GB-Tβ-內(nèi)酰胺類抗生素高分子聚合物測(cè)定 凝膠色譜法征求意見稿

ICS07.080

A21

中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)

GB/TXXXXX—201X

β-內(nèi)酰胺類抗生素高分子聚合物測(cè)定-凝

膠色譜法

Determinationofthehigh-molecularpolymersinβ-lactamantibiotics

—Gelfiltrationchromatography

（征求意見稿）

201X-XX-XX發(fā)布201X-XX-XX實(shí)施

中華人民共和國(guó)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局

中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)1化管理委員會(huì)

GB/T××××—201×

GB/T××××—201×

β-內(nèi)酰胺類抗生素中高分子聚合物檢測(cè)高效凝膠色譜法

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了β-內(nèi)酰胺類抗生素中高分子聚合物凝膠色譜法的原理、儀器和設(shè)備、試劑和材料、操

作步驟、結(jié)果分析。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于β-內(nèi)酰胺類抗生素中內(nèi)源性高分子聚合物的檢測(cè)。

2規(guī)范性引用文件

本標(biāo)準(zhǔn)引用下列文件，凡是不注明日期的引用文件，其有效版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。

GB/T6682-2008分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法。

3.術(shù)語(yǔ)和定義

3.1

高分子聚合物high-molecularpolymers

β-內(nèi)酰胺類抗生素分子自身聚合而成的一類高分子物質(zhì)。

4原理

根據(jù)分子量的大小，利用高效凝膠色譜柱對(duì)抗生素及其高分子聚合物進(jìn)行分離，經(jīng)紫外檢測(cè)器在

254nm測(cè)定，以色譜峰保留時(shí)間定性，以峰面積定量待測(cè)物的量。

5儀器和設(shè)備

5.1高效液相色譜儀：配紫外檢測(cè)器。

5.2高效凝膠色譜柱：粒徑為5μm，孔徑120A的硅膠基質(zhì)，理論塔板數(shù)10000以上。

5.3電子天平：稱量精度為0.001g。

5.4溶劑過(guò)濾系統(tǒng)。

5.5微量移液器。

6試劑和材料

6.1總則

除非有另外說(shuō)明，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T6682-2008規(guī)定的一級(jí)水。

6.2試劑

6.2.15mmol/L磷酸緩沖液，pH7.0

準(zhǔn)確稱取0.432g的磷酸氫二鈉和0.186g的磷酸二氫鈉，加水溶解后定容到1L，配制成pH7.0的

5mmol/L磷酸緩沖液。

7操作步驟

1

GB/T××××—201×

7.1分析方法的選擇

若有高分子聚物對(duì)照品，宜以高分子聚物對(duì)照品的色譜峰面積為對(duì)照，以峰面積法計(jì)算待測(cè)抗生素

樣品中高分子聚合物的含量；若無(wú)高分子聚物對(duì)照品，宜以抗生素對(duì)照品溶液主成分的色譜峰面積為對(duì)

照，以待測(cè)抗生素樣品溶液圖譜中的高分子聚合物峰面積作被測(cè)峰，計(jì)算待測(cè)抗生素樣品中高分子聚合

物的含量。

7.2試樣制備

根據(jù)待測(cè)樣品的溶解特性，水溶性樣品用磷酸緩沖液進(jìn)行溶解，脂溶性樣品用乙腈溶解，并用0.22

μm濾膜過(guò)濾。

7.3色譜條件

色譜儀為高效液相色譜儀，色譜柱為高效凝膠色譜柱，流動(dòng)相A為磷酸緩沖液，流動(dòng)相B為乙腈，

A：B體積比為90：10，流速為0.8mL/min，柱溫為25℃，檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm。

7.4標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作

若有高分子聚合物對(duì)照品，則將高分子聚合物對(duì)照品按梯度稀釋后，按7.2方法配制成5個(gè)以上濃度

梯度的樣品溶液，其濃度范圍在0.0005-5mg/mL之內(nèi)，由低濃度到高濃度依次進(jìn)樣，以其對(duì)應(yīng)的峰面積

為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸分析，選擇線性回歸擬合程度R2值在0.95以上的5個(gè)連續(xù)濃度梯度，建立標(biāo)準(zhǔn)

曲線。

若有高分子聚合物對(duì)照品，則將抗生素對(duì)照品按梯度稀釋后，按7.2方法配制成5個(gè)以上濃度梯度的

樣品溶液，其濃度范圍在0.005-5mg/mL之內(nèi)，由低濃度到高濃度依次進(jìn)樣，以濃度為橫坐標(biāo)，以抗生

素對(duì)照品主成分對(duì)應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸分析，選擇線性回歸擬合程度R2值在0.95以上的

5個(gè)連續(xù)濃度梯度，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。

7.5試樣溶液測(cè)定

根據(jù)7.4的標(biāo)準(zhǔn)曲線，將試樣按7.2進(jìn)行溶解，使得其濃度落在標(biāo)準(zhǔn)曲線的濃度范圍內(nèi)，按照與7.4同

樣的儀器條件進(jìn)行測(cè)定。

8結(jié)果分析

8.1結(jié)果計(jì)算

8.1.1若以高分子聚物對(duì)照品的色譜峰面積為對(duì)照，高分子聚合物濃度和百分比分別按公式（1）和公

式（2）進(jìn)行計(jì)算：

…………(1)

??1×??0

??1=??0

…………(2)

??1×??1×100

1

式中：?=?

2

GB/T××××—201×

CP1——試樣溶液中高分子聚合物濃度（mg/mL）；

SP1——試樣溶液高分子聚合物的峰面積；

CP0——高分子聚合物對(duì)照品峰面積所對(duì)應(yīng)的濃度（mg/mL）；

SP0——高分子聚合物對(duì)照品的峰面積；

P1——試樣中高分子聚合物百分比含量（%）；

VP1——試樣溶液體積；

m——試樣總量，g。

8.1.2若以抗生素對(duì)照品溶液主成分的色譜峰面積為對(duì)照，高分子聚合物濃度和百分比分別按公式（3）

和公式（4）進(jìn)行計(jì)算：

…………(3)

??1×??0

??1=??0

…………………(4)

??1×??1×100

1

式中：?=100??

CA1——試樣中主成分濃度（mg/mL）；

SA1——試樣主成分的峰面積；

CA0——抗生素對(duì)照品主成分峰面積所對(duì)應(yīng)的濃度（mg/mL）；

SA0——抗生素對(duì)照品主成分的峰面積；

A1——試樣中高分子聚合物百分比含量（%）；

VA1——試樣溶液體積；

m——試樣總量（g）。

以平行樣的平均值為最終的含量值，計(jì)算結(jié)果保留到小數(shù)點(diǎn)后兩位。

8.2重復(fù)性

在重復(fù)條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過(guò)算術(shù)平均值的10%。

3

GB/T××××—201×

附錄A

（資料性附錄）

0.70

1

0

.

0

0.608

3主成分

0.50

0.40

A

U

0.30

0.20

高分子聚合物降解成分

0.101

3

.

9

8

5

.

8

7

0089

1

1

1

1

6

4

.

.

....

1

.

2

.

7

1

9

1294

1

3

.

0.00.

1

1

7

3660

3

7

4

9

5

0

2163

4

2

5

7

8

0.001.002.003.004.005.006.007.008.009.0010.0011.0012.00713.0014.0015.0016.0017.0018.0019.0020.0021.0022.0023.0024.0025.00

分鐘

圖A.1頭孢噻吩的液相色譜圖

0.070

7

.

7

1主成分

0.0601

0.050

0.040

A

U

0.030

0.020

0.010高分子聚合物

78

6

..

.

29

0.0004

21

4

88

5

0.001.002.003.004.005.006.007.008.009.0010.0011.0012.0013.0014.0015.0016.0017.0018.0019.0020.0021.0022.0023.0024.0025.00

分鐘

圖A.2頭孢曲松的液相色譜圖

0.35

9

.

4

8

0.30主8成分

0.25

0.20

A

U

0.15

0.10

高分子聚合物降解成分

0.05

7

7

7

8

1

.

.

.

.

3

5

6

1

8

0.00.

3

8

9

0

9

3

3

8

0

0

0.001.002.003.004.005.006.007.008.009.0010.0011.0012.0013.0014.60015.0016.0017.0018.0019.0020.0021.0022.0023.0024.0025.00

分鐘

圖A.3頭孢呋辛的液相色譜圖

4

GB/T××××—201×

0.24

0.22

9

0.20.

0

9

0.187主成分

0.16

0.14

0.12

A

U

0.10

0.08

0.06

0.04

0.02

8

7

1

.

.

3

6

4

0.00.

4

9

9

5

9

1

0.001.002.003.004.005.006.007.008.009.0010.0011.0012.0013.0014.30015.0016.0017.0018.0019.0020.0021.0022.0023.0024.0025.00

分鐘

圖A.4頭孢替唑的液相色譜圖

0.55

0.50

1

1

0.45.

1

4

9

0.40主成分

0.35

0.30

A

U0.25降解成分

0.20

0.15高分子聚合物

0.10降解成分

0.05

1

1

1

2

11

1

1

1

0

0

3

45

4