TFDSA 0049 2024 人源間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體制備與檢驗(yàn)規(guī)范

準(zhǔn)I Ⅲ 1 1 1 1 2 2 2 2 3 37.2數(shù)量、粒徑、濃度 37.3標(biāo)志蛋白 37.4蛋白含量 37.5顆粒蛋白比 37.6微生物 3 4 48.2放行檢驗(yàn) 4 48.4復(fù)核檢驗(yàn) 48.5判定規(guī)則 4 49.1包裝 49.2標(biāo)簽 49.3儲存 59.4運(yùn)輸 5 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14醫(yī)藥科技股份有限公司、青島市婦女兒童醫(yī)院、中科細(xì)胞工程（蘇州）有限公司、時(shí)力生物1人源間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體制備與檢驗(yàn)規(guī)范GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)WS293艾滋病和艾滋病病毒感染診斷標(biāo)準(zhǔn)T/CSCB0001-2020干細(xì)胞T/CSCB0003-2020人間充3.1干細(xì)胞stemcell3.2人源間充質(zhì)干細(xì)胞humanmesenchymalstemcell3.3外泌體exosome4縮略語HCMV——人巨細(xì)胞病毒（HumanCytomegaloviruHCV——丙型肝炎病毒（HepatitisCViruHEBV——人類皰疹病毒（HumanEpstein-BarrVHIV——人類免疫缺陷病毒（HumanImmunodeficiencyVirus）2HMSC——人源間充質(zhì)干細(xì)胞（humanMesenchymalStemCell）HTLV——人類嗜T細(xì)胞病毒（HumanT-lymphotropicVirus）TP——梅毒螺旋體（TreponemaPallidGMP——藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范（GoodManufacturingPracticeofMedicalProduc外泌體的制備應(yīng)符合《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》中的要求，在GMP標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行，對所涉及的6.2關(guān)鍵質(zhì)量屬性Calnexin、histone3以及GM130任意兩個(gè)真菌、細(xì)菌、支原體、HIV、HBV、HCV、HTLV、EBV、HCMV、TP、外源病37.1形態(tài)7.2數(shù)量、粒徑、濃度按照納米流式檢測法、納米顆粒跟蹤分析儀或納米庫爾特粒度儀7.3標(biāo)志蛋白7.4蛋白含量7.5顆粒蛋白比按照外泌體顆粒數(shù)濃度（particles/mL）與蛋白含量(μg/mL）的比值進(jìn)行計(jì)算。7.6微生物按照《艾滋病和艾滋病病毒感染診斷》（WS293-2019按照《丙型病毒性肝炎診斷標(biāo)準(zhǔn)》（WS213-2008）核酸4按照《梅毒診斷標(biāo)準(zhǔn)》（WS273-200按照《中華人民共和國藥典》通則“1143細(xì)菌內(nèi)毒素檢查8.2放行檢驗(yàn)8.3留樣8.4復(fù)核檢驗(yàn)8.5判定規(guī)則9包裝、儲存和運(yùn)輸9.1.1直接與產(chǎn)品接觸的包裝材料，應(yīng)選擇低吸附、對外泌體關(guān)鍵質(zhì)量9.2標(biāo)簽5）；9.3儲存外泌體應(yīng)在低于-80℃環(huán)境下儲存，應(yīng)避免反復(fù)凍9.4運(yùn)輸61234567B.3.5使用配備數(shù)碼相機(jī)和圖像分析軟件的120kv冷凍電鏡進(jìn)8C.3.2使用200nm聚苯乙烯（PS）微球進(jìn)行儀器校準(zhǔn)，將儀器調(diào)整到最佳狀C.3.5將過濾的（0.22μm）PBS作為背景信號進(jìn)行分使用NFProfession軟件計(jì)算待測9D.2.2200nm聚苯乙烯（PS）微球、納米流式儀S16M-Exo粒徑D.3.2使用200nm聚苯乙烯（PS）微球進(jìn)行儀器校準(zhǔn)，將儀器調(diào)整到最D.3.5將過濾的（0.22μm）PBS作為背景信號進(jìn)行分析，顆粒數(shù)計(jì)數(shù)小于200的PBS才能作為空白對照使用NFProfession軟件計(jì)算待測外泌體數(shù)量及粒徑檢測（電阻感應(yīng)脈沖檢測法庫爾特F.3.2用磷酸鹽緩沖液將濃度標(biāo)準(zhǔn)品稀釋1000倍，按照儀器測試操作指南進(jìn)行測試，采集標(biāo)準(zhǔn)微球顆軟件上記錄樣本最終的稀釋倍數(shù)，軟件自動(dòng)計(jì)算得到樣本的原始粒徑和通過軟件Nanocoulter可以保存外泌體樣本的測試報(bào)G.3.2.1按照蛋白定量試劑盒說明書配置B酶標(biāo)儀測定562nm處標(biāo)準(zhǔn)品及待測樣品的OD值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出待測樣品蛋H.3.5孵育一抗：封閉結(jié)束后，用1×TBST漂洗PVDF膜。使用1%BSA對一抗進(jìn)行1:1000稀釋，將PVDF[1]Minimalinformationforstudiesofextracellularvesicles2018(MISEV2018):apositioftheInternationalSocietyforExtracellularVesiclesa