肝細(xì)胞癌生物標(biāo)志物檢測(cè)及應(yīng)用專家共識(shí)

2/2肝細(xì)胞癌生物標(biāo)志物檢測(cè)及應(yīng)用專家共識(shí)原發(fā)性肝癌(PLC)是目前我國(guó)第4位常見惡性腫瘤及第2位腫瘤致死病因,嚴(yán)重威脅人類健康。PLC的病理類型主要包括肝細(xì)胞癌(HCC)、肝內(nèi)膽管癌(ICC)和混合型肝癌(HCC-ICC),其中HCC占85%~90%。目前已知的HCC主要病因包括乙型肝炎病毒(HBV)感染、丙型肝炎病毒(HCV)感染、飲酒、非酒精性脂肪肝(NAFLD)、黃曲霉毒素、藍(lán)藻毒素等。不同于日本、歐美地區(qū)國(guó)家HCC的致病因素,我國(guó)HBV感染是HCC最主要的原因,約85%HCC是由HBV感染引起。隨著診療技術(shù)水平的提高,HCC防治工作取得長(zhǎng)足進(jìn)步,但由于HCC起病隱匿、進(jìn)展迅速,大多數(shù)病例確診時(shí)已處于中晚期,因此,HCC早期篩查和診斷成為關(guān)鍵。為了提高HCC生物標(biāo)志物臨床應(yīng)用的科學(xué)性、合理性和可操作性,最大限度發(fā)揮其效能,受中華醫(yī)學(xué)會(huì)檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)分會(huì)委托,由分子診斷學(xué)組牽頭,征求HCC臨床和基礎(chǔ)研究領(lǐng)域?qū)＜乙庖?多學(xué)科參與形成本共識(shí)。后續(xù)將根據(jù)相關(guān)領(lǐng)域的研究進(jìn)展,適時(shí)修訂,以適應(yīng)臨床應(yīng)用的需求。1、常用血清學(xué)標(biāo)志物目前,臨床上常用于檢測(cè)和輔助診斷HCC

的血清學(xué)標(biāo)志物有甲胎蛋白(AFP)、甲胎蛋白異質(zhì)體(AFP-L3)、異常凝血酶原(DCP)等,其中AFP

是HCC輔助診斷和療效監(jiān)測(cè)中最常用的標(biāo)志物。1.1

AFPAFP是最早用來輔助診斷HCC的血清學(xué)指標(biāo),也是主要由胚胎肝臟、卵巢產(chǎn)生和分泌的一種胚胎特異性糖類蛋白,參與分子轉(zhuǎn)運(yùn)過程。妊娠期婦女血清AFP水平明顯升高,但健康成人血清AFP水平極低。血清AFP≥400ng/mL超過1個(gè)月,排除妊娠、慢性或活動(dòng)性肝病、生殖腺胚胎源性腫瘤及其他消化道腫瘤后,高度提示HCC,聯(lián)合影像學(xué)檢查,對(duì)HCC有較好的診斷價(jià)值。AFP水平輕度升高患者,應(yīng)進(jìn)行動(dòng)態(tài)察;AFP陰性患者,需借助其他血清學(xué)標(biāo)志物、影像學(xué)檢查或穿刺活檢等手段明確診斷。目前檢測(cè)AFP的常用方法包括電化學(xué)發(fā)光法和化學(xué)發(fā)光法等。1.2

AFP-L3根據(jù)AFP與小扁豆凝集素的結(jié)合程度,從高到低將AFP分為3個(gè)亞型:AFP-L1、AFPL2、AFP-L3。AFP-L1主要見于良性肝臟疾病;AFPL2主要來源于卵黃囊,多見于孕婦;AFP-L3主要是由肝癌細(xì)胞產(chǎn)生,其與腫瘤組織的大小、分化、惡性程度密切相關(guān),特異度高于AFP。當(dāng)AFP-L3

比率(AFP-L3%)臨界值達(dá)10%

時(shí),診斷最大徑<5cmHCC

的靈敏度為22.0%~33.0%,特異度為93.0%~94.0%;對(duì)于AFP

陰性(<20ng/mL)HCC患者,AFP-L3%

的診斷靈敏度為12.0%~21.0%,特異度為97.0%~98.0%,隨著AFP-L3檢測(cè)方法學(xué)靈敏度的高,AFP-L3輔助診斷HCC的靈敏度和特異度可能會(huì)進(jìn)一步提升。血清高水平AFP-L3%與腫瘤增殖快、侵襲性高和預(yù)后不良明顯相關(guān)。在慢性乙型肝炎患者及肝硬化高危人群中,AFP-L3%檢測(cè)與影像學(xué)檢查相比,可提前預(yù)警患者是否存在HCC。在HCC根治術(shù)后,若AFP-L3%降低不明顯,提示存在轉(zhuǎn)移灶或殘余癌,因此,AFPL3%檢測(cè)可作為HCC

復(fù)發(fā)及預(yù)后判斷指標(biāo)。目前,AFP-L3的檢測(cè)方法包括親和吸附離心法、磁微粒化學(xué)發(fā)光免疫分析法、微流控免疫熒光法等。親和吸附離心法的優(yōu)點(diǎn)是不需要特殊設(shè)備,可依托實(shí)驗(yàn)室定量檢測(cè)AFP的設(shè)備完成檢測(cè),缺點(diǎn)是需要手工操作、步驟多、耗時(shí)長(zhǎng),結(jié)果重復(fù)性欠佳。磁微粒化學(xué)發(fā)光免疫分析法及微流控免疫熒光法可實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化檢測(cè),結(jié)果更穩(wěn)定。隨著方法學(xué)的不斷進(jìn)步,建議有條件的實(shí)驗(yàn)室在采用不同方法學(xué)時(shí)可依據(jù)臨床自建臨界值。1.3

DCPDCP又稱維生素K

缺乏或拮抗劑-Ⅱ誘導(dǎo)的蛋白質(zhì)(PIVKA-Ⅱ),是凝血酶原的一種異常形式,其相關(guān)檢測(cè)產(chǎn)品在國(guó)家藥品監(jiān)督管理局(NMPA)的注冊(cè)名稱為PIVKAⅡ。在肝細(xì)胞癌變過程中,由于維生素K缺乏引起凝血酶原前體羧化不全,從而產(chǎn)生大量異常凝血酶原。在HCC患者中,血清DCP水平與HCC腫瘤大小、分化程度、微血管侵犯和腫瘤復(fù)發(fā)高度相關(guān),可單獨(dú)作為早期篩查和預(yù)后評(píng)估的標(biāo)志物。當(dāng)DCP≥40mAU/mL

時(shí),其診斷靈敏度為74.0%,特異度為86.0%,但需要對(duì)維生素K

缺乏引起的相關(guān)疾病,以及使用藥物(抗血栓藥物華法林、頭孢菌素類抗菌藥物等)治療導(dǎo)致DCP水平異常升高的情況進(jìn)行鑒別診斷。在鑒別肝硬化、慢性肝炎和HCC能力方面,DCP

診斷靈敏度和特異度均優(yōu)于AFP。研究發(fā)現(xiàn),DCP和AFP作為兩個(gè)獨(dú)立的生物標(biāo)志物,二者對(duì)HCC

診斷具有互補(bǔ)作用,AFP+AFP-L3%和AFP+AFP-L3%+DCP聯(lián)合檢測(cè)診斷HCC的靈敏度分別為79.0%和83.0%,特異度分別為87.0%和75.0%。目前國(guó)內(nèi)DCP檢測(cè)方法主要包括酶聯(lián)免疫化學(xué)發(fā)光法、微粒子化學(xué)發(fā)光法、微流控免疫熒光法。1.4

GALAD

評(píng)分

GALAD

評(píng)分系統(tǒng)主要是基于HCC常用血清學(xué)標(biāo)志物AFP、AFP-L3、DCP水平等構(gòu)建的數(shù)學(xué)模型,可提高早期HCC的檢出率,包括性別、年齡、AFP-L3、AFP和DCP5個(gè)指標(biāo)。評(píng)分公式為GALAD=-10.08+0.09×年齡+1.67×性別+2.34×log10(AFP)+0.04×AFP-L3+1.33×log10(DCP)。公式中男性設(shè)為1;女性設(shè)為0。當(dāng)GALAD評(píng)分臨界值定為-0.63時(shí),診斷HCC

的靈敏度為68.0%,特異度為95.0%。由于該評(píng)分系統(tǒng)基于國(guó)際隊(duì)列研究,非病毒性感染是早期HCC的主要致病因素,在我國(guó)并未得到驗(yàn)證。目前國(guó)內(nèi)已建立基于病毒感染相關(guān)HCC為主的中國(guó)GALAD(C-GALAD)評(píng)分系統(tǒng),靈敏度和特異度有望進(jìn)一步提高。專家推薦意見:(1)對(duì)于慢性HBV、HCV感染等原因?qū)е碌母斡不菻CC高?；颊?尤其AFP陰性患者,建議AFP、AFP-L3%和DCP

聯(lián)合檢測(cè),同時(shí)結(jié)合肝臟超聲檢查結(jié)果,以進(jìn)一步提高HCC早期篩查檢出率。(2)對(duì)于AFP水平輕度升高者,除動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)AFP水平變化外,建議聯(lián)合檢測(cè)AFP-L3%、DCP,結(jié)合肝臟炎癥狀況以提高HCC鑒別診斷準(zhǔn)確率。(3)對(duì)于HCC術(shù)后患者,尤其AFP、AFP-L3%、DCP水平升高者,建議定期檢測(cè)AFP、AFP-L3%和DCP作為療效監(jiān)測(cè)、預(yù)后及復(fù)發(fā)判斷的標(biāo)志物。(4)GALAD評(píng)分系統(tǒng)有助于早期HCC篩查和診斷,臨床價(jià)值仍需大規(guī)模隊(duì)列研究進(jìn)一步驗(yàn)證。(5)建議實(shí)驗(yàn)室采用磁微粒化學(xué)發(fā)光免疫分析法及微流控免疫熒光法檢測(cè)AFP-L3%;酶聯(lián)免疫化學(xué)發(fā)光法和微粒子化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)DCP,檢測(cè)系統(tǒng)應(yīng)用前需進(jìn)行性能評(píng)估。在對(duì)患者進(jìn)行監(jiān)測(cè)和隨訪時(shí),建議使用同種定量檢測(cè)方法進(jìn)行檢測(cè),以避免不同檢測(cè)方法學(xué)間引起的差異。2

其他血清學(xué)標(biāo)志物2.1

磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(GPC-3)GPC-3是一種可調(diào)控細(xì)胞增殖、分化、遷移和黏附的蛋白多糖,與惡性腫瘤代謝密切相關(guān)。GPC-3在正常或良性肝病組織中不表達(dá)或表達(dá)極低,而在HCC組織中呈現(xiàn)高表達(dá),且其表達(dá)水平與HCC分化程度呈正相關(guān),是輔助診斷HCC的一種特異性相關(guān)抗原。在慢性病毒性肝炎導(dǎo)致的HCC患者血清中,GPC-3診斷HCC的靈敏度為47.0%,特異度為93.5%。因此,GPC-3在鑒別肝臟良、惡性病變中有一定價(jià)值,可作為HCC組織學(xué)標(biāo)志物,但其作為明確的HCC外周血鑒別診斷標(biāo)志物仍需進(jìn)一步證實(shí)。2.2

α-L-巖藻糖苷酶(AFU)AFU

是一種溶酶體水解酶,主要存在于哺乳動(dòng)物肝、腎等組織,參與多種生物活性物質(zhì)的分解代謝。HCC

患者血清中AFU水平明顯高于健康人群和肝硬化患者,其診斷HCC的靈敏度為60.0%~90.0%,特異度為55.0%~98.0%,對(duì)AFP陰性病例及小細(xì)胞HCC有輔助診斷價(jià)值,且可作為HCC

術(shù)后復(fù)發(fā)和療效監(jiān)測(cè)的指標(biāo)。2.3

γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶同工酶Ⅱ(GGT-Ⅱ)GGT

是一種在人體中廣泛分布的質(zhì)膜結(jié)合糖蛋白,主要有Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型3種同工酶。其中GGT-Ⅱ在HCC細(xì)胞中表達(dá)明顯升高,但在肝內(nèi)外膽道阻塞及其他肝病中均有較高表達(dá),假陽(yáng)性較高。2.4

骨橋蛋白(OPN)OPN是一種分泌型糖蛋白,在多種腫瘤中高表達(dá),具有促進(jìn)細(xì)胞趨化、黏附和遷移等作用,對(duì)AFP陰性的HCC具有輔助診斷價(jià)值。2.5

Dickkopf1蛋白(DKK1)DKK1是一種高度保守的分泌型糖蛋白,是腫瘤信號(hào)通路中重要的調(diào)節(jié)蛋白,主要通過Wnt/β-catenin信號(hào)通路調(diào)控腫瘤增殖和凋亡,在HCC中表達(dá)水平明顯上調(diào)[22]。DKK1作為HCC診斷標(biāo)志物的臨床價(jià)值尚需進(jìn)一步研究證實(shí)。其他如高爾基體蛋白73(GP73),為高爾基體跨膜蛋白,病毒感染時(shí)其表達(dá)上調(diào),在正常肝組織中幾乎不表達(dá)或低表達(dá),曾認(rèn)為其與HCC發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān),目前認(rèn)為GP73主要是診斷肝硬化的標(biāo)志物,而肝硬化與HCC的鑒別是臨床的關(guān)注點(diǎn),因此不建議將其作為HCC標(biāo)志物。專家推薦意見:(1)建議將GPC-3、AFU

結(jié)合影像學(xué)檢查作為HCC診斷的輔助指標(biāo),AFU

可用于HCC

患者復(fù)發(fā)及療效判斷的輔助監(jiān)測(cè)指標(biāo)。(2)由于GGT-Ⅱ、OPN

及DKK1作為HCC

診斷標(biāo)志物尚缺乏足夠的理論和實(shí)踐支撐,目前認(rèn)為僅可用作HCC診斷的參考指標(biāo)。(3)上述血清學(xué)標(biāo)志物不可用作單獨(dú)證據(jù)進(jìn)行HCC的篩查、診斷、預(yù)后判斷及療效監(jiān)測(cè)。(4)以上血清學(xué)標(biāo)志物檢測(cè)尚未建立國(guó)際公認(rèn)的參考方法和(或)可實(shí)現(xiàn)量值溯源的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),不同檢測(cè)系統(tǒng)的檢測(cè)結(jié)果尚不具有可比性,臨床應(yīng)用時(shí)需關(guān)注不同來源檢測(cè)結(jié)果之間的差異。3

新型生物標(biāo)志物3.1

循環(huán)游離微小核糖核酸(miRNA)miRNA

是一類由21~25個(gè)核苷酸構(gòu)成的非編碼小分子RNA,能夠通過阻斷靶基因表達(dá)調(diào)控細(xì)胞增殖、分化等多種生理病理過程,在HCC發(fā)生、發(fā)展中具有重要作用。多中心臨床研究結(jié)果表明,循環(huán)游離miRNA

在HCC早期階段(癌前或極低腫瘤負(fù)荷狀態(tài))即表現(xiàn)出異常,檢測(cè)循環(huán)游離miRNA

組合對(duì)于輔助HCC早期診斷具有較高價(jià)值?；?種血漿miRNA(miR-122、miR-192、miR-21、miR-223、miR-26a、miR-27a和miR-801)的HCC診斷模型對(duì)早期HCC的診斷靈敏度為86.1%,明顯優(yōu)于AFP,特異度為76.8%;對(duì)AFP<400ng/mL的HCC診斷靈敏度為77.7%,特異度為84.5%。3.2

循環(huán)腫瘤細(xì)胞(CTC)CTC是由原發(fā)實(shí)體腫瘤脫落轉(zhuǎn)移至循環(huán)系統(tǒng)的腫瘤細(xì)胞,在腫瘤轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮至關(guān)重要的作用,可作為HCC預(yù)后預(yù)測(cè)和療效評(píng)價(jià)的有效指標(biāo)。研究發(fā)現(xiàn),外周血CTC

數(shù)目是HCC患者術(shù)后復(fù)發(fā)的獨(dú)立危險(xiǎn)因素,術(shù)后早期轉(zhuǎn)移HCC患者CTC檢出率達(dá)90.5%。CTC數(shù)量和陽(yáng)性率伴隨TNM

分期的進(jìn)展不斷增加,對(duì)HCC進(jìn)展具有預(yù)測(cè)作用。3.3

循環(huán)腫瘤DNA(ctDNA)ctDNA

是由腫瘤細(xì)胞凋亡或壞死而釋放到外周血的特異性突變DNA

片段,攜帶原位腫瘤基因組信息。研究結(jié)果表明,ctDNA對(duì)HCC

早期診斷具有較好的臨床應(yīng)用價(jià)值,診斷靈敏度和特異度均高于血清AFP。ctDNA

甲基化、5-hmc羥甲基化等表觀遺傳修飾,也可用于HCC早期診斷和預(yù)后預(yù)測(cè)。3.4

外泌體外泌體是一種由細(xì)胞內(nèi)多囊泡體與細(xì)胞膜融合后釋放到細(xì)胞外基質(zhì)的直徑為30~150nm的膜性囊泡,通過直接融合、胞吞等方式參與細(xì)胞間信息交流,進(jìn)而調(diào)控腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移和耐藥等過程。近年研究結(jié)果顯示,腫瘤細(xì)胞外泌體包裹的蛋白質(zhì)、核酸(miRNA、lncRNA

等)、脂類等生物活性組分,能夠直接反映腫瘤的惡性生物學(xué)特性,可以作為HCC診斷、判斷復(fù)發(fā)和預(yù)后預(yù)測(cè)的生物標(biāo)志物。專家推薦意見:(1)循環(huán)游離miRNA

組合可以作為HCC

的輔助診斷或篩查指標(biāo),尤其是對(duì)血清AFP陰性人群。(2)CTC、ctDNA

和外泌體等作為診斷HCC

的血清學(xué)標(biāo)志物尚缺乏大規(guī)模、多中心、前瞻性臨床試驗(yàn)結(jié)果,且缺乏組織和腫瘤特異性特征,建議可作為HCC患者診斷、治療監(jiān)測(cè)和預(yù)后預(yù)測(cè)的參考指標(biāo)。(3)以上血清學(xué)標(biāo)志物檢測(cè)成本較高,影響因素尚不明確,缺乏國(guó)際公認(rèn)的參考方法,臨床應(yīng)用時(shí)需關(guān)注不同檢測(cè)系統(tǒng)導(dǎo)致的結(jié)果差異。4

小結(jié)HCC的發(fā)生、發(fā)展是一個(gè)錯(cuò)綜復(fù)雜的過程,實(shí)現(xiàn)HCC的早診斷、早治療、有效防治和精準(zhǔn)診療意義重