癢病組織病理學檢查方法

的載玻片放到烘干臺(50℃)上，烘干(30min)。也可在37℃溫箱中過夜干燥。干燥后的組織切片在室溫下保存，待檢。4.4伊紅-蘇木素溶液(H.E)染色步驟4.4.3二甲苯：無水乙醇(1:1)溶液；2min~5min。4.4.695%乙醉：2min~5min。4.4.780%乙醇：2min~5min。4.4.870%乙醇：2min~5min。4.4.10蘇木素染色液13min(可根據(jù)染液放置時間調(diào)整)。4.4.12鹽酸乙醇：3s~10s(根據(jù)染色的深度進行調(diào)整)。4.4.1570%乙醇：2min。4.4.1680%乙醇；2min。4.4.17伊紅乙醇染液；1min~2min。4.4.1895%乙醇：2mim。4.4.21無水乙醇1二甲苯(1:1)溶液：2min。4.5免疫組織化學(IHC)染色步驟4.5.1將被檢切片放人自動染色機上脫蠟(二甲苯10min、二甲苯10min)、脫二甲苯[二甲蘋：無水乙醇(1:1)溶液3min、無水乙醇3min,無水乙醇3min,95%乙醇3min,80%乙醇3min,70%乙醇4.5.2將組織切片移至二級水中，在微波爐中加熱煮沸20min。加熱時，要保證切片一直浸在水中。加熱后，在空氣中自然冷卻2min?；虬亚衅腩A熱至37℃并含有蛋白牌K的緩沖液(5μR/mL)中并消化15min,4.5.3PBS洗5min。4.5.4將切片放入含1%過氧化氫的甲醇溶液中，10min。4.5.6切片上滴加含0.1%胰酶的緩沖液，濕盒中室溫作用15min~20min。4.5.7自來水洗1min,再用PBS洗兩次，每次5min。4.5.8在切片上滴加1%正常馬血清，濕盒中反應20min。4.5.9用紙巾蘸掉馬血清。4.5.10切片上滴加第一抗體(FH11,終濃度稀釋至5μg/mL),在相同的另一張切片上滴加正常鼠血清或PBS,濕盒中作用37℃作用2h或4℃過夜。4.5.11PBS洗三次，每次5min。4.5.12切片上滴加標記有生物素的抗鼠血清(第二抗體),濕盒中室溫作用1h。4.5.13PBS洗三次，每次5min。4.5.14切片上滴加親和素標記的鏈霉卵白素，濕盒中室溫作用30min。4.5.15PBS洗5min。4.5.16滴加AEC顯色劑，室溫作用15min~20min。4.5.17PBS洗5min,再用自來水洗1min。4.5.18蘇木素染色液復染2min。4.5,19自來水洗至不掉色。4.5.20甘油乙婦乙醇水溶液封片。4.5.21光學顯微鏡下觀察。5結(jié)果判定5.1蘇木素-伊紅染色感染癢病的羊腦組織在光學顯微鏡下的病理變化是以中樞神經(jīng)系統(tǒng)海綿狀變化和較廣泛的星形膠質(zhì)細胞肥大及增生為特征。病變是非炎性的，呈兩側(cè)對稱分布，5.2兔疫組織化學感染癢病的羊腦組織在光鏡下可見紅褐色的PrP*(癢病異常PrP蛋白)陽性反應物。5(規(guī)范性附錄)試劑的配制A.1蘇木素染色液乙液：3g甲明礬+100mL.二級水混合甲液和乙液，再加人10mL冰乙酸，14d后再用。A.2伊紅染色液0.5g~1g伊紅(醇溶)+100mL95%乙醇。A.3胰酶溶液稱取8.94gTris-HC1,0.3g胰腳，溶解在300mL二級水中。A.4蛋白酶K溶液TrisHCl(1mol/L,pH8,0)2,5mL,氧化鈣(CaCl)(0.1mol/