體液葡萄糖檢驗

關于體液葡萄糖檢驗2本章教學要求：1、掌握血糖、糖化血紅蛋白、糖化血清蛋白測定的推薦方法及臨床意義，口服葡萄糖耐量試驗的程序和臨床應用。2、熟悉糖尿病的實驗室檢測項目和診斷程序3、了解血糖濃度的調節(jié)機制、糖代謝紊亂。。第2頁,共59頁，2024年2月25日，星期天31、氧化供能：分解代謝提供人體75%能量；

2、人體組成成分之一：糖占人體干重的2%;

合成糖原儲存在肝臟與肌肉中；形成糖蛋白和蛋白多糖（激素、酶、受體等）、糖脂（神經(jīng)組織和細胞膜重要組分）；3、轉變：其它糖及糖衍生物（核糖、脫氧核糖、氨基多糖）；非糖物質（脂肪、氨基酸和核酸）。

糖的生理功能（能量資源和結構材料）糖代謝紊亂一系列代謝變化第3頁,共59頁，2024年2月25日，星期天4體液糖的測定項目：①血糖濃度測定②口服糖耐量試驗③糖化血紅蛋白試驗④糖化血清白蛋白測定⑤胰島素測定⑥C-肽測定等第4頁,共59頁，2024年2月25日，星期天5第一節(jié)概述血糖及正常血糖水平:血糖：指血液中的葡萄糖.正常血糖濃度：

空腹波動在3.89～6.11mmol/L（70～110mg/dl）餐后2h內應≤7.8mmol/L（≤140mg/dl）。第5頁,共59頁，2024年2月25日，星期天6

第6頁,共59頁，2024年2月25日，星期天7（一）血糖的來源、去路和調節(jié)一、血糖的來源、去路和調節(jié)3.89～6.11第7頁,共59頁，2024年2月25日，星期天如果血糖的濃度過高，超過了腎糖閾（8.9mmol/L）葡萄糖由尿液排出，出現(xiàn)糖尿血糖的來源和去路要動態(tài)的平衡,需要體內神經(jīng)系統(tǒng)、內公泌激素、肝、腎等組織器官的協(xié)同作用第8頁,共59頁，2024年2月25日，星期天9二、血糖濃度的調節(jié)1、肝臟調節(jié)作用:肝內有許多糖代謝的特異性酶，當機體需要時，通過神經(jīng)體液的作用，使這些酶的活性改變，來維持血糖濃度的相對恒定。雙向調控功能：從器官水平通過神經(jīng)-激素的作用，使肝細胞內各種糖代謝的酶活性改變。升糖調節(jié)1：具有活性很高的葡萄糖-6-磷酸酶，可促進肝糖原水解，補充和升高血糖。升糖調節(jié)2：肝臟具有活性高且易誘導的糖異生酶類，禁食或饑餓時能將非糖物質轉化為糖（占55-90%）。降糖調節(jié)：促進組織攝取葡萄糖，促進肝糖原和脂肪合成、和抑制肝糖原分解、抑制糖異生。第9頁,共59頁，2024年2月25日，星期天102、神經(jīng)調節(jié)作用部位

1、下丘腦2、自主神經(jīng)（交感和副交感神經(jīng)）

內臟神經(jīng)迷走神經(jīng)第10頁,共59頁，2024年2月25日，星期天方式：

1、直接作用于肝臟發(fā)揮調控作用；

2、下丘腦的腹內側核和外側核具有相反的效應，它們通過內臟神經(jīng)和迷走神經(jīng)，引起激素的分泌而影響血糖。第11頁,共59頁，2024年2月25日，星期天123、激素調節(jié)作用：兩組降低血糖濃度的激素

①胰島素（主要）②胰島素樣生長因子胰島素降血糖機理:

1、加快葡萄糖轉運速率2、促進糖原合成3、加速糖氧化分解4、促進糖轉化為脂肪5、抑制糖異生第12頁,共59頁，2024年2月25日，星期天13

胰島β細胞前胰島素原

胰島素

C肽

有活性

無活性胰島素結構:51個aa的蛋白類激素

等摩爾第13頁,共59頁，2024年2月25日，星期天14胰島素作用于靶細胞的機制第14頁,共59頁，2024年2月25日，星期天15胰島素的生物活性效應取決于：1、靶細胞上胰島素受體的絕對或相對數(shù)量2、到達靶細胞的胰島素濃度3、胰島素與靶細胞受體的親和力4、胰島素與受體結合后的細胞內改變情況第15頁,共59頁，2024年2月25日，星期天升高血糖濃度的激素①胰高血糖素②腎上腺素③生長激素④皮質醇

⑤甲狀腺激素升高血糖的機制：促進肝糖原分解加強糖異生抑制肝糖原合成減少葡萄糖氧化供能第16頁,共59頁，2024年2月25日，星期天17糖代謝紊亂：高血糖癥與糖尿病低血糖癥酮癥半乳糖血癥二、糖代謝紊亂第17頁,共59頁，2024年2月25日，星期天18(一)高血糖癥與糖尿?。薄⒏哐前Y:空腹血漿血糖（FPG）濃度超過7.2

mmol/L生理性：包括飲食性（高糖飲食）或情感性（情緒緊張，腎上腺分泌增加）病理性：見于糖尿病；內分泌腺（甲狀腺、腎上腺皮質或髓質、胰島細胞功能亢進）；顱內壓升高刺激血糖中樞；嘔吐、腹瀉、高熱等引起的脫水。尿糖：若血糖濃度高于腎糖閾值8.9mmol/L，出現(xiàn)尿糖。第18頁,共59頁，2024年2月25日，星期天19２、糖尿?。╠iabetesmellitus,DM）

定義：是一種慢性、復雜的代謝紊亂性疾病，系胰島素相對或絕對不足，或利用缺陷引起。臨床特征：血糖持續(xù)升高，甚至出現(xiàn)糖尿。長期患有糖尿病常有脂類、蛋白質代謝紊亂以及眼、腎的微血管病變及神經(jīng)病變等并發(fā)癥。嚴重者還可出現(xiàn)水、電解質紊亂及酸堿平衡紊亂，表現(xiàn)為高脂血癥，酮癥酸中毒等，重者可致死亡。第19頁,共59頁，2024年2月25日，星期天20第20頁,共59頁，2024年2月25日，星期天21發(fā)病機制：1、胰腺β細胞的自身免疫性損傷2、機體對胰島素的作用產(chǎn)生抵抗DM的實驗室檢測項目：

血糖測定、尿糖測定、OGTT、血清糖化血紅蛋白和糖化血清蛋白測定、胰島素與胰島素抗體測定、Ｃ肽測定、胰島素釋放試驗以及相關代謝產(chǎn)物測定。

第21頁,共59頁，2024年2月25日，星期天糖尿病的分型(國標糖尿病學會推薦)根據(jù)病因分四型1.Ⅰ型糖尿病

多發(fā)生于兒童和年輕人,占糖尿病的5-10%,主要病變在于胰島β細胞破壞使胰島素絕對缺乏,對胰導素治療敏感2.Ⅱ型糖尿病

多見于中年人(肥胖者)病因不明確,可能是存在胰島素抗體或胰島β細胞的功能減退,占糖尿病的90%以上3.特殊類型糖尿病

見于一系列病因比較明確或繼發(fā)性的糖尿病4.妊娠期糖尿糖第22頁,共59頁，2024年2月25日，星期天23糖尿病的診斷標準：，不主張作第三次OGTT試驗。第23頁,共59頁，2024年2月25日，星期天妊娠糖尿病的診斷標準對妊娠24-28周有DM傾向(肥胖、尿糖陽性、糖尿病家族史等）的妊娠期婦女可在空腹條件下口服50克葡萄糖，測定1小時血糖濃度，若≥7.8mmol/L,需進行糖耐量試驗。妊娠期空腹血糖≤5.3mmol/L第24頁,共59頁，2024年2月25日，星期天糖尿病的代謝變化糖尿病會導致血糖、蛋白質、脂肪代謝的改變，表現(xiàn)為1.高血糖癥:血糖來源增加而去路減少2.糖尿:血糖過高超過腎糖閾而出現(xiàn)尿糖,進一步出現(xiàn)酮體,多尿,水鹽的丟失3.高脂血癥和高膽固醇血癥:由于糖尿病時脂肪動員加強,脂肪酸轉變成乙酰CoA生成酮體和膽固醇4.酮血癥:當酮體產(chǎn)生過多,超過肝外組織的氧化能力時會形成酮血癥和酮尿癥第25頁,共59頁，2024年2月25日，星期天26（二）低血糖癥

1、概念：低血糖癥

是指血糖濃度低于3.89mmol/L（葡萄糖氧化酶法）時臨床出現(xiàn)(心悸、出汗、精神失常、休克等）一系列因血糖濃度過低引起的癥候群。發(fā)病原因：來源＜去路①激素效應：升血糖激素缺乏，降血糖激素過剩。②肝病變：肝功嚴重損傷致肝糖原減少和糖異生嚴重障礙。③長期饑餓或劇烈運動時代謝率增加，血糖消耗過多。第26頁,共59頁，2024年2月25日，星期天27分類：低血糖癥空腹性低血糖：臨床常見（如果反復發(fā)作常提示有器質性疾病如胰島素瘤）刺激性低血糖反應性低血糖癥外源性低血糖癥酒精性低血糖癥半乳糖性低血糖癥餐后性低血糖癥功能性低血糖癥Ⅱ型糖尿病或糖耐量受損伴有的低血糖癥營養(yǎng)性低血糖第27頁,共59頁，2024年2月25日，星期天28（三）酮癥1、概念：酮體：乙酰乙酸、β-羥丁酸及丙酮三者統(tǒng)稱為酮體20%78%2%酮血癥：酮體形成過多引起血中含量增高，稱為酮血癥。酮體形成過多的原因糖尿?。禾菙z取不足：脂肪動員糖原貯積?。褐緞訂T堿中毒：代償?shù)?8頁,共59頁，2024年2月25日，星期天292、酮體的生成：糖代謝障礙脂肪酸分解3、酮體的測定及臨床意義：（不能同時檢測酮體三種成分）Gerhardt’s氧化鐵試驗乙酰乙酸硝普納反應丙酮測定臨床意義：1、如有酮體存在，需確定酮酸中毒狀態(tài)

2、酮血癥的診斷對指導胰島素治療最有價值。第29頁,共59頁，2024年2月25日，星期天30（四）半乳糖血癥1、概念：

半乳糖血癥是機體不能轉化利用半乳糖及其中間代謝產(chǎn)物的一種常染色體隱性遺傳病，主要特征為血和尿中半乳糖增高。2、生化缺陷：酶的缺陷半乳糖半乳糖-1-磷酸葡萄糖-1-磷酸UDPGUDP-半乳糖葡萄糖-6-磷酸半乳糖激酶半乳糖-1-磷酸尿苷轉移酶（最常見）UDP-半乳糖-4-差向酶臨床表現(xiàn)：酶缺乏導致半乳糖和半乳糖-1-磷酸沉積在肝臟、腎腦、眼晶狀體和紅細胞中，引起相應的病變。代謝過程：第30頁,共59頁，2024年2月25日，星期天31第二節(jié)體液葡萄糖測定血液標本的采集與處理：標本采集：空腹靜脈血，血清或血漿，抗凝劑選擇草酸鉀-氟化鈉抗凝劑標本處理：1小時內分離血清或血漿（血糖在室溫下以每小時5%的速度在下降），如不能及時檢測要分離后放置2-8度冰霜保存一、血糖測定測定方法無機化學法有機化學法酶法第31頁,共59頁，2024年2月25日，星期天32（一）無機化學法：Folin-Wu法，基于葡萄糖醛基的還原性（二）有機化學法：鄰甲苯胺法、聯(lián)苯胺法、氨基聯(lián)苯法等Cu2+OH-Cu+Glu磷鉬酸顯色鄰甲苯胺+Glu葡萄糖基胺希夫氏堿藍綠色化合物縮合脫水分子重排特異性差干擾因素多（三）酶法（1）己糖激酶法（HK）（2）葡萄糖氧化酶法（GOD法）（3）葡萄糖脫氫酶法（GDH）第32頁,共59頁，2024年2月25日，星期天33

葡萄糖＋ATP

己糖激酶葡萄糖-６-磷酸＋ADP

葡萄糖-6-磷酸＋NADP＋G-6-PD６-磷酸葡萄糖內酯+NADPH

NADPH在340nm有吸收峰，其吸光度增加與標本中的葡萄糖濃度成正比。原理：１、己糖激酶法（ＨＫ法）

第33頁,共59頁，2024年2月25日，星期天評價本法特異性高，靈敏度高，干擾因素少，不受溶血、脂血、黃疸、尿酸、維生素C、肝素、EDTA等干擾，適用于自動化分析，為葡萄糖測定的參考方法，試劑較貴。第34頁,共59頁，2024年2月25日，星期天352、葡萄糖氧化酶法(GOD)分為質譜法（速率法）、比色法原理：葡萄糖＋O2+H2OGOD

葡萄糖酸內酯＋Ｈ2O2

質譜分析法是用氧電極監(jiān)測溶液中氧的消耗量，氧消耗量與葡萄糖濃度成正比2Ｈ2O2+4-氨基安替比林+酚POD

紅色醌類化合物+Ｈ2O+O2

比色分析法是與過氧化物酶（POD）偶聯(lián)，將過氧化氫分解為水和氧，同時使色素原性氧受休4-氨基安替比林和酚去氫縮合為紅色醌類化合物，即Trinder反應，顏色深淺在一定范圍內與葡萄糖濃度成正比第35頁,共59頁，2024年2月25日，星期天評價特異性較低，一些還原性物質如尿酸、VC、膽紅素、溶血、GSH等可消耗過氧化氫，使結果偏低，操作簡單，準確度與精確度都能達到臨床要求，線性范圍較好，適用于常規(guī)檢驗，是衛(wèi)生部臨床檢驗中心推薦方法。第36頁,共59頁，2024年2月25日，星期天37二、血糖測定的臨床意義（一）生理性高血糖見于情緒激動時交感神經(jīng)興奮促使腎上腺素等分泌增加，也可見于一次性食入大量糖。（二）病理性高血糖1.糖尿病血糖測定是糖尿病最簡單的篩查試驗糖尿病治療效果評價血糖水平監(jiān)控有利于糖尿病患者調整飲食攝入量和胰島素注射量，對降低其長期并發(fā)癥有積極作用。2.內分泌腺功能障礙

甲狀腺功能、腎上腺皮質及髓質功能亢進等引起的升高血糖的激素分泌過多出現(xiàn)高血糖。第37頁,共59頁，2024年2月25日，星期天3.應激性高血糖如顱內壓增高。4.脫水引起的高血糖嘔吐、腹瀉和高熱等也可使血糖輕度增高。5.嚴重的肝病,使葡萄糖不能轉化為肝糖原。6.胰腺病變第38頁,共59頁，2024年2月25日，星期天（三）血糖降低:1.生理性:見于饑餓、劇烈運動等2.病理性:

(1)胰島β細胞增生、腫瘤引起胰島素分泌過多（2）對抗胰島素分泌不足（3）嚴重肝病使肝的異生作用降低或肝糖原儲存缺乏藥物影響：第39頁,共59頁，2024年2月25日，星期天40葡萄糖耐量試驗概念是一種葡萄糖負荷試驗，用于了解胰島β細胞功能和機體對血糖的調節(jié)能力。

二口服葡萄糖耐量試驗（OGTT）第40頁,共59頁，2024年2月25日，星期天41一、糖耐量和葡萄糖耐量試驗（一）糖耐量

正常人由于體內有一套完善的調節(jié)血糖濃度的機制，即使一次攝入大量的葡萄糖，血糖濃度也僅暫時升高（一般不超過8.9mmol/L)，不出現(xiàn)糖尿，且于2h內恢復到正常血糖水平，此即為耐糖現(xiàn)象。若調節(jié)功能失調，口服或靜脈注射一定量的葡萄糖后，血糖急劇升高，在一定時限內不能恢復到原有水平，此種現(xiàn)象稱為糖耐量降低。反之給予大量葡萄糖后，血糖升高不明顯，或緩慢地輕度上升，稱糖耐量增加。第41頁,共59頁，2024年2月25日，星期天42口服葡萄糖耐量試驗（OGTT）靜脈葡萄糖耐量試（IGTT）（二）葡萄糖耐量試驗葡萄糖耐量試驗是指口服或注射一定量葡萄糖后，每間隔一定時間測定血糖水平進行分析。臨床常用OGTT，靜脈葡萄糖耐量試驗是測定糖尿病患者胰島素分泌的反應性和能力的試驗，但不適用于臨床常規(guī)診斷。第42頁,共59頁，2024年2月25日，星期天431、空腹血糖水平在臨界值（6～7mmol/L)而又疑為糖尿病患者；2、空腹或餐后血糖濃度正常，但有發(fā)展為糖尿病可能的人群；3、以前糖耐量異常的危險人群；4、妊娠性糖尿病的診斷；5、臨床上出現(xiàn)腎病、神經(jīng)病變和視網(wǎng)膜病而又無法做出合理解釋者；6、作為流行病學研究的手段。OGTT試驗適應證：二、口服葡萄糖耐量試驗第43頁,共59頁，2024年2月25日，星期天44

試驗前三天，受試者每日食物中糖含量不應低于150g，且維持正常活動．影響試驗的藥物應在三天前停用，受試前應空腹10～16h.

坐位取血后5分鐘內飲入250ml含75g無水葡萄糖的糖水，妊娠婦女用量為100g，兒童按1.75g/kg體重給予，不超75g。從服第一口糖開始計時,每隔30分鐘取血1次，共4次。必要時可延長時間，可長達服糖后６小時。于采血同時，每隔1小時留取尿液作尿糖試驗。整個過程不可吸煙、和咖啡、喝茶或進食。OGGT方法：ＷHＯ標準化曲線繪制：

一般應有5次測定結果。以測定血糖的時間為橫坐標（空腹時為0h），血糖濃度為縱坐標，繪制曲線。第44頁,共59頁，2024年2月25日，星期天45參考范圍：

空腹血糖＜6.1mmol／Ｌ；服糖后30～60分鐘血糖升高達峰值，一般＜10mmol／Ｌ；2h＜7.8mmol／Ｌ。同時測定上述各時間的尿糖均為陰性。臨床意義：糖尿病性糖耐量

空腹血糖濃度≥7.0mmol/L，服糖后30～60min血糖急劇升高，峰值超過10mmol/L，并出現(xiàn)尿糖；隨后血糖濃度恢復緩慢，2h后仍高于空腹水平。第45頁,共59頁，2024年2月25日，星期天空腹血糖濃度＜7.0mmol/L，但2h血糖在7.8mmol/L--11.1mmol/L為糖耐量減退（IGT）；空腹血糖濃度在6.1mmol/L--7.0mmol/L，OGTT2h血糖＜7.8mmol/L為空腹血糖損害（IFG）。

糖耐量受損第46頁,共59頁，2024年2月25日，星期天47三、妊娠期糖尿病診斷方法：

在孕24～28周內，口服50g葡萄糖后，測定1小時血糖濃度,若在7.8mmol/L以上者，則提示妊娠性糖尿病的可能性，應作OGTT：測定空腹血糖濃度，糖負荷量100g，然后每小時檢測一次血糖濃度，連續(xù)3小時。診斷標準：空腹＞5.8mmol/L、1h＞10.5mmol/L、2h＞9.2mmol/L、3h＞8.0mmol/L，2個結果超過以上檢測值，方可診斷為妊娠性糖尿病。第47頁,共59頁，2024年2月25日，星期天48四、糖尿病診斷程序7.87.87.8第48頁,共59頁，2024年2月25日，星期天正常人Hb是由HbA1、HbA2、HbF組成。層析分析HbA1顯示它含有數(shù)種微量Hb成分（HbA1c、HbA1b

、HbA1c),HbA1c是HbA1的主要成分。紅細胞內的Hb可緩慢地與糖類結合而形成糖化血紅蛋白（GHb），GHb是HbA1合成后化學修飾的結果。GHb的形成取決于血液中葡萄糖的濃度及血糖與Hb的接觸時間，其生成量與血中葡萄糖濃度成正比，而糖基化過程非常緩慢且不可逆，GHb一旦形成不再解離。紅細胞壽命約為120天，因此GHb的濃度可以反應測定前1-2個月內受試者血糖的平均水平，而與血糖的短期波動無關。第三節(jié)糖化血紅蛋白第49頁,共59頁，2024年2月25日，星期天方法：一類是將HbA1從HbA中分離出來對HbA1進行定量分析，常用比色法、電泳法、離子交換層析微柱法、層析法一類是分離和定量分析HbA1c，常用高效液相色譜法（HPLC）、等電聚焦法、免疫學方法評價：HbA1c分離過程耗時，要求技術水平高、必須有高精密度的專門儀器，一般不作為常規(guī)測定方法免疫學方法現(xiàn)已有成品試劑盒供應，可以通過全自動生化分析儀進行測定。離子交換層析微柱法、親和層析法技術簡單、操作快速、結果可滿足臨床對糖尿病監(jiān)控的要求，是目前推薦的常規(guī)方法高效液相色譜法（HPLC）為參考方法第50頁,共59頁，2024年2月25日，星期天參與區(qū)間：離子交換層析法：健康成年人5.0-8.0%均值6.5%HbA1c免疫法:IFCC:2.8-3.8%第51頁,共59頁，2024年2月25日，星期天52臨床意義：作為糖尿病患者長期控制的評價指標。1.GHb可反映測定前1-2個月（6～8周）的血糖水平

,而與抽血時間、患者是否空腹、是否使用胰島素等因素無關，是糖尿病監(jiān)控達標的金標準。2.

GHb測定也可用于鑒別糖尿病性高血糖及應激性高血糖，前者GHb水平多增高，后者正常。3.在糖尿病門診,常用GHb評價糖尿病患者血糖控制水平，當糖尿病控制不佳時GHb可高達正常2倍以上。4.

GHb測定對監(jiān)測糖尿病微小血管并發(fā)癥、慢性并發(fā)癥的發(fā)生和發(fā)展都有積極意義。5.GHb測定在糖尿病篩選普查中對輕型、“隱性”糖尿病有早期提示作用。第52頁,共59頁，2024年2月25日，星期天四糖化血清蛋白測定糖化血清蛋白(GSP):血清清蛋白和其他蛋白質與葡萄糖通過非酶促糖基化反應形成的高分子酮胺結構。清蛋白是血清中最多的成分,葡萄糖與清蛋白結合產(chǎn)物為果糖胺，濃度與血糖呈正比。半衰期為15-19天,可通過測定糖化血清蛋白水平來反映1-2周前的