLEA,Japan免疫反應最強第35頁,共96頁，2024年2月25日，星期天BALB/c亞系的差異SubstrainAnimalProviderGenotypePhenotypeBALB/cByJTheJacksonLaboratoryA278bpsdeletionoftheacyl-CoenzymeAdehydrogenase,shortchain,

(Acads

)locus●severeorganicaciduria●hypoglycemiaandelevatedurinaryandmusclebutyrylcarnitineconcentrations(after18hrsfasting)

BALB/cAnNTheNIHLocusintactNormalBALB/cAJclCLEA,JapanLocusintactNormalReference:ArmstrongDL;MasiowskiML;WoodPA,Pathologiccharacterizationofshort-chainacyl-CoAdehydrogenasedeficiencyinBALB/cByJmice.,AmJMedGenet1993;47(6):884-92第36頁,共96頁，2024年2月25日，星期天同基因型不同基因型近交系

?亞系F1雜合子同源突變近交系同源導入近交系

·混合近交系重組近交系/重組同類系Consomic/Conplasticstrain遠交系/封閉群根據(jù)遺傳學分類小鼠品系分類第37頁,共96頁，2024年2月25日，星期天F1雜合子(F1Hybrids)定義:兩個不同近交系交配后生產的第一代優(yōu)點:基因型和表型一致;雜交優(yōu)勢;可以接受來自雙親品系的器官移植缺點:不能自我維持品系延續(xù)第38頁,共96頁，2024年2月25日，星期天F1雜合子的命名用交配的兩個近交系的縮寫,先雌鼠后雄鼠再跟一個F1B6CBF1第39頁,共96頁，2024年2月25日，星期天雜合子命名中使用的標準縮寫縮寫品系縮寫

品系129P129P3/JLC57L/J129S129S1/SvImJCBACaCBA/CaGnLeAHeA/HeJCBCBAAA/JC3C3H/HeJAKAKR/JC3FeC3HeB/FeJCByBALB/cByJD1DBA/1JCBALB/cJD2DBA/2JBC57BLNZBNZB/BlNJB6C57BL/6JNZWNZW/LacJB10C57BL/10JSJLorJSJL/JBRC57BR/cdJSWSWR/J第40頁,共96頁，2024年2月25日，星期天品系縮寫C57這個縮寫可意味著七、八個特征不同的品系（如C57BL及其亞系6個，C57BR/cdJ,C57L）。C57BL就包括有幾個特征不同的亞系（如C57BL/1，C57BＬ/6J、C57BL/6N、C57BL/10J等）。只寫CBA亦為不確切的書寫法，因為它也有若干個特性不同的亞系，如CBA/J是有視網膜退變基因的，而CBA/ca則沒有這種基因，兩者對放射線的敏感性也不一樣，組織相容性也不同，至少有5個位點不同的；第41頁,共96頁，2024年2月25日，星期天同基因型不同基因型近交系

?亞系F1雜合子同源突變近交系同源導入近交系

·混合近交系重組近交系/重組同類系Consomic/Conplasticstrain遠交系/封閉群根據(jù)遺傳學分類小鼠品系分類第42頁,共96頁，2024年2月25日，星期天同源突變近交系：兩個近交系，除了在一個指明位點等位基因不同外，其他遺傳基因全部相同，簡稱同源突變系。同源突變系一般皆由近交系發(fā)生基因突變而形成。同源突變近交系CoisogenicInbredStrain第43頁,共96頁，2024年2月25日，星期天同源突變近交系命名由發(fā)生突變的近交系名稱后加突變基因符號（用英文斜體印刷體）組成，二者之間以連接號分開，如：BALB/cJ-nu。當突變基因必須以雜合予形式保持時，用"+"號代表野生型基因，如：A/Fa-+/c.。第44頁,共96頁，2024年2月25日，星期天InbredmiceGreatjob!第45頁,共96頁，2024年2月25日，星期天小鼠基因工程第46頁,共96頁，2024年2月25日，星期天種植前小鼠胚胎發(fā)育FertilizationActivationofembryonicgenomeCompactionE0.5E2.5E3.5E1.5第47頁,共96頁，2024年2月25日，星期天轉基因小鼠的制作0.5天受精卵DNArecover原核融合移植到假孕鼠輸卵管首建鼠founder檢測表型第48頁,共96頁，2024年2月25日，星期天轉基因小鼠制備時間表DNA純化1天原核注射≥2天小仔出生3周斷奶，編號，剪尾～3－4周提尾巴gDNA2天Founder鑒定1天總計～2－2.5月第49頁,共96頁，2024年2月25日，星期天ES細胞基因打靶AnalyzeoffspringforphenotypeelectroporateselectionanalyzecoloniestestforgermlinetransmissionmakechimerascrossheterozygotestestoffspringforchimerismimplantP12第50頁,共96頁，2024年2月25日，星期天嵌合鼠的制作BlastocystInjectionAggregationFlushembryosUterusE3.5OviductE2.5BlastocystMorulaRecover1-2hoursRemovezonapellucidaDarningneedleaggregationcultureovernightimplantintopseudopregnantsurrogatemotherEScells第51頁,共96頁，2024年2月25日，星期天基因打靶小鼠制備時間表索取BAC質粒1月載體構建2-3月細胞培養(yǎng)電轉篩選6-10周囊胚注射2周驗證種質細胞傳遞12-14周總計～10月第52頁,共96頁，2024年2月25日，星期天轉基因動物命名符號：一個轉基因符號由以下三部分組成，均以羅馬字體表示：C57BL/6J-TgN(CD8Ge)23Jwg轉基因方式TgN:非同源插入TgH:同源重組TgR:逆轉錄病毒載體感染的插入插入片段實驗室指定序號實驗室注冊代碼品系An匿名序列Ge基因組Im插入突變Nc非編碼序列Rp報告基因Sn合成序列Et增強子捕獲裝置Pt啟動子捕獲裝置XXX/YYY：fusiongenesXXX,YYY：doubletransgenes第53頁,共96頁，2024年2月25日，星期天打靶突變小鼠命名

129X1-Cftrtm1Uncthefirsttargetedmutationofthecysticfibrosistransmembraneregulator(Cftr)geneat129X1producedattheUniversityofNorthCarolina

129X1-En1tm1(Otx2)WrstthecodingregionofEn1wasreplacedbytheOtx2gene,originatingfromtheW.Wurstlaboratory第54頁,共96頁，2024年2月25日，星期天The129StrainsMostEScelllinesderivedfrom129strainsLotsofgeneticvariabilityamong129substrainsSimpsonetal.1997NatureGenetics16:19-27Threadgilletal.1997MammalianGenome8:390-393Importanttomatch129strainsintargetedmutagenesisDNAEScelllinesCrossingchimeratogeneratepure129strainB6129PF2/JmultiplecoatcolorssegregatingforAw,a,pandTyrc-chChangednomenclaturefrom129substrainstodifferent129parentalstrainsParental

Steel

TeratomaReference:/html/nomenclature/nomen_129.shtml第55頁,共96頁，2024年2月25日，星期天129小鼠的命名及ES細胞系的起源AbbreviatesFulldesignationFormerdesignationESCellLine129P1129P1/ReJ129/ReJ129P2129P2/OlaHsd129/OlaHsdE14TG2aHM-1(Hprtb-m1)129P3129P3/J129/J129X1129X1/SvJ129/SvJRW-4PJ1-5129S1129S1/Sv-+p+Tyr-cKitlSl-J/+129/Sv-+p+Tyr-c+MgfSl-J/+W9.5(+Kitl-SlJ)CJ7(+Kitl-SlJ)129S1129S1/SvImJ129S3/SvImJ(formerly129/SvImJ,129/Sv-+p+Tyr-c+Mgf-Sl/J)R1(+Kitl-SlJ)129S2129S2/SvPas129/SvPasD3129S4129S4/SvJae129/SvJaeJ1129S6129S6/SvEvTac129/SvEvTacTC1W4129S7129S7/SvEvBrd-Hprtb-m2129/SvEvBrd-Hprtb-m2AB1(+Hprt-bm2)AB2.1(+Hprt-bm2)129T1129T1/Sv-+pTyrc-chTer/+@Na129/Sv-+pTyrc-chTer/+@Na※JAXBulletn,No1,1999※JAXNotes,No481,2001第56頁,共96頁，2024年2月25日，星期天NatureGenet.16,19-27第57頁,共96頁，2024年2月25日，星期天轉基因鼠/KO鼠的回交N10F20第58頁,共96頁，2024年2月25日，星期天同基因型不同基因型近交系

?亞系F1雜合子同源突變近交系同源導入近交系

·混合近交系重組近交系/重組同類系Consomic/Conplasticstrain遠交系/封閉群根據(jù)遺傳學分類小鼠品系分類第59頁,共96頁，2024年2月25日，星期天同源導入近交系（同類近交系）CongenicInbredStrain通過雜交-互交（cross-intercross）或回交（backcross）等方式將一個基因導入到近交系中，由此形成的一個新的近交系與原來的近交系只是在一個很小的染色體片段上的基因不同，稱為同源導入近交系（同類近交系），簡稱同源導入系（同類系）。第60頁,共96頁，2024年2月25日，星期天同源導入近交系的命名同源導入系名稱由以下三部分組成：a)接受導入基因的近交系名稱；b)提供導入基因的近交系的縮寫名稱，并與a項之間用英文句號分開；c)導入基因的符號（用英文斜體），與b項之間以連字符分開。例如：B10.129-H-12b

表示該同源導入近交系的遺傳背景為C57BL/10sn(=B10)，導入B10的基因為H-12b，基因提供者為129近交系。如果供體品系非近交系或是混合的或是未知的需要加Cg符號.如B6.Cg-Tcrbtm1Mom第61頁,共96頁，2024年2月25日，星期天同基因型不同基因型近交系

?亞系F1雜合子同源突變近交系同源導入近交系

·混合近交系重組近交系/重組同類系Consomic/Conplasticstrain遠交系/封閉群根據(jù)遺傳學分類小鼠品系分類第62頁,共96頁，2024年2月25日，星期天混合近交系

MixedInbredStrains來自于2個親代品系(其中1個可以是ES細胞系),還未達到近交系狀態(tài)(即未F≧20).命名:兩個品系的大寫縮寫之間用分號(;)隔開B6;129P2-Tcrbtm1MomAmixedstrainderivedfromC57BL/6Janda129EScelllinecarryingatargetedknockoutoftheTcrbgene第63頁,共96頁，2024年2月25日，星期天混合近交系

MixedInbredStrains來自于2個以上親代品系(其中1個可以是ES細胞系)或背景未知,還未達到近交系狀態(tài)(即未F≧20).命名:STOCK符號后空一格,加上突變的基因名稱或染色體的異常標記STOCKRb(16.17)5Bnr3uhAnstrainofunknownorcomplexbackgroundcarryingtheRobertsoniantranslocationRb(16.17)5Bnr

STOCK

Hdhtm2MemAnstrainofunknownorcomplexbackgroundcarryingHdhtargetedmutation第64頁,共96頁，2024年2月25日，星期天MARC現(xiàn)有品系舉例第65頁,共96頁，2024年2月25日，星期天同基因型不同基因型近交系

?亞系F1雜合子同源突變近交系同源導入近交系

·混合近交系重組近交系/重組同類系Consomic/Conplasticstrain遠交系/封閉群根據(jù)遺傳學分類小鼠品系分類第66頁,共96頁，2024年2月25日，星期天重組近交系（RecombinantInbredStrain）

和重組同類系（RecombinantCongenicStrain）a)重組近交系（RI）：由兩個近交系雜交后，經連續(xù)20代以上兄妹交配育成的近交系。b)重組同類系（RC）：由兩個近交系雜交后，子代與兩個親代近交系中的一個近交系進行數(shù)次回次（通?；亟?次），再經無對特殊基因選擇的近親交配而育成的近交系。重組近交系（RI）命名：由BALB/c與C57BL兩個近交系雜交育成的一組重組近交系，分別命名為CXB1、CXB2……由兩個親代近交系的縮寫的縮寫名稱中間加小寫英文字母c命名，用其中做回交的親代近交系（稱受體近交系）在前，供體近交系在后。由相同雙親育成的一組重組同類系阿拉拍數(shù)字予以區(qū)分。如CcS1，表示由以BALB/c(C)為親代受體近親系，以STS（S）品系為供體近交系，經2代回交育成的編號為1的重組同類系。第67頁,共96頁，2024年2月25日，星期天第68頁,共96頁，2024年2月25日，星期天同基因型不同基因型近交系

?亞系F1雜合子同源突變近交系同源導入近交系

·混合近交系重組近交系/重組同類系Consomic/Conplasticstrain遠交系/封閉群根據(jù)遺傳學分類小鼠品系分類第69頁,共96頁，2024年2月25日，星期天定義:通過不斷的回交將一整條染色體替換到一個近交品系里,又叫染色體替換品系(chromosomesubstitutionstrains)

命名: HOSTSTRAIN-Chr#DONORSTRAINConsomicStrainsC56BL/6J-Chr19AAstrainChromosome19hasbeenbackcrossedontoC57BL/6J＊InJAX,thereare20C57BL/6consomicstrainsthatbeenbackcrossedfor20individualchromosomefromAstrains第70頁,共96頁，2024年2月25日，星期天第71頁,共96頁，2024年2月25日，星期天ConplasticStrains定義: 一個品系的核基因組與另一個品系的胞漿相配合,在不斷的回交過程中,線粒體只來源于雌鼠品系命名: NUCLEARGENOME-mt

CYTOPLASMICGENOMEC57BL/6J-mtBALB/cAstrainwiththenucleargenomeofC57BL/6Jandthecytoplasmic(mitochondrial)genomeofBALB/c第72頁,共96頁，2024年2月25日，星期天RulesforNomenclatureofGenes,GeneticMarkers,Alleles,andMutationsinMouseandRatFormouse:InternationalCommitteeonStandardizedGeneticNomenclatureforMice

/mgihome/nomen/gene.shtml#genenom

Forrat:RatGenomeandNomenclatureCommittee

/nomen_rules.html

第73頁,共96頁，2024年2月25日，星期天MouseGenomeInformatics(MGI)/TheJacksonLaboratory/第74頁,共96頁，2024年2月25日，星期天遺傳監(jiān)測第75頁,共96頁，2024年2月25日，星期天遺傳監(jiān)測傳統(tǒng)方法生化同功酶分析主要組織相容復合體(MHC)serologyforMHCantigenstailallografttransplants下頜骨測量分子方法(“DNAfingerprinting”)simplesequencelengthpolymorphisms(SSLP)microsatelliteDNArestrictionfragmentlengthpolymorphisms(RFLP)minisatelliteDNAPCRgenotypingforspecificgenemutations第76頁,共96頁，2024年2月25日，星期天PCR技術的原理1.變性：在加熱或堿性條件下可使DNA雙螺旋的氫鍵斷裂，形成單鏈DNA，稱之為變性。2.退火：是模板與引物的復性。引物是與模板某區(qū)序列互補的一小段DNA片段。3.延伸：從結合在特定DNA模板上的引物為出發(fā)點，將四種脫氧核苷酸以堿基配對形式按5’→3’的方向沿著模板順序合成新的DNA鏈。第77頁,共96頁，2024年2月25日，星期天第78頁,共96頁，2024年2月25日，星期天MouseMITmicrosatellitelist第79頁,共96頁，2024年2月25日，星期天DNA瓊脂糖電泳印跡轉移預雜交雜交（變性探針）洗膜放射自顯影或顯色SouthernBlot第80頁,共96頁，2024年2月25日，星期天小鼠毛色遺傳學4種基因(ABCD)主要負責毛色表型A=agouti(+) a=non-agouti(a)B=black(+) b=brown(Tyrp1b)C=color(+) c=albino(Tyrc)D=non-dilute(+) d=dilute(Myo5ad)第81頁,共96頁，2024年2月25日，星期天BALB/cCoatColorGeneticsA=Agoutib=Brownc=Albino(dominanttoothergenes)D=non-dilute第82頁,共96頁，2024年2月25日，星期天C3HCoatColorGeneticsA=Agouti(whenCallelefixed,AisdominanttoB)B=BlackC=ColorD=Non-dilute第83頁,共96頁，2024年2月25日，星期天C57BL/6CoatColorGenetics D=Non-dilute a=Non-agouti B=Black C=Color第84頁,共96頁，2024年2月25日，星期天DBACoatColorGenetics3geneticlocifixedwit