藥物分析實驗設(shè)計方案

維生素C原料藥、片劑、注射劑含量測定具體方案一、維生素C原料藥含量測定具體方案碘量法：1．原理：維生素C具有還原性，可被不同氧化劑定量氧化，可用氧化還原法測定含量。2.儀器與材料：儀器：吸量管（25mL）、安全吸球、容量瓶（100mL）、燒杯（100mL，2個）、電磁加熱攪拌器、磁攪拌子、滴定管（25mL）、錐形瓶（125mL，2個）材料：市售維生素C、碘化鉀（potassiumiodide，KI）、0.025M碘酸鉀（potassiumiodate，KIO3）、1M鹽酸（hydrochloricacid，HCl）、2%淀粉水溶液（starch）。3．方法：維生素C原料的含量測定取本品約0.2g→精密稱定→加新沸過的冷水100ml與稀醋酸10ml使溶解→加淀粉指示液1ml→立即用碘滴定液（0.1mol/L）滴定→顯藍色并在30秒鐘內(nèi)不褪。4．說明：（1）維生素C與碘的反應(yīng)摩爾比是1:2，每1ml碘滴定液（0.1mol/L）相當(dāng)于8.806mg的維生素C。二..維生素C片劑含量測定具體方案紫外分光光度法維生素C（VitC）又名抗壞血酸，可降低毛細血管通透性，降低血脂，增強機體的抵抗能力，并有一定的解毒功能和抗組胺作用［1］。臨床主要用于壞血病、急慢性中毒、心肌炎、慢性肝炎等病癥。對于其含量測定，縱觀各種質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)均采用2，6-二氯吲哚酚滴定法等滴定分析法，該方法簡便、快速、準(zhǔn)確，中國藥典（2000年版）也采用碘量法。雖然該法對于維生素C原料藥的測定結(jié)果比較滿意，但對于制劑中維生素C含量的測定結(jié)果就不甚滿意了。由于維生素C易被空氣中的氧所氧化，再加上制劑輔料對測定的干擾，測定前必須先做處理。采用紫外分光光度法測定維生素C時，存在于維生素C或復(fù)合維生素制劑中的輔料一般不對測定產(chǎn)生干擾［2］。所以本法既可以測定維生素C各種制劑及復(fù)合維生素片劑，也可以測定多種飲料中的維生素C的含量。1.儀器與試劑

UV-260紫外分光光度計，VitC對照品及VitC片（規(guī)格:50mg）均由河南某藥廠提供，硫酸溶液（pH=6）。2實驗操作

2.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制精密稱取VitC對照品0.05g溶于100ml硫酸溶液，再稀釋成一系列不同濃度的對照品溶液（0～14μg/ml），分別測出其吸光度。然后以濃度為橫坐標(biāo)，以相應(yīng)的吸光度為縱坐標(biāo)繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線。該曲線是經(jīng)過原點的一條直線，可求出該曲線的斜率。

2.2樣品測定取VitC20片，精密稱定，研細，精密稱出適量（相當(dāng)于VitC50mg），置于100ml量瓶中，加硫酸溶液溶解并稀釋至刻度，濾過，精密量取續(xù)濾液2ml置于另一100ml量瓶中，加硫酸溶液稀釋至刻度，測出其吸光度A樣。由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出樣品的濃度C樣品［3］。

2.3結(jié)果計算根據(jù)精密稱出的樣品的質(zhì)量、溶解及稀釋的體積可求出C樣。

VitC含量=C樣品/C樣或VitC含量=A樣/K×C樣

注:K為標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率。

3討論

維生素C的還原能力強而易被氧化，特別是在堿性溶液中更易被氧化。另外在堿性溶液或強酸性溶液中還能進一步發(fā)生水解。因此，選擇硫酸溶液使成弱酸性。

測定時溶液pH的選擇:維生素C的紫外最大吸收波長與溶液的pH值有著密切關(guān)系。在pH=2.0時，溶液的最大吸收波長在245nm;在pH=12時，溶液的最大吸收波長在300nm;在pH=5～10范圍時，溶液的最大吸收波長在267nm，況且在pH=6.0時吸收度值最大。所以，選擇測定溶液的pH=6.0。

本方法對儀器的要求不是很高，適用于大批量樣品的定量分析。但是，若儀器搬動或重新校正波長、或者更換儀器時，標(biāo)準(zhǔn)曲線必須重新繪制。參考文獻：三..維生素C注射劑含量測定具體方案2，4-二硝基苯肼法1．原理總抗壞血酸包括還原型、脫氫型和二酮古樂糖酸。樣品中還原型抗壞血酸經(jīng)活性炭氧化為脫氫抗壞血酸，再與2，4-二硝基苯肼作用生成紅色脎，脎的含量與總抗壞血酸含量成正比，進行比色測定。。2.儀器恒溫箱：37±0.5℃，可見-紫外分光光度計，打碎機3.試劑：蒸餾水，試劑純度均為分析純。3.14.5mol/L硫酸：謹慎地加250ml硫酸（比重1.84）于700ml水中，冷卻后用水稀釋至1000ml。3.285%硫酸：謹慎地加900ml硫酸（比重1.84）于100ml水中。3.32%2，4-二硝基苯肼溶液：溶解2g2，4-二硝基苯肼于100ml4.5mol/L硫酸內(nèi)，過濾。不用時存于冰箱內(nèi)，每次用前必須過濾。3.42%草酸溶液：溶解20g草酸于700ml水中，稀釋至1000ml。3.51%草酸溶液：稀釋500ml2%草酸溶液到1000ml。3.61%硫脲溶液：溶解5g硫脲于500ml1%草酸溶液中。3.72%硫脲溶液：溶解10g硫脲于500ml1%草酸溶液中。3.81mol/L鹽酸：取100ml鹽酸，加入水中，并稀釋至1200ml。3.9活性炭：將100g活性炭加到750ml1mol/L鹽酸中，回流1~2h，過濾，用水洗數(shù)次，至濾液中無鐵離子（Fe3+）為止，然后置于110℃烘箱中烘干。3.10標(biāo)準(zhǔn)（1）抗壞血酸標(biāo)準(zhǔn)溶液（1mg/ml）：溶解100mg純抗壞血酸于100ml1%草酸溶液中。（2）標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制加1g活性炭于50ml標(biāo)準(zhǔn)溶液中，搖動1min，過濾。取10ml濾液放入500ml容量瓶中，加5.0g硫脲，用1%草酸溶液稀釋至刻度?？箟难釢舛葹?0μg/ml。取5，10，20，25，40，50，60ml稀釋液，分別放入7個100ml容量瓶中，用1%硫脲溶液稀釋至刻度，使最后稀釋液中抗壞血酸的濃度分別為1，2，4，5，8，10及12μg/ml。按樣品測定步驟形成脎并比色。以吸光值為縱坐標(biāo)，以抗壞血酸濃度（μg/ml）為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。4.操作步驟4.1樣品制備全部實驗過程應(yīng)避光。4.2氧化處理：取25ml上述濾液，加入0.5g活性炭，振搖1min，過濾，棄去最初數(shù)毫升濾液。取10ml此氧化提取液，加入10ml2%硫脲溶液，混勻。4.3呈色反應(yīng)4.3.1于三個試管中各加入4ml稀釋液。一個試管作為空白，在其余試管中加入1.0ml2%2，4-二硝基苯肼溶液，將所有試管放入37±0.5℃恒溫箱或水浴中，保溫3h。4.3.23h后取出，除空白管外，將所有試管放入冰水中?？瞻坠苋〕龊笫蛊淅涞绞覝?，然后加入1.0ml2%2，4-二硝基苯肼溶液，在室溫中放置10~15min后放入冰水內(nèi)。其余步驟同樣品。4.3.385%硫酸處理：當(dāng)試管放入冰水后，向每一試管中加入5ml85%硫酸，滴加時間至少需要1min，需邊加邊搖動試管。將試管自冰水中取出，在室溫放置30min后比色。4.3.4比色：用1cm比色杯，以空白液調(diào)零點，于500nm波長測吸光值。5.標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制（1）加2g活性炭于50mL標(biāo)準(zhǔn)溶液中，振動1min后過濾。吸取10.00mL濾液放入500mL容量瓶中加5.0g硫脲，用1%草酸溶液稀釋至刻度?？箟难釢舛?0μg/mL。吸取5，10，20，25，40，50，60mL稀釋液，分別放放7個100mL容量瓶中，用1%硫脲溶液稀釋至刻度，使最后稀釋液中抗壞血酸的深度分別為1，2，4，5，8，10，12μg/mL，為抗壞血酸標(biāo)準(zhǔn)使用液。（2）分別吸取4mL各不同深度的抗壞血酸標(biāo)準(zhǔn)使用液，于7個試管中，吸取4mL水于試劑空白管，各加入1.0mL2%2,4–二硝基苯肼溶液，混勻，將全部試管放入37℃±5℃恒溫箱或恒溫水浴中，保溫3h。3h后將8個試管取出，全部放入冰水冷卻后，向每一試管中加入5mL85%硫酸，滴加時間至少需要1min，邊加邊搖，。將試管自冰水取出，在室溫放置30min后，以試劑空白管調(diào)零，并比色測定。以吸光值為縱坐標(biāo)，抗壞血酸含量（mg）為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線或計算回歸方程。五、結(jié)果計算式中X——樣品中總抗壞血酸含量[mg/100g]；c——由標(biāo)準(zhǔn)曲線查得或由回歸方程算得試樣測定液總抗壞血酸含量（mg）；m——測定時所取濾液相當(dāng)于樣品的用量（g）。計算結(jié)果表示到小數(shù)點后兩位。6.注意事項及說明1、利用普魯士藍反應(yīng)可對鐵離子存在與否進行檢驗：將2%亞鐵氰化鉀與1%鹽酸等量混合，將需檢測的樣液滴入，如有鐵離子則產(chǎn)生藍色沉淀。2、硫脲的作用在于防止抗壞血酸的繼續(xù)被氧化和有助于脎的形成。3、加硫酸顯色后，溶液顏色可隨時間的延長而加深，因此，在加入硫酸溶液30min后，應(yīng)即立比色測定。4、檢測過程中，測定樣的吸光值不落在標(biāo)準(zhǔn)曲線上，可重新調(diào)整測定樣品的量或標(biāo)準(zhǔn)曲線的濃度范圍。5、本實驗法在1μg/ml~12μg/mL抗壞血酸范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系，最低檢出限為0.1μg/mL。6、本實驗適用于水果、蔬菜及其制品中總抗壞血酸的測定。7、食品分析中的總抗壞血酸是指抗壞血酸