HIV-1病毒載量測定及質(zhì)量保證指南

HIV-1HIV-1病毒載量測定及質(zhì)量保證指南#HIV-1病毒載量測定及質(zhì)量保證指南（2013版）GuidelineforHIV-1ViralLoadTestingandQualityAssurance中國疾病預(yù)防控制中心2013年1月前言隨著HIV-1病毒載量檢測在艾滋病臨床輔助診斷、抗病毒治療監(jiān)測及相關(guān)科研工作中的廣泛應(yīng)用，我國開展該項(xiàng)檢測工作的實(shí)驗(yàn)室日益增多。自1997年艾滋病實(shí)驗(yàn)室首次引進(jìn)HIV-1病毒載量檢測技術(shù)以來，截至2012年底全國已經(jīng)配備115臺HIV-1病毒載量檢測儀，覆蓋疾控、醫(yī)院、檢疫、軍隊(duì)等系統(tǒng)，艾滋病流行重點(diǎn)地區(qū)及少數(shù)縣級實(shí)驗(yàn)室均已配備HIV-1病毒載量檢測儀，每年檢測量已達(dá)13萬人份以上。由于HIV-1病毒載量檢測質(zhì)量對艾滋病的早期診斷及治療有重要影響，因此急需加強(qiáng)該領(lǐng)域的培訓(xùn)和質(zhì)量控制，規(guī)范實(shí)驗(yàn)室操作，以保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。自2008年開始實(shí)施《HIV-1病毒載量測定及質(zhì)量保證指南》（試行，以下簡稱《指南》）以來，參與HIV-1病毒載量能力驗(yàn)證工作的實(shí)驗(yàn)室從2007年的29家增加到2012年的107家，占已開展工作實(shí)驗(yàn)室的百分之九十以上。通過綜合分析近幾年能力驗(yàn)證發(fā)現(xiàn)的問題與檢測技術(shù)發(fā)展的實(shí)際情況，考慮各種試劑的檢測要求，結(jié)合專家意見和一線實(shí)驗(yàn)室工作人員的經(jīng)驗(yàn)與需求，對本指南進(jìn)行了適當(dāng)修改、調(diào)整和補(bǔ)充，主要修改內(nèi)容包括：（1）增加“人員要求”章節(jié)；（2）修改“常用HIV-1病毒載量檢測方法”；（3）修改“HIV-1病毒載量檢測能力驗(yàn)證（PT）”；（4）補(bǔ)充常見問題分析和處理等內(nèi)容。修訂后的《指南》共分八章，包括：總則，人員要求，實(shí)驗(yàn)室環(huán)境與設(shè)施，樣品的采集、處理保存運(yùn)輸，常用檢測方法簡介，室內(nèi)質(zhì)量控制，實(shí)驗(yàn)室檢測能力驗(yàn)證（PT），實(shí)驗(yàn)室生物安全，以及四個(gè)附表。本指南在修改過程中，接納了國內(nèi)專家、同行的意見和建議，經(jīng)過多次修改編寫成《指南》（2013）版。本指南由中國疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病預(yù)防控制中心艾滋病參比實(shí)驗(yàn)室組織有關(guān)專家撰寫，由中國疾病預(yù)防控制中心批準(zhǔn)執(zhí)行，并在HIV-1病毒載量檢測實(shí)驗(yàn)室網(wǎng)絡(luò)內(nèi)發(fā)布實(shí)施。由于國內(nèi)各實(shí)驗(yàn)室條件不同，不能采納所有實(shí)驗(yàn)室的建議，因此本指南主要提出一些原則上的參考建議，其中定有不妥之處，希望廣大同仁提出意見，以便不斷完善。本指南在2008年頒布的《指南》（試行）的基礎(chǔ)上修訂，在此對編寫試行版過程中給予幫助的國際組織和專家表示感謝。對本次修訂過程中提出建議的全國HIV-1病毒載量檢測實(shí)驗(yàn)室基層工作人員表示衷心的感謝。本指南的解釋權(quán)屬于中國疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病預(yù)防控制中心。本指南編寫主持人：蔣巖本指南編寫人員：潘品良蔣巖李敬云鐘平尚紅李太生李繁本指南審核咨詢專家及技術(shù)人員：邵一鳴汪寧王佑春郭志宏肖瑤邱茂鋒邢文革姚均朱紅秦光明徐建青本指南編寫聯(lián)系人：潘品良本指南適用于全國HIV-1病毒載量檢測實(shí)驗(yàn)室本指南編寫單位：中國疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病預(yù)防控制中心本指南自發(fā)布之日實(shí)施，同時(shí)終止2008年頒布的《HIV-1病毒載量測定及質(zhì)量保證指南》（試行）。HIV-1病毒載量測定及質(zhì)量保證指南目錄第一章總則第二章人員要求第三章實(shí)驗(yàn)室環(huán)境與設(shè)施第四章樣品的采集、處理、保存、運(yùn)輸?shù)谖逭鲁Ｓ脵z測方法簡介第六章室內(nèi)質(zhì)量控制第七章實(shí)驗(yàn)室檢測能力驗(yàn)證（PT）第八章實(shí)驗(yàn)室生物安全附表1常見問題分析和處理附表2HIV-1病毒載量檢測樣品送檢及接收單附表3HIV-1病毒載量檢測能力驗(yàn)證樣品接收專用單附表4HIV-1病毒載量檢測報(bào)告單參考文獻(xiàn)縮略語第一章總則意義HIV-1病毒載量是指每毫升血漿中病毒顆粒的數(shù)量，是艾滋病防治工作中一項(xiàng)重要的實(shí)驗(yàn)室檢測指標(biāo)。HIV-1病毒載量檢測主要用于抗病毒治療監(jiān)測，包括治療時(shí)機(jī)判定、治療效果評估、耐藥預(yù)警；還可用于HIV感染的輔助診斷，包括窗口期、病程晚期、嬰兒感染、疑難樣本等的診斷；也可用于血液篩查。為了保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性，必須對開展HIV-1病毒載量檢測的實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行規(guī)范化管理和質(zhì)量控制。目的指導(dǎo)HIV-1病毒載量檢測工作，規(guī)范實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制與管理。適用范圍適用于我國開展HIV-1病毒載量檢測工作的所有實(shí)驗(yàn)室。第二章人員要求HIV-1病毒載量檢測人員分為檢驗(yàn)人、復(fù)核人、簽發(fā)人。培訓(xùn)實(shí)驗(yàn)室在使用新方法前，須對技術(shù)人員進(jìn)行上崗培訓(xùn)，獲得資格后方可開展相應(yīng)工作。上崗培訓(xùn)內(nèi)容至少應(yīng)包括：HIV檢測相關(guān)基礎(chǔ)知識，HIV-1病毒載量檢測技術(shù)及管理要求，實(shí)驗(yàn)操作，質(zhì)量保證與質(zhì)量控制，生物安全。檢驗(yàn)人進(jìn)行HIV-1病毒載量檢測的人員須具有艾滋病檢測實(shí)驗(yàn)室的上崗資格，接受過省級以上的實(shí)驗(yàn)操作技術(shù)及艾滋病實(shí)驗(yàn)室生物安全培訓(xùn)及廠家的技術(shù)操作培訓(xùn)。所有相關(guān)檢驗(yàn)人員需經(jīng)公司工程師操作培訓(xùn)，能獨(dú)立熟練地操作，并經(jīng)考核合格，持證上崗。復(fù)核人、簽發(fā)人應(yīng)具備對檢測過程進(jìn)行分析、解決問題的能力。復(fù)核人負(fù)責(zé)對原始數(shù)據(jù)查閱、結(jié)果核對，簽發(fā)人核實(shí)結(jié)果正確后對外簽發(fā)報(bào)告。第三章實(shí)驗(yàn)室環(huán)境與設(shè)施除了HIV-1病毒載量檢測儀器，合理地、充分地配備實(shí)驗(yàn)室環(huán)境、設(shè)施、輔助設(shè)備是保證HIV-1病毒載量檢測質(zhì)量的重要方面。實(shí)驗(yàn)室環(huán)境HIV-1病毒載量實(shí)驗(yàn)室應(yīng)符合分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室基本要求，包括試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣品處理區(qū)、擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)。實(shí)驗(yàn)室設(shè)置總體原則為各區(qū)獨(dú)立、控制風(fēng)向、因地制宜、方便工作。具體要求：各區(qū)必須是相互獨(dú)立的，有條件各區(qū)內(nèi)可分別設(shè)置緩沖間，以保證不同區(qū)之間完全分隔開。各區(qū)的儀器設(shè)備與各種物品必須為專用，避免交叉污染。試劑準(zhǔn)備區(qū)和樣品處理區(qū)內(nèi)須保持低度正壓（或常壓）狀態(tài)，使空氣流向始終由室內(nèi)向外，以避免擴(kuò)增污染物進(jìn)入此區(qū)域。擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)內(nèi)須保持低度負(fù)壓狀態(tài)，使空氣流向始終由室外向內(nèi)，以防止擴(kuò)增產(chǎn)物通過氣溶膠流出，造成與其他區(qū)域的交叉污染。實(shí)驗(yàn)室可安裝排風(fēng)扇或其他排風(fēng)裝置。擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)可以設(shè)在遠(yuǎn)離其他各區(qū)的地方。工作時(shí)必須遵循單一工作流向，即只能從試劑準(zhǔn)備區(qū)開始，到樣品處理區(qū)，然后到擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)。實(shí)驗(yàn)室設(shè)施各種HIV-1病毒載量檢測方法除病毒載量檢測儀外，還需要配備相應(yīng)的輔助設(shè)備才能完成檢測。HIV-1病毒載量檢測實(shí)驗(yàn)室設(shè)備分布示意圖提供為HIV-1病毒載量檢測實(shí)驗(yàn)室不同區(qū)內(nèi)必備的輔助設(shè)備及耗材。輔助設(shè)備應(yīng)根據(jù)不同檢測方法作相應(yīng)變化。樣品處理區(qū)：生物安全柜：二級離心機(jī)（32000g，適合1.5mL離心管）冰箱：2-8℃，-20℃，-70℃以下水浴箱：誤差范圍小于0.5℃加樣器1套（20μL、200μL、1000μL）

帶濾芯的一次性吸頭（無DNA和RNA酶），1.5mL離心管（無DNA和RNA酶）及相應(yīng)試管架計(jì)時(shí)器旋渦振蕩器：震動(dòng)頻率可調(diào)一次性工作服、帽、口罩、無粉手套和鞋套HIV-1病毒載量檢測實(shí)驗(yàn)室設(shè)備分布示意圖病毒載量儀

加樣器生物安全柜

加樣器超凈工作臺

加樣器帶濾芯的一次性吸頭（無DNA和RNA酶），1.5mL離心管（無DNA和RNA酶）及相應(yīng)試管架計(jì)時(shí)器旋渦振蕩器：震動(dòng)頻率可調(diào)一次性工作服、帽、口罩、無粉手套和鞋套HIV-1病毒載量檢測實(shí)驗(yàn)室設(shè)備分布示意圖病毒載量儀

加樣器生物安全柜

加樣器超凈工作臺

加樣器擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)漩渦振蕩器漩渦振

蕩器冰

箱2-8℃樣品處理區(qū)注:箭頭表示風(fēng)的流動(dòng)方向冰箱-70℃冰箱-20℃冰

箱2-8℃試劑準(zhǔn)備區(qū)試劑準(zhǔn)備區(qū)：超凈工作臺（或密閉工作臺）加樣器1套（20μL、200μL、1000μL）離心機(jī)（18000g，適合1.5mL離心管）冰箱：2-8℃，-20℃計(jì)時(shí)器旋渦振蕩器，震動(dòng)頻率可調(diào)帶濾芯的一次性吸頭（無DNA、RNA酶）1.5mL離心管（無DNA和RNA酶）及相應(yīng)試管架一次性工作服、帽、口罩、無粉手套、鞋套擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)：HIV-1病毒載量檢測儀加樣器1套（20μL、200μL、1000μL）冰箱：2-8℃，-20℃旋渦振蕩器，震動(dòng)頻率可調(diào)一次性工作服、帽、口罩、無粉手套和鞋套帶濾芯的一次性吸頭（無DNA、RNA酶）第四章樣品的采集、處理、保存和運(yùn)輸樣品的采集、處理、保存和運(yùn)輸要求保證滿足不同HIV-1病毒載量檢測方法對樣品性質(zhì)的，并保證生物安全。因此需按照所使用檢測方法的要求嚴(yán)格執(zhí)行抗凝、分樣時(shí)間、運(yùn)輸包裝、保存溫度、凍融記錄。用于HIV-1病毒載量檢測的樣品須采用抗凝血漿。樣品的采集采樣器材：一次性抗凝真空采血管、持針器、蝶形針等?？鼓齽和ǔ２捎肊DTA（乙二胺四乙酸）或ACD（枸櫞酸鈉），須符合不同檢測方法對樣品的要求。樣品標(biāo)識：在采血管上貼唯一性樣品編號。樣品采集量：通常采集全血8-10ml,采集的樣品量應(yīng)與定量采血管的刻度要求一致，避免血液凝固或稀釋。樣品混勻：采集血液后，立即輕輕上下顛倒抗凝管10次，使血液與抗凝劑充分混勻。其它信息：HIV-1病毒載量檢測樣品送檢及接收單（附表2）的備注欄內(nèi)需注明采集對象的基本信息和流行病學(xué)資料、抗病毒藥物使用情況、最近一次的實(shí)驗(yàn)室病毒載量檢測結(jié)果。樣品的處理要求在采血后6小時(shí)內(nèi)離心樣品，室溫下使用離心力為800-1200g（1500-3000rpm）離心10分鐘后，吸出血漿,分裝到無菌的聚丙烯螺口凍存管中，并注明分裝時(shí)間，凍存管應(yīng)提前貼上耐凍的樣品編號標(biāo)簽。血漿樣品不能滅活。做好樣品處理記錄，包括冰箱溫度變化、樣品存取。樣品的保存保存條件：根據(jù)血漿檢測時(shí)間而定，4天內(nèi)可在4℃暫時(shí)保存，3個(gè)月內(nèi)應(yīng)凍存于-20℃以下，3個(gè)月以上應(yīng)置于-70℃以下。不能使用自動(dòng)除霜冰箱。血漿樣品凍融不應(yīng)超過3次。監(jiān)控并記錄保存溫度以及樣品狀態(tài)的變化防止樣品變質(zhì)、泄漏及污染。樣品的運(yùn)輸根據(jù)《可感染人類的高致病性病原微生物菌（毒）種或樣本運(yùn)輸管理規(guī)定》的要求運(yùn)輸，并嚴(yán)格控制運(yùn)輸?shù)睦鋬鰻顟B(tài)，避免樣品融化。樣品的發(fā)送和接收發(fā)送樣品時(shí),需詳細(xì)填寫樣品HIV-1病毒載量檢測樣品送檢及接收單（附表2）。接收樣品時(shí)，按HIV-1病毒載量檢測樣品送檢及接收單（附表2）核對樣品數(shù)量，檢查樣品狀況。樣品管破損造成樣品溢出、出現(xiàn)明顯溶血、凝血的樣品，不宜作HIV-1病毒載量檢測；如果樣品已經(jīng)融化，可以4℃保存并盡快檢測，記錄凍融一次。第五章常用檢測方法簡介HIV-1病毒載量檢測根據(jù)方法的原理不同，分為不同系列儀器，目前常用的HIV病毒載量的測定方法有：核酸序列依賴性擴(kuò)增(NASBA)技術(shù)，代表產(chǎn)品為實(shí)時(shí)熒光技術(shù)NucliSensEasyQ儀；分枝DNA信號放大系統(tǒng)(bDNA)技術(shù)，代表產(chǎn)品為bDNA440分析儀；實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增技術(shù)(real-timePCR)，包括CobasAmplicorTaqman檢測系統(tǒng)、M2000檢測儀與國產(chǎn)試劑盒均屬此類技術(shù)。5．1核酸序列依賴性擴(kuò)增(NASBA)技術(shù)最早產(chǎn)品為NucliSensECL定量RNA測定方法，已經(jīng)被NucliSensEasyQ新一代實(shí)時(shí)分子信標(biāo)定量擴(kuò)增所取代。所采用的 NASBA技術(shù)是一種等溫?cái)U(kuò)增系統(tǒng)，其擴(kuò)增基礎(chǔ)在于系統(tǒng)內(nèi)的混合酶系統(tǒng)，此系統(tǒng)內(nèi)含有逆轉(zhuǎn)錄酶 AMV-RT和T7-DNA多聚酶在體外模擬逆轉(zhuǎn)錄病毒體內(nèi)復(fù)制過程。NuclisensEasyQ結(jié)合NASBA技術(shù)、BOOM核酸提純技術(shù)與分子信標(biāo)探針技術(shù)(MolecularBeacon)檢測血漿中的HIVRNA水平。這種結(jié)合方法使用實(shí)時(shí)擴(kuò)增分析(real-timeamplificationassay)，提高對診斷質(zhì)量的要求。此方法可分為三個(gè)步驟：核酸提取、擴(kuò)增和等溫檢測。NucliSensEasyQHIV-1的檢測是利用靶特異的分子信標(biāo)進(jìn)行，分子信標(biāo)的DNA寡核苷酸片段包含一段可特異結(jié)合靶RNA的序列。當(dāng)RNA互補(bǔ)鏈不存在時(shí)，分子信標(biāo)維持內(nèi)部發(fā)夾結(jié)構(gòu)，使猝滅基團(tuán)處于非常接近熒光素的位置，熒光信號被猝滅。當(dāng)分子信標(biāo)與互補(bǔ)靶序列結(jié)合，發(fā)夾打開釋放熒光信號，報(bào)告靶序列的存在。NucliSensEasyQHIV-1使用兩個(gè)不同的分子信標(biāo)，一個(gè)是針對野毒株HIV-1RNA的擴(kuò)增子，另一個(gè)針對內(nèi)標(biāo)物RNA(calibrator)的擴(kuò)增子，各使用不同熒光染料(野毒株使用6-FAM，內(nèi)標(biāo)物使用6-ROX)，從而實(shí)現(xiàn)靶序列和內(nèi)標(biāo)物RNA兩個(gè)擴(kuò)增過程的各自跟蹤。熒光信號的動(dòng)力學(xué)分析可以顯示野毒株和內(nèi)標(biāo)物RNA的轉(zhuǎn)錄速率，因此可以計(jì)算出原樣本中HIV-1RNA含量。5．2分枝DNA(bDNA)技術(shù)分枝DNA測定技術(shù)基于其獨(dú)特的信號放大系統(tǒng)，即分枝DNA信號放大系統(tǒng)，為一個(gè)人工合成的分枝DNA，分枝DNA的分枝可結(jié)合多個(gè)酶標(biāo)記物，從而將病毒的信號放大，以便進(jìn)行檢測。此檢測系統(tǒng)不涉及核酸擴(kuò)增反應(yīng)。方法定量系統(tǒng)中沒有內(nèi)標(biāo)記物，每次實(shí)驗(yàn)設(shè)置一系列外部標(biāo)記，通過實(shí)驗(yàn)樣品反應(yīng)強(qiáng)度與外部標(biāo)記樣品強(qiáng)度的比較確定待檢樣品的病毒拷貝數(shù)。bDNA檢測通常包括以下步驟：（1）將患者血清或血漿連同含有特異的合成寡聚核苷酸靶探針的裂解液加到微孔中；（2）孵育，釋放病毒核酸，降解RNA酶或使DNA變性,然后靶探針結(jié)合到靶RNA或DNA并固定在固相板上；（3）冷卻洗板；（4）加信號放大探針（bDNA）到各孔內(nèi)；（5）孵育，使bDNA雜交到靶探針的相應(yīng)部位；（6）冷卻洗板；（7）加標(biāo)記探針到各孔內(nèi)；（8）孵育，使酶標(biāo)記的探針雜交到bDNA上；（9）冷卻洗板；（10）加化學(xué)發(fā)光底物到各孔中；（11）孵育，酶和底物相互作用，產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光信號。發(fā)射的光強(qiáng)以相對光量值（RLUs）表示。產(chǎn)生的光強(qiáng)直接與各樣品中病毒RNA或DNA的拷貝數(shù)成正比。各樣品中病毒核酸的含量由與樣品一同處理的標(biāo)準(zhǔn)所制作的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算獲得。bDNA440病毒載量檢測儀較bDNA340在孵育、沖洗和加樣步驟由手動(dòng)操作轉(zhuǎn)變?yōu)樽詣?dòng)化，減少污染，更便于操作節(jié)省實(shí)驗(yàn)時(shí)間。5．3實(shí)時(shí)（real-time）熒光定量PCR擴(kuò)增實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)，是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號積累實(shí)時(shí)監(jiān)測整個(gè)PCR進(jìn)程，最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。每個(gè)反應(yīng)管內(nèi)的熒光信號到達(dá)設(shè)定的域值時(shí)所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)Ct值與該模板的起始拷貝數(shù)的對數(shù)存在線性關(guān)系。利用已知起始拷貝數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)品可作出標(biāo)準(zhǔn)曲線，其中橫坐標(biāo)代表起始拷貝數(shù)的對數(shù)，縱坐標(biāo)代表Ct值）。因此，只要獲得未知樣品的Ct值，即可從標(biāo)準(zhǔn)曲線上計(jì)算出該樣品的起始拷貝數(shù)。實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增的實(shí)驗(yàn)檢測過程可分為：（1）樣品制備,抽提和濃縮目標(biāo)RNA分子，并除去可能存在的抑制因子。（2）Real-timePCR，檢測PCR的產(chǎn)物使用熒光標(biāo)記的寡核苷酸探針。檢測的原理基于熒光信號增長曲線與循環(huán)數(shù)相關(guān)。（3）RT-PCR反應(yīng)，病毒RNA利用逆轉(zhuǎn)錄酶將RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，然后通過DNA聚合酶對特定片段進(jìn)行擴(kuò)增。（4）擴(kuò)增產(chǎn)物的檢測，基于檢測閾值的設(shè)定，當(dāng)病毒載量高時(shí)，低循環(huán)數(shù)即能檢測到熒光信號，當(dāng)病毒載量低時(shí)，高循環(huán)數(shù)時(shí)才能檢測到熒光。循環(huán)數(shù)與樣品病毒載量成線性關(guān)系。利用標(biāo)準(zhǔn)品制作循環(huán)數(shù)與病毒載量的標(biāo)準(zhǔn)曲線就能對樣品病毒載量進(jìn)行定量檢測。目前此原理已為多種HIV-1病毒載量檢測的的主要方法，包括CobasAmplicorTaqman檢測系統(tǒng)、M2000檢測儀和國內(nèi)產(chǎn)品凱杰、達(dá)安以及正研制的定量檢測試劑均屬于該技術(shù)。CobasAmplicorTaqman檢測系統(tǒng)是全自動(dòng)化的實(shí)時(shí)熒光定量PCR病毒載量平臺,具有樣品進(jìn)--結(jié)果出(sample-in,result-out) 的特點(diǎn)。此方法的檢測過程為：裝待測樣品、放試劑和耗材、 核酸提取、PCR反應(yīng)體系制備、實(shí)時(shí)熒光定量PCR。Taqman熒光定量技術(shù)是以Taqman熒光探針為基礎(chǔ)，Taqman熒光探針為一寡核苷酸，兩端分別標(biāo)記一個(gè)熒光發(fā)射基團(tuán)和一個(gè)熒光淬滅基團(tuán)。探針完整時(shí)，發(fā)射基團(tuán)發(fā)射的熒光信號被淬滅基團(tuán)吸收；PCR擴(kuò)增時(shí)，Taq酶的5'－3'外切酶活性將探針酶切降解，使熒光發(fā)射基團(tuán)和熒光淬滅基團(tuán)分離，從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號，即每擴(kuò)增一條DNA鏈，就有一個(gè)熒光分子形成，實(shí)現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物形成完全同步，從而實(shí)現(xiàn)定量。M2000利用RT-PCR法，在開始制備樣本時(shí)，對每個(gè)樣本加入與HIV-1目標(biāo)序列無關(guān)的RNA序列。這種不相關(guān)的RNA序列通過RT-PCR被同時(shí)擴(kuò)增，從而充當(dāng)內(nèi)部質(zhì)控品(IC)。在m2000rt儀器上，每個(gè)擴(kuò)增循環(huán)中存在的HIV-1目標(biāo)序列總量通過含熒光標(biāo)記的寡核苷酸探針測定。m2000rt系統(tǒng)通過樣品制備、試劑制備和反應(yīng)板裝置、擴(kuò)增、檢測四個(gè)步驟，檢測到熒光信號的擴(kuò)增循環(huán)與初始樣本中存在的HIV-1RNA濃度對數(shù)成比例。國內(nèi)產(chǎn)品匹基、達(dá)安試劑盒的原理步驟與上述類似，為開放式試劑，可以使用多款實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測儀。5．4不同方法檢測結(jié)果間相互關(guān)系病毒載量的檢測單位有拷貝數(shù)(CP)/ml和國際單位(IU)/ml，且同一樣本不同方法的病毒載量檢測結(jié)果不同，另外，不同方法間檢測結(jié)果并無固定的轉(zhuǎn)換關(guān)系，與病毒亞型、試劑不同版本有關(guān)，因此評估同一病人的治療效果需用同一種方法檢測，并且考慮試劑版本的更新情況。第六章室內(nèi)質(zhì)量控制內(nèi)部質(zhì)量控制是在良好實(shí)驗(yàn)室整體環(huán)境支持下，從樣品接收到發(fā)出報(bào)告整個(gè)過程每個(gè)環(huán)節(jié)的管理過程，包括：（1）人員；（2）實(shí)驗(yàn)室分區(qū)和環(huán)境；（3）儀器；（4）檢測過程（試劑、操作過程、質(zhì)控品使用）；（5）數(shù)據(jù)報(bào)告。人員HIV-1病毒載量檢測人員分為檢驗(yàn)人、復(fù)核人、簽發(fā)人。所有相關(guān)檢驗(yàn)人員需經(jīng)操作培訓(xùn)，能獨(dú)立熟練地操作，并經(jīng)考核合格，持證上崗。復(fù)核人、簽發(fā)人應(yīng)具備對檢測過程進(jìn)行分析、解決問題的能力。實(shí)驗(yàn)室分區(qū)和環(huán)境實(shí)驗(yàn)室分區(qū)的功能HIV-1病毒載量檢測實(shí)驗(yàn)室原則上應(yīng)分為三個(gè)獨(dú)立工作區(qū)：試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣品處理區(qū)、擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)，并設(shè)在不同房間。不同檢測方法的分區(qū)功能和要求可有所不同。試劑準(zhǔn)備區(qū)：擴(kuò)增試劑的配制、分裝和保存；樣品處理區(qū)：樣品登記、分裝，核酸提取、保存和加樣；擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)：產(chǎn)物擴(kuò)增的測定、結(jié)果分析、登記及報(bào)告。嚴(yán)格要求三區(qū)的單一空氣流向：從試劑準(zhǔn)備區(qū)到樣品處理區(qū)，然后到擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)，不能逆向流動(dòng)。實(shí)驗(yàn)室的設(shè)置及輔助設(shè)備的具體要求參見第三章。實(shí)驗(yàn)室環(huán)境的要求實(shí)驗(yàn)室有足夠的空間；采光好，應(yīng)避免陽光直射設(shè)備；室溫控制在18~25℃；室內(nèi)相對濕度控制在30~70%；電源穩(wěn)定，HIV-1病毒載量檢測儀應(yīng)配備穩(wěn)壓電源；室內(nèi)保持干凈整潔，無灰塵；實(shí)驗(yàn)前后，用75%乙醇或0.1%次氯酸鈉及時(shí)處理操作臺面。儀器設(shè)備質(zhì)控加樣器、溫濕度計(jì)須經(jīng)計(jì)量部門校準(zhǔn)，每年一次，每半年期間核查一次。HIV-1病毒載量檢測儀及其配套儀器可以委托公司校準(zhǔn)，每年一次。離心機(jī)可以委托計(jì)量部門或公司校準(zhǔn)，每年一次。冰箱、水浴箱用校準(zhǔn)合格的溫度計(jì)測量溫度，每次做好記錄。檢測過程質(zhì)控試劑質(zhì)控使用經(jīng)國家食品藥品監(jiān)督管理局注冊的試劑。所有試劑盒須嚴(yán)格按要求條件保存。試劑盒拆封時(shí)，要記錄拆封時(shí)間，所有試劑嚴(yán)格控制在有效期內(nèi)使用。實(shí)驗(yàn)用水：要求使用無DNA和RNA酶的去離子水。操作過程質(zhì)控按照試劑盒要求與實(shí)驗(yàn)室的條件及時(shí)更新標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP），并嚴(yán)格執(zhí)行，不得擅自修改。質(zhì)控品的使用每次實(shí)驗(yàn)按照試劑盒說明書的要求使用試劑盒提供的質(zhì)控品，并滿足質(zhì)控要求。同時(shí)使用外部質(zhì)控品（HIV病毒載量值為5000-15000拷貝/毫升質(zhì)控品），如果試劑盒沒有陰性質(zhì)控品，需加一個(gè)陰性質(zhì)控品。外部質(zhì)控品的制備、定值及使用（1）制備對用于制備質(zhì)控品的大樣本血漿樣品，要求用EDTA抗凝劑抗凝，新鮮抗凝血離心分離，得到透亮血漿。然后用孔徑為0.2微米的濾膜過濾除菌，充分混勻。按各自方法對樣品量的需求，用無菌凍存管定量分裝，標(biāo)記，封口，凍存于-70℃以下非自動(dòng)除霜冰箱內(nèi)，避免反復(fù)凍融。按實(shí)際使用量的要求配制足夠量外部質(zhì)控品（推薦每次配置量可使用兩年）。（2）定值從制備好的外部質(zhì)控品中隨機(jī)選出5管，嚴(yán)格按照實(shí)驗(yàn)室的各自方法標(biāo)準(zhǔn)操作程序進(jìn)行HIV-1病毒載量檢測，將測得結(jié)果的拷貝值或IU值換算成Log10值，計(jì)算其算術(shù)平均值（M）和標(biāo)準(zhǔn)偏差（S）。（3）質(zhì)控圖的繪制和使用根據(jù)測得值，在坐標(biāo)圖上畫出平均值、±2S、±3S線圖，作質(zhì)控圖使用。每次檢測都應(yīng)帶一個(gè)外部對照，將得到的外部質(zhì)控品Log10值標(biāo)在上述質(zhì)控圖上。每次質(zhì)控品測得值在平均值±2.0s內(nèi)方為有效。使用新批次的外部對照質(zhì)控品時(shí)，必須重新繪制質(zhì)控圖。（4）質(zhì)控品不宜使用稀釋方法制備。6.5數(shù)據(jù)分析、結(jié)果報(bào)告在試劑盒及外部質(zhì)控品結(jié)果滿足要求的前提下，對樣品進(jìn)行分析。外部質(zhì)控品不合格，樣品需要重新檢測。結(jié)果超過檢測上限的樣品應(yīng)稀釋以后重新檢測。復(fù)核人對檢測結(jié)果進(jìn)行仔細(xì)復(fù)核并對結(jié)果提出結(jié)論、簽字。簽發(fā)人對結(jié)果的結(jié)論進(jìn)行審核、分析、總結(jié)、簽字。按不同方法的要求，以拷貝/毫升或國際單位/毫升為單位報(bào)告樣品的HIV-1病毒載量值。第七章實(shí)驗(yàn)室檢測能力驗(yàn)證（PT）HIV-1病毒載量檢測的外部質(zhì)量控制可以通過參加外部質(zhì)量評價(jià)，提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可比性，發(fā)現(xiàn)系統(tǒng)誤差，改進(jìn)實(shí)驗(yàn)室工作，提高檢測質(zhì)量。HIV-1病毒載量檢測實(shí)驗(yàn)室須參加艾滋病/丙肝參比實(shí)驗(yàn)室或有資質(zhì)的國內(nèi)外機(jī)構(gòu)組織的HIV-1病毒載量檢測能力驗(yàn)證來實(shí)施外部質(zhì)量控制。PT組織艾滋病/丙肝參比實(shí)驗(yàn)室為HIV-1病毒載量檢測能力驗(yàn)證（PT）的組織者，負(fù)責(zé)制定國內(nèi)HIV-1病毒載量檢測能力驗(yàn)證的計(jì)劃并組織實(shí)施。國內(nèi)所有從事HIV-1病毒載量檢測的實(shí)驗(yàn)室須參加該P(yáng)T項(xiàng)目，在規(guī)定時(shí)間內(nèi)使用有效試劑與實(shí)驗(yàn)樣品一起檢測，填寫HIV-1病毒載量檢測報(bào)告單（附表4），上報(bào)艾滋病/丙肝參比實(shí)驗(yàn)室。鼓勵(lì)有條件的實(shí)驗(yàn)室參加有資質(zhì)的國內(nèi)外機(jī)構(gòu)組織的PT活動(dòng)。PT實(shí)施PT樣品組成：每次5份。包括陰性、不同拷貝數(shù)的陽性樣品?？梢愿鶕?jù)實(shí)驗(yàn)室的考核目的制備考核盤。PT頻率：一年2次。PT樣品的接收與保存：要求參加PT的實(shí)驗(yàn)室收到考核樣品后，立即進(jìn)行核對、檢查，填寫HIV-1病毒載量檢測能力驗(yàn)證樣品接收專用單（附表3），3天內(nèi)傳回艾滋病/丙肝參比實(shí)驗(yàn)室。如發(fā)現(xiàn)考核樣品缺失、量不足、空管等情況，及時(shí)書面回報(bào)，艾滋病/丙肝參比實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)補(bǔ)寄或更換。收到樣品后應(yīng)及時(shí)檢測或在-70度以下保存。PT樣品的檢測：要求將考核樣品同實(shí)驗(yàn)室常規(guī)樣品一起檢測，由常規(guī)檢測人員進(jìn)行。PT結(jié)果的報(bào)告和處理：參加PT的實(shí)驗(yàn)室必須在規(guī)定的時(shí)間內(nèi)，用電子郵件或書面報(bào)告實(shí)驗(yàn)結(jié)果，并將HIV-1病毒載量實(shí)驗(yàn)結(jié)果報(bào)告單和打印的儀器原始記錄一起上報(bào)給艾滋病/丙肝參比實(shí)驗(yàn)室，艾滋病/丙肝參比實(shí)驗(yàn)室將負(fù)責(zé)結(jié)果錄入和處理。有任何原因不能按時(shí)上報(bào)者，需有單位蓋章的書面申請。評分原則將參與實(shí)驗(yàn)室反饋結(jié)果換算成對數(shù)值（Lg），再按同一種方法與同一個(gè)考核品的的所有實(shí)驗(yàn)室結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，算出平均值（M）和標(biāo)準(zhǔn)偏差（S）。成績判定：根據(jù)每個(gè)參與考核實(shí)驗(yàn)室一年兩次所有考核品的結(jié)果進(jìn)行綜合評分（每一個(gè)考核品的評判標(biāo)準(zhǔn)依照與條款），判定標(biāo)準(zhǔn)為：優(yōu)秀：所有考核品沒有問題；良好：有一個(gè)考核品滿足中的條款；合格：兩個(gè)考核品滿足中的條款④不合格：至少有三個(gè)考核品滿足中的條款或至少一個(gè)考核品出現(xiàn)中的條款。樣品結(jié)果在M+2.0S～M+3.0S內(nèi)；樣品結(jié)果在M-2.0S～M-3.0S內(nèi)；考核結(jié)果報(bào)告沒及時(shí)上報(bào)；沒按要求上報(bào)原始記錄。樣品結(jié)果超過>M+3.0S；樣品結(jié)果<M-3.0S；假陽性；假陰性；無效結(jié)果。評估結(jié)果反饋：艾滋病/丙肝參比實(shí)驗(yàn)室根據(jù)各實(shí)驗(yàn)室的兩次考核結(jié)果，及時(shí)反饋每次評估結(jié)果。每年反饋?zhàn)詈蟮脑u估結(jié)果，并發(fā)證書。抱怨和申訴：參評實(shí)驗(yàn)室如對評估結(jié)果或其它方面存有異議，可以在收到結(jié)果后10天內(nèi)向艾滋病/丙肝參比實(shí)驗(yàn)室提出異議，后者在核實(shí)情況后予以答復(fù)?，F(xiàn)場督導(dǎo)：根據(jù)考核情況的需要，艾滋病/丙肝參比實(shí)驗(yàn)室組成技術(shù)專家組對不合格實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行現(xiàn)場檢查。檢查內(nèi)容包括：實(shí)驗(yàn)原始數(shù)據(jù)、實(shí)驗(yàn)室布局、儀器運(yùn)行狀況、輔助設(shè)備校準(zhǔn)狀況、實(shí)驗(yàn)耗材質(zhì)量、樣品保存、試劑盒使用狀態(tài)、人員培訓(xùn)狀況、質(zhì)量保證和質(zhì)量控制等。給實(shí)驗(yàn)室反饋督導(dǎo)報(bào)告，現(xiàn)場實(shí)驗(yàn)室按相關(guān)建議作出整頓。第八章實(shí)驗(yàn)室生物安全相關(guān)依據(jù)《病原微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理?xiàng)l例》、《實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求》、《可感染人類的高致病性病原微生物菌（毒）種或樣品運(yùn)輸管理規(guī)定》、《人間傳染的高致病性病原微生物實(shí)驗(yàn)室和實(shí)驗(yàn)活動(dòng)生物安全審批管理辦法》和《全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范》。安全細(xì)則進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室應(yīng)穿工作服、戴口罩、戴一次性乳膠手套。嚴(yán)禁在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)食、飲水和吸煙以及使用化妝品。所有樣品包括試劑盒中的人源性成份（如陰、陽性對照）都應(yīng)在生物安全柜內(nèi)進(jìn)行處理。樣品應(yīng)盛裝在有螺旋蓋的離心管中，以防樣品濺出或產(chǎn)生交叉污染。當(dāng)具有潛在傳染性的物質(zhì)溢出時(shí)，立即用0.1%次氯酸鈉溶液或其它消毒劑處理污染區(qū)及器材；接觸過標(biāo)本的耗材應(yīng)置有專用消毒劑的容器，與一次性物品一起在丟棄前進(jìn)行高壓滅菌處理。避免試劑盒中各種有毒有害化學(xué)成分（如疊氮鈉、二甲基亞砜、異硫氰酸胍）對人體或環(huán)境可能造成的危害。8.3生物安全培訓(xùn)所有涉及HIV-1病毒載量檢測的人員都應(yīng)經(jīng)過嚴(yán)格的安全培訓(xùn)，要掌握生物安全保障的原則、措施。每個(gè)人的安全教育均應(yīng)記錄在實(shí)驗(yàn)室和人事檔案中。省級及以上疾控中心艾滋病實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)HIV/AIDS檢測生物安全培訓(xùn)及HIV-1病毒載量檢測培訓(xùn)。檢測相關(guān)人員應(yīng)主動(dòng)接受實(shí)驗(yàn)室生物安全員以及安全負(fù)責(zé)人的監(jiān)督。所有實(shí)驗(yàn)室意外事件均應(yīng)進(jìn)行記錄和報(bào)告。所有人員要保護(hù)自身和環(huán)境的安全。參照實(shí)驗(yàn)室安全指南和標(biāo)準(zhǔn)操作程序的有關(guān)規(guī)定執(zhí)行具體操作。職業(yè)暴露處理實(shí)驗(yàn)室應(yīng)建立完善的艾滋病職業(yè)暴露后的預(yù)防機(jī)制。發(fā)生職業(yè)暴露后，首先進(jìn)行應(yīng)急處理，然后根據(jù)暴露級別和暴露源頭嚴(yán)重程度，評估風(fēng)險(xiǎn)級別，并決定是否進(jìn)行預(yù)防性用藥和用藥程序，如需要時(shí)，盡早開始服用抗病毒藥物。按規(guī)定進(jìn)行職業(yè)暴露登記、檢測和報(bào)告，注意做好保密工作。

附表1常見問題分析一）EasyQ問題（出現(xiàn)錯(cuò)誤代碼）處理方法錯(cuò)誤代碼1：未檢測到信標(biāo)嚴(yán)格按標(biāo)準(zhǔn)操作步驟執(zhí)行（如樣本裂解、酶溶解要充分）錯(cuò)誤代碼2：內(nèi)標(biāo)數(shù)據(jù)與野生型數(shù)據(jù)不符由公司工程師解決軟件收集數(shù)據(jù)出錯(cuò)誤代碼3：曲線中斷使用穩(wěn)壓電壓錯(cuò)誤代碼4：無擴(kuò)增a、標(biāo)本中有嚴(yán)重的溶血、脂血和纖維蛋白或一些未知的抑制因子,渾濁標(biāo)本，檢測前離心樣品2000g，5-6分鐘。b、充分裂解樣品。c、充分溶解內(nèi)標(biāo)。d、加硅膠后，立即震蕩混合。e、清洗過程中要洗干凈裂解液或洗液，管壁上有殘留的裂解液或洗液1。g、洗脫后立即將核酸和硅膠分離。（核酸又被硅膠吸附）h、轉(zhuǎn)移核酸時(shí)避免吸入硅膠。i、充分溶解引物，立即振蕩溶解。j、充分溶解酶。放置時(shí)間要大于15分鐘。復(fù)溶時(shí)需在室溫下進(jìn)行。k、用準(zhǔn)確的微量加樣器加入足量引物。l、排除排管底部的氣泡，排管放到孵育器上時(shí)需壓緊。m、充分振蕩排管，完全混勻反應(yīng)體系液體。n、密封保存排管、離心管等耗材。o、控制環(huán)境中的抑制物污染。p、溫度需降至41℃時(shí)即將酶溶液混入反應(yīng)排管。錯(cuò)誤代碼5：弱擴(kuò)增曲線平緩，操作時(shí)溫度控制穩(wěn)定及混合充分錯(cuò)誤代碼6：計(jì)算錯(cuò)誤檢查電腦軟件錯(cuò)誤代碼7：異常擴(kuò)增正確加入核酸，保持電壓穩(wěn)定，嚴(yán)格控制引入抑制物。錯(cuò)誤代碼8：延遲時(shí)間過短加入酶后及時(shí)進(jìn)行擴(kuò)增，操作熟練。錯(cuò)誤代碼9：弱擴(kuò)增常見錯(cuò)誤，詳見代碼4。應(yīng)注意操作細(xì)節(jié)避免錯(cuò)誤發(fā)生。錯(cuò)誤代碼10：未檢測到內(nèi)標(biāo)加入內(nèi)標(biāo)，減少標(biāo)本量或者稀釋樣本

再進(jìn)行檢測。錯(cuò)誤代碼11：信息不全操作時(shí)注意事項(xiàng)參考4和9中細(xì)節(jié)避免錯(cuò)誤發(fā)生。錯(cuò)誤代碼12：延遲時(shí)間過長導(dǎo)出結(jié)果，曲線截圖，公司工程師解決。二）bDNA問題處理方法注射器含有氣泡加適量的溶液在空瓶里；管路都在各自的瓶內(nèi)液面下。分析儀底部的加熱托盤上有液體檢查管路連接。管路有堵塞或細(xì)菌滋生每次實(shí)驗(yàn)后清洗并晾干洗液瓶和水瓶，倒空廢液瓶；每周清洗洗液瓶,水瓶和廢液瓶，管路系統(tǒng)。分析儀不能從孔內(nèi)吸取足夠的液體檢查廢液管連接頭RLU值低確定按產(chǎn)品要求儲(chǔ)存、配制試劑；環(huán)境溫度在18-30℃；試劑盒沒有過期；實(shí)驗(yàn)中所使用的試劑來自同一批次；每周清洗過程中在管道和試劑瓶中沒有殘留。RLU值高確定全使用干凈的一次性無菌實(shí)驗(yàn)材料；使用防氣溶膠的加樣槍頭；殘留的底物沒有倒回原瓶；用70%乙醇定期擦洗微量加樣器；盛洗液的試劑瓶內(nèi)有足夠量的洗液；檢查分液、吸液操作；每周進(jìn)行保養(yǎng)；分析倉門關(guān)閉嚴(yán)實(shí)；檢查背景RLU值。變異系數(shù)(CV)高確定微量加樣器經(jīng)校準(zhǔn)；使用防氣溶膠的槍頭；槍頭緊密套在加樣器上；加試劑時(shí)槍頭位置在孔的中部；樣品凝塊或殘?jiān)鼪]有被吸取；樣品加的位置與樣品ID和DMS規(guī)定的位置一致；樣品按產(chǎn)品說明收集,處理和儲(chǔ)存；只使用干凈的一次性無菌實(shí)驗(yàn)材料；檢查分液吸液操作；盛洗液的試劑瓶內(nèi)已裝有足夠量的洗液；每種試劑在實(shí)驗(yàn)開始前被輕輕混勻；每種試劑預(yù)熱充分,以防有沉淀；封閉墊組裝正確；孔內(nèi)樣液沒有濺灑；分析倉門關(guān)閉嚴(yán)實(shí)；檢查RLU背景。標(biāo)準(zhǔn)曲線平坦或不正常加標(biāo)準(zhǔn)時(shí)板的缺口在左邊強(qiáng)或弱對照定量高確定各孔仔細(xì)加樣,未觸及鄰孔；使用無菌槍頭；封閉墊組裝無誤；加樣器定期校準(zhǔn)；使用防氣溶膠的槍頭；標(biāo)準(zhǔn)和對照加樣位置正確；按產(chǎn)品說明要求儲(chǔ)存,配制。強(qiáng)或弱對照定量低確定試劑盒在運(yùn)輸和到貨后儲(chǔ)存在正確的溫度；使用無菌槍頭；沒有吸取氣泡；封閉墊組裝無誤；加樣器經(jīng)校準(zhǔn)；小心處理測試板,防止濺灑；標(biāo)準(zhǔn)和對

照加樣位置正確；按產(chǎn)品說明要求儲(chǔ)存,配制；樣品,標(biāo)準(zhǔn),對照在吸取前至少震蕩5秒。打液不均勻排液殘余量過多WA檢查抽洗軸頭是否堵塞，如果有堵塞，卸下后用注射器疏通。背景光路值大于或等于0.05IRL檢查用于進(jìn)行背景檢查的白色間隔反應(yīng)孔是否被污，檢查光路讀數(shù)頭是否有破損漏光現(xiàn)象實(shí)驗(yàn)過程中一孔或者幾個(gè)孔出現(xiàn)WA2435或者WA2437報(bào)警，但儀器沒有停機(jī)，出現(xiàn)報(bào)警的孔沒有實(shí)驗(yàn)結(jié)果。檢查實(shí)驗(yàn)用水和次氯酸鈉是否達(dá)標(biāo)，水是否有污染，管路是否有堵塞或者漏氣現(xiàn)象，反復(fù)清洗管路。檢查抽洗軸頭是否堵塞。儀器底部洗站周圍出現(xiàn)水跡或者有明顯漏水檢查蠕動(dòng)泵管是否有破裂或者安裝錯(cuò)誤，檢查洗站和排液管連接是否有裂縫。實(shí)驗(yàn)過程中出現(xiàn)CL開頭的錯(cuò)誤代碼檢查板架四角磁鐵是否有脫落現(xiàn)象，用AB膠粘好。實(shí)驗(yàn)完成后打開艙門，發(fā)現(xiàn)試劑倉中部有明顯積水查看房間濕度是否低于60%，開除濕機(jī)除濕。打開儀器艙門，在儀器艙內(nèi)部放少量固體干燥劑三）Taqman問題處理方法設(shè)備出現(xiàn)未預(yù)料的資源錯(cuò)誤重新啟動(dòng)設(shè)備和AMPLILINK軟件AMPLILINK軟件出現(xiàn)數(shù)據(jù)庫錯(cuò)誤重新啟動(dòng)AMPLILINK軟件熱循環(huán)區(qū)域出現(xiàn)：TC溫度同步化；TC蓋同步化重新啟動(dòng)設(shè)備條碼掃描機(jī)出現(xiàn)資源cmd為掃描機(jī)硬件錯(cuò)誤，重新啟動(dòng)設(shè)備條碼閱讀機(jī)出現(xiàn)條碼不可讀條碼松則采取條碼復(fù)位；條碼損壞則重新載入或生成新的序列/ID樣本量不準(zhǔn)確樣本量不足0.970ml或超過1.030ml均不可檢測

附表2HIV-1病毒載量檢測樣品送檢/接收單送檢單位送樣人送檢日期采樣時(shí)間采樣管抗凝劑運(yùn)輸保溫方式姓名性別年齡現(xiàn)住址戶籍所在地是否治療是治療號：否樣品編號樣品性質(zhì)樣品量（ml）備注接收單位接收人接收日期

附表3HIV-1病毒載量檢測能力驗(yàn)證樣品接收專用單實(shí)驗(yàn)室名稱接收日期收到考核品量編號體積（ul）考核品狀態(tài)外包裝是否完整是否冰塊是否融化是否樣品是否融