實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的微生物學(xué)控制課件

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的微生物學(xué)控制

普通動(dòng)物在開放環(huán)境中飼養(yǎng)，都會(huì)受到自然界微生物、病毒和寄生蟲的侵襲，一般都帶有細(xì)菌、病毒和寄生蟲，并感染某些疾病，因此用普通動(dòng)物做實(shí)驗(yàn)，敏感性差，反應(yīng)性不一致，實(shí)驗(yàn)結(jié)果不易重復(fù)。要提高試驗(yàn)的準(zhǔn)確性，必須對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物加以微生物學(xué)、寄生蟲學(xué)和遺傳學(xué)控制，培育出合格的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，使實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確可靠。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的微生物學(xué)控制

國際分類法將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分為普通動(dòng)物、SPF動(dòng)物、悉生動(dòng)物、無菌動(dòng)物4個(gè)等級(jí)，見表3—1。不同微生物級(jí)別的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在生物醫(yī)學(xué)研究中的應(yīng)用價(jià)值有明顯的不同，見表3—2。使用無菌動(dòng)物、悉生動(dòng)物及SPF動(dòng)物和清潔級(jí)動(dòng)物，由于有明確的微生物背景和可控的飼育環(huán)境，可大大提高動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性和準(zhǔn)確性。因此，在高標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)室應(yīng)選用微生物學(xué)和寄生蟲學(xué)質(zhì)量控制較好的無菌動(dòng)物、悉生動(dòng)物或無特定病原體動(dòng)物做實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的微生物學(xué)控制實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的微生物學(xué)控制實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的微生物學(xué)控制第—節(jié)無菌動(dòng)物無菌動(dòng)物的概念無菌動(dòng)物(germfree)是指無可檢出的—切生命體的動(dòng)物。進(jìn)一步說是指用現(xiàn)有的檢測技術(shù)在動(dòng)物體內(nèi)外的仟何部位均檢不出任何活的微生物和寄生蟲的動(dòng)物。此種動(dòng)物在自然界中并不存在，必須用人為的方法培育出來。無菌動(dòng)物來源剖腹產(chǎn)或無菌卵的孵化、一般將臨產(chǎn)前的健康動(dòng)物用麻醉藥品或頸椎脫白法處死后．立即浸泡在37℃滅菌液中，送進(jìn)無菌室(或無菌隔離器)，按無菌手術(shù)進(jìn)行剖腹，切除帶胚胎的子宮(產(chǎn)宮內(nèi)首先應(yīng)無菌)，將其浸入消毒液里并輸送到另一隔離器中，切開子宮取胎，經(jīng)用滅菌紗布措拭仔體并斷臍后，放隔離器內(nèi)人工喂乳或用其他品系的無菌母鼠做保姆供養(yǎng)。像小鼠和大鼠等用人工喂乳非常麻煩。故采用保姆代養(yǎng)較為方便。而像豚鼠因在一定程度上能自力飲乳，故人工哺乳較容易。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的微生物學(xué)控制

另外，像禽類、魚類、昆蟲類，因是在卵中無菌的前提下進(jìn)行的，放用藥物將卵周圍滅菌后移人無菌隔離器內(nèi)使其孵化即可，而且這些動(dòng)物—般在出生后能自力采食、故較易育成。無菌動(dòng)物飼育在無菌隔離器中，經(jīng)定期檢查，證明動(dòng)物體內(nèi)外均無一切微生物和寄生蟲。實(shí)際所謂“無菌”只是一個(gè)相對(duì)的概念，根據(jù)現(xiàn)有的科學(xué)知識(shí)和檢測方法在定時(shí)期內(nèi)不能檢出微生物和寄生蟲，隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，現(xiàn)在認(rèn)為是無菌的動(dòng)物或許將來可以檢出微生物和寄生蟲，而不是無菌動(dòng)物。因此，這個(gè)“無”是相對(duì)而言的。另外，用大量抗生素也可以使普通動(dòng)物暫時(shí)無菌，但這種動(dòng)物不是無菌功物。因?yàn)檫@種無菌狀態(tài)往往是一時(shí)性的，某些殘留的細(xì)菌在適當(dāng)?shù)臈l件下又會(huì)在體內(nèi)增殖，即使把體內(nèi)細(xì)菌全部殺死，它們給動(dòng)物造成的影響卻是無法消除的。例如，特異性抗體的存在、網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的活化、某些組織成器官的病理變化等。因此，無菌動(dòng)物必須是生來就是無菌的動(dòng)物。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的微生物學(xué)控制二、無菌動(dòng)物的發(fā)展概況實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的微生物學(xué)控制實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的微生物學(xué)控制三、無菌動(dòng)物的特點(diǎn)（一)形態(tài)學(xué)的改變1．消化系統(tǒng)無菌動(dòng)物和普通動(dòng)物的外觀和活動(dòng)無差異。無菌動(dòng)物的盲腸(包含內(nèi)容物)的總重量可達(dá)到體重的25％，盲腸的總重量是普通動(dòng)物的5—10倍。去掉內(nèi)容物后的盲腸，無菌動(dòng)物和普通動(dòng)物之間并沒有多大差別。這是無菌動(dòng)物盲腸壁伸長變薄的結(jié)果。這一現(xiàn)象也從組織學(xué)方面得到證實(shí)。腸蠕動(dòng)緩慢，食物通過腸道時(shí)間長。2．血液循環(huán)系統(tǒng)心臟相對(duì)變小，白細(xì)胞數(shù)少，且數(shù)量波動(dòng)范圍小。3．免疫系統(tǒng)胸腺和淋巴結(jié)處于功能較不活躍的狀態(tài)，脾臟縮小，無二級(jí)濾泡，網(wǎng)狀內(nèi)皮細(xì)胞功能下降。無菌動(dòng)物的免疫功能基本上處于原始狀態(tài)。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的微生物學(xué)控制（二)生理學(xué)改變

1．壽命：無菌動(dòng)物的壽命比普通動(dòng)物長。普通大鼠壽命2年，而無菌大鼠壽命3～4年。

2．營養(yǎng)：無菌動(dòng)物體內(nèi)不能合成維生素D和維生素K。

3生長率：無菌動(dòng)物的生長率不同種屬不一樣，無菌禽類生長率比同種普通動(dòng)物高；無菌大、小鼠與普通動(dòng)物差不多；無菌豚鼠、兔比普通者慢?？赡芤蚰c內(nèi)無菌，不能幫助消化纖維素以提供機(jī)體所需要的營養(yǎng)物質(zhì)。4．生殖：無菌條件對(duì)動(dòng)物生殖影響不大。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的微生物學(xué)控制5.抗輻射能力強(qiáng):以射線照射無菌小鼠的存活時(shí)間長于普通動(dòng)物，普通動(dòng)物常因敗血癥而致死。一般認(rèn)為，這種存活時(shí)間的差別，是由于受損細(xì)胞的壽命在無菌與普通小鼠之間存在差別的緣故。6．免疫功能:由于網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)、淋巴組織發(fā)育不良，淋巴小結(jié)內(nèi)缺乏生長中心，產(chǎn)生丙種球蛋白的能力很弱，血清中IgM、IgG少水平低，免疫功能處于原始狀態(tài)，應(yīng)答速度慢，過敏反應(yīng)、對(duì)異體移植物的排斥反應(yīng)以及自身免疫現(xiàn)象消失或減弱。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的微生物學(xué)控制四、無茵動(dòng)物在生物醫(yī)學(xué)研究中的應(yīng)用(一)微生物學(xué)研究1．某些疾病的病原研究無菌動(dòng)物可以提供組織培養(yǎng)的無菌組織，可提供具有某一種菌的已知菌動(dòng)物，以及研究病原體的致病作用與機(jī)體本身內(nèi)在的關(guān)系。如貓瘟的形成，正常貓較易感染貓瘟病毒，無菌貓則不易感染，說明感染受腸道微生物的影響。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的微生物學(xué)控制2．微生物間的拮抗作用研究菌群之間的拮抗作用是生物屏障的一種。生物屏障可能比物理屏障更有效。當(dāng)向無菌動(dòng)物接種2種或2種以上的細(xì)菌時(shí)，可以研究它們對(duì)動(dòng)物的協(xié)同作用，以及不同微生物之間的相互關(guān)系，如依存、拮抗等。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的微生物學(xué)控制3．病毒性疾病研究無菌動(dòng)物是研究病毒性疾病、病毒性質(zhì)、純病毒、安全疫苗和單一特異性抗血清的有用工具。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的微生物學(xué)控制4．真菌感染研究

臨床上較長時(shí)間應(yīng)用某種抗生素，易發(fā)生條件性真菌感染的現(xiàn)象，利用無菌動(dòng)物進(jìn)行研究得到了一定的闡明。將白色念珠菌經(jīng)口感染無菌雛雞時(shí)，產(chǎn)生較多菌絲體，并侵入腸道黏膜；但接種普通雛雞時(shí)．只觀察到酵母菌體，很少發(fā)病。將大腸桿菌接種到無菌雛雞后就能完全保護(hù)雛雞不受侵犯。用無菌小白鼠實(shí)驗(yàn)也得到了類似的情況。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的微生物學(xué)控制（二)免疫學(xué)研究無菌動(dòng)物體內(nèi)既無抗原也無持異性抗體，處于一種“原始狀態(tài)”，很適合用于各種免疫功能的研究。如無菌動(dòng)物暴露于微生物，先產(chǎn)生α球蛋白，再產(chǎn)生β球蛋白，最后產(chǎn)生γ球蛋巳。可用無菌動(dòng)物制備高效價(jià)、無交叉反應(yīng)的特異性抗體，以及用無菌動(dòng)物進(jìn)行免疫抑制劑試驗(yàn)研究。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的微生物學(xué)控制(三)放射醫(yī)學(xué)研究用無菌動(dòng)物研究放射線的生物學(xué)效應(yīng)，可以將由放射線所引起的癥狀和感染而發(fā)生的癥狀區(qū)分開來。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的微生物學(xué)控制(四)營養(yǎng)、代謝研究無菌動(dòng)物是研究營養(yǎng)的良好模測，機(jī)體必需的某些營養(yǎng)成分是腸道正常菌群生命活動(dòng)中降解產(chǎn)生提供的。用無菌動(dòng)物可以研究哪些細(xì)菌可以合成哪些營養(yǎng)物質(zhì)，還可用無菌動(dòng)物來研究限制飲食對(duì)壽命、免疫力的影響等。普通動(dòng)物的腸道可以合成維生素B和維生素K，應(yīng)用無菌動(dòng)物可以研究哪些細(xì)菌能夠合成維生素B和維生素K。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的微生物學(xué)控制(五)老年病學(xué)研究方面無菌小鼠的自然壽命比普通小鼠為長，而且雄性無菌小鼠的壽命和雌性的相似或更長些。對(duì)2～3年齡無菌大鼠的檢查結(jié)果表明，腎、心臟和肺實(shí)際上沒有發(fā)生和年齡相關(guān)的病變，這說明，微生物因素和機(jī)體的老化有關(guān)。(六)藥物學(xué)和毒理學(xué)研究藥物的毒理作用常常與腸道細(xì)菌的代謝產(chǎn)物有關(guān)。用無菌動(dòng)物進(jìn)行研究，可以準(zhǔn)確地分析藥物的毒理作用和藥物的合理使用。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的微生物學(xué)控制五、無菌動(dòng)物的培育

無菌動(dòng)物在自然界并不存在，必須用人為的方法培育而成。現(xiàn)在通用的無菌動(dòng)物培育方法是生物凈化法，即剖腹產(chǎn)技術(shù)。原理是胎盤的屏障作用，母體一般不會(huì)將細(xì)菌、病毒等致病微生物傳給胎仔。在無菌條件下，大動(dòng)物進(jìn)行子宮切開術(shù)，小動(dòng)物做子宮切除術(shù)，取出胎仔，獲得無菌動(dòng)物，并將獲得的無菌動(dòng)物置入到無菌隔離器中哺育。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的微生物學(xué)控制（一)哺乳類無菌動(dòng)物技術(shù)

1．預(yù)產(chǎn)期的判斷預(yù)產(chǎn)期的判斷相當(dāng)重要，手術(shù)過早，胎仔很難成活；手術(shù)過晚，子宮頸開放，胎膜破裂，胎仔遭產(chǎn)道菌污染。最適時(shí)間應(yīng)掌握在自然分娩前2～6h。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的微生物學(xué)控制2．剖腹產(chǎn)術(shù)：手術(shù)時(shí)應(yīng)采用無菌操作，在短時(shí)間內(nèi)完成剖腹產(chǎn)手術(shù)。手術(shù)過程：將母體麻醉或頸椎脫臼處死后，立即進(jìn)行消毒、剖腹。一般小鼠采用頸椎脫臼法，處死孕鼠后，迅速將其浸入37℃消毒液中5s，移至手術(shù)臺(tái)上。固定四肢，切開腹部，暴露子宮，用止血鉗分別夾住兩側(cè)輸卵管和子宮頸，用剪刀剪下，然后將子宮連同止血鉗放入滅菌液中浸泡5s．再傳入隔離器中，洗去消毒液后切開子宮取出胎仔。通常要求大、小鼠最遲不應(yīng)超過10min，胎鼠因耐缺氧能力差，不應(yīng)超過5min，時(shí)間過長胎仔容易窒息死亡。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的微生物學(xué)控制3．哺乳：有2種方法即人工哺乳法和代乳法。

(1)人工哺乳法：在沒有代乳鼠的情況下，采用人工喂乳是唯一的方法。人工喂乳最初7天每天喂6次，每次間隔4h，8日齡后每日喂5次。人工乳汁的配方：家免乳或山羊乳作為大、小鼠人工乳，滅菌后飼喂。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的微生物學(xué)控制(2)代乳法：剖腹產(chǎn)術(shù)獲得胎仔，由哺乳中的無菌小鼠給予代乳哺育，就能使別的品系的普通小鼠無菌化。代乳母鼠的分娩時(shí)間應(yīng)控制在剖腹產(chǎn)的前l(fā)—2天。將乳母的幼仔部分成全部取出，換入新生仔鼠，將代乳母鼠籠小的鋪缺物充分分散到被代乳仟鼠身上，并將仔鼠輕放于代乳鼠腋下，仔細(xì)觀察，確認(rèn)被代乳仔鼠吮吸代乳鼠的乳汁則視力代乳成功。代乳時(shí)間一般4周齡則可離乳。無菌檢測：對(duì)代乳鼠、被代乳鼠的元菌檢測，應(yīng)在手術(shù)后的第7、12及25天進(jìn)行，這對(duì)于了解動(dòng)物體內(nèi)的微生物狀況，保證動(dòng)物的質(zhì)量極為重要。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的微生物學(xué)控制(二)鳥、禽類無菌動(dòng)物培育技術(shù)雞、鴿等也是常用的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。培育該類無菌動(dòng)物相對(duì)來說較無菌鼠兔容易。因?yàn)檫@些動(dòng)物出殼后即可啄食，不需人工喂養(yǎng)。無菌化的關(guān)鍵在于卵殼，因?yàn)槊畾げ还饣灰紫緶缇?，因而在選擇蛋類時(shí)應(yīng)選擇新鮮外殼光滑的受精卵。按如下程序無菌化：①將受精卵放到預(yù)先加溫至38℃的濕潤劑中；②再放入2％升汞液中浸泡12min，上面加無菌紗布覆蓋；③將浸泡過的受精卵放入隔離器中孵育。研究營養(yǎng)用無菌雞，要選育無白血病的雞群，否則僅外殼消毒是消滅不了雞白血病病毒的。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的微生物學(xué)控制六、無菌動(dòng)物的飼料及飼養(yǎng)環(huán)境1．無菌動(dòng)物的飼料無菌動(dòng)物的飼料須符合如下要求：①無菌動(dòng)物的飼料，以及墊料、飲水及其他用品均須經(jīng)過嚴(yán)格的滅菌消毒，殺滅活的微生物和寄生蟲；②必須補(bǔ)充因高壓滅菌而破壞的飼料營養(yǎng)成分，如維生素B、維生素c、泛酸等，補(bǔ)充的營養(yǎng)成分需用濾菌器過濾除菌；③飼料的組成、形態(tài)和氣味等應(yīng)盡可能適合動(dòng)物的習(xí)性和嗜好；④在飼料中補(bǔ)充腸道正常菌叢合成的營養(yǎng)成分。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的微生物學(xué)控制2．無菌動(dòng)物的飼育裝置無菌動(dòng)物必須生活在與自然界微生物完全隔絕的無菌隔離器內(nèi)，故隔離器又稱絕對(duì)屏障系統(tǒng)。無菌隔離器是—個(gè)對(duì)微生物絕對(duì)密閉的容器，其內(nèi)部空間和內(nèi)容物能接受高壓蒸氣滅菌或化學(xué)藥品滅菌處理；裝有無菌通道(傳遞窗)，動(dòng)物或食物及其他物品都可以從外部無菌地輸送到隔離器內(nèi)部去，而不破壞內(nèi)部的無菌環(huán)境；裝有高效過濾的裝置，而且隔離器內(nèi)的一切情況可隨時(shí)被觀察。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的微生物學(xué)控制3．無菌動(dòng)物的檢查為了確保無菌動(dòng)物的無菌狀態(tài)．及時(shí)發(fā)現(xiàn)污染，必須定期進(jìn)行檢查。檢查的材料以糞便為豐，亦可檢查飼料、墊料、飲水等，或者用消毒棉擦拭隔離器內(nèi)壁或動(dòng)物的飲水器皿表面進(jìn)行培養(yǎng)。培養(yǎng)基可用牛肉浸液、硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基、血液瓊脂等．分別在做厭氧和需氧培養(yǎng)。同時(shí)還要進(jìn)行寄生蟲及病毒檢查。但是，對(duì)于病毒．不可能一一進(jìn)行分離培養(yǎng)，一般通過臨床觀察、細(xì)菌培養(yǎng)或病理組織學(xué)檢查來相對(duì)地判定無菌動(dòng)物有無污染。當(dāng)然，無菌動(dòng)物是—個(gè)相對(duì)概念，實(shí)際上有的病毒、細(xì)菌、寄生蟲可以通過胎盤屏障傳給子代。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的微生物學(xué)控制第二節(jié)悉生動(dòng)物一、悉生動(dòng)物的概念悉生動(dòng)物也稱已知菌動(dòng)物或已知菌叢動(dòng)物，是指在無菌動(dòng)物體內(nèi)，植入已知微生物的動(dòng)物。根據(jù)植入無菌動(dòng)物體內(nèi)菌落數(shù)目的不同，悉體動(dòng)物可分為單菌、雙菌、三菌和多菌動(dòng)物。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的微生物學(xué)控制悉生動(dòng)物來源于無菌動(dòng)物，一般供實(shí)驗(yàn)用的悉生動(dòng)物，不同國家人工接種的腸道細(xì)菌種類也不同。常用的有糞鏈球菌、脆弱擬桿菌、雙歧桿菌、費(fèi)新尼亞梭茵、乳酸桿菌、葡萄球菌等。廣義的悉生動(dòng)物包括三大類：無菌動(dòng)物、悉生動(dòng)物、無特定病原體動(dòng)物。狹義的悉生動(dòng)物僅指悉生動(dòng)物。按照我國的微生物學(xué)和寄生蟲學(xué)控制分類，悉生動(dòng)物屬于四級(jí)動(dòng)物，必須飼養(yǎng)于隔離器系統(tǒng)中。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的微生物學(xué)控制二、悉生動(dòng)物的特點(diǎn)

悉生動(dòng)物體內(nèi)帶有已知微生物，和無菌動(dòng)物一樣，均飼養(yǎng)在無菌隔離器中，飼養(yǎng)管理方法同無菌動(dòng)物，但悉生動(dòng)物可以彌補(bǔ)無菌動(dòng)物的某些缺點(diǎn)。悉生動(dòng)物腸道內(nèi)存在能合成某種維生素利氨基酸的細(xì)菌，盡管高壓滅菌過的飼料不能供給足夠的維生素，但悉生動(dòng)物不會(huì)發(fā)生維生素缺乏癥。無菌動(dòng)物抵抗力較弱，飼養(yǎng)管理困難，而悉生動(dòng)物抵抗力明顯增強(qiáng)．易飼養(yǎng)管理，在多種研究中可代替無菌動(dòng)物。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的微生物學(xué)控制三．悉生動(dòng)物的應(yīng)用1．微生物學(xué)研究：悉生動(dòng)物在微生物學(xué)研究中做出了突出的貢獻(xiàn)，科研工作者可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)研究的需要，有目的地喂給單一的或多種細(xì)菌，來觀察這些細(xì)茵對(duì)機(jī)體的作用，亦可觀察微生物與微生物之間及微生物與機(jī)體之間的相互關(guān)系以及菌群失調(diào)現(xiàn)象等。當(dāng)向悉生動(dòng)物施以物理、化學(xué)等其他致病因子時(shí)，則可觀察機(jī)體、微生物、致病因子三方面的相互作用關(guān)系。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的微生物學(xué)控制2．免疫學(xué)研究最新研究表明，普通動(dòng)物消化道內(nèi)有100～200種細(xì)菌，取1g腸內(nèi)容物有106～1012個(gè)菌，一種細(xì)菌就是一種抗原，因此用普通動(dòng)物很難制備較純的抗體。無菌動(dòng)物缺乏抗原刺激，免疫系統(tǒng)處于體眠狀態(tài)，對(duì)外來刺激非常敏感，只有對(duì)某種抗原可迅速做出反應(yīng)的特性。如果將單一菌株植入無菌動(dòng)物，那么就可以制備抗該種菌的純度高、效價(jià)高的且不會(huì)污染其他微生物的抗體。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的微生物學(xué)控制3．微生物和寄生蟲相互關(guān)系的研究很多實(shí)驗(yàn)研究表明，宿主消化道的微生物狀況，直接或間接影響寄生蟲在宿主體內(nèi)的寄生能力。

4．克山病病因?qū)W研究中國農(nóng)業(yè)大學(xué)用植入黃曲霉菌動(dòng)物的實(shí)驗(yàn)研究證明，動(dòng)物的癥狀與克山病人的癥狀相似，硒不足只能加重病情．而不會(huì)誘發(fā)克山?。粚?shí)驗(yàn)動(dòng)物的微生物學(xué)控制5．公共他方向的應(yīng)用悉生動(dòng)物現(xiàn)巳被廣泛應(yīng)用于人和動(dòng)物的骨髓移植，人和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的腫瘤及其治療，病毒學(xué)和腫瘤疾病等方面的研究。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的微生物學(xué)控制四、悉生動(dòng)物的飼養(yǎng)管理必須飼養(yǎng)在溫濕度恒定的百級(jí)空氣凈化的隔離系統(tǒng)中，實(shí)行嚴(yán)格的微生物學(xué)和寄生蟲學(xué)控制。飼養(yǎng)管理方法與無菌動(dòng)物相同。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的微生物學(xué)控制第三節(jié)無特定病原體動(dòng)物無特定病原體動(dòng)物的概念無特定病原體動(dòng)物(SPF)簡稱SPF動(dòng)物，是指動(dòng)物機(jī)體內(nèi)無特定的微生物和寄生蟲存在，但帶有非特定的微生物和寄生蟲的動(dòng)物。實(shí)際上是無傳染病的健康功物。SPF動(dòng)物來源于無菌動(dòng)物，必須飼養(yǎng)在屏障系統(tǒng)中，實(shí)行嚴(yán)格的飼養(yǎng)管理和微生物學(xué)及寄生蟲學(xué)控制。按照我國的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物微生物分類方法，SPF動(dòng)物除普通動(dòng)物、清潔動(dòng)物應(yīng)排除的病原體外，還應(yīng)排除具有主要潛在感染或條件致病菌和對(duì)科研實(shí)驗(yàn)干擾大的病原菌。SPF動(dòng)物原始種群來源于無菌動(dòng)物、悉生動(dòng)物。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的微生物學(xué)控制

目前國際上對(duì)SPF動(dòng)物的監(jiān)測標(biāo)準(zhǔn)均不一致。部分學(xué)者認(rèn)為某種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物沒有某種病原體，不影響其實(shí)驗(yàn)要求就可稱為SPF動(dòng)物。另有學(xué)者認(rèn)為必須將常見的病原體全部排除才算是真正的SPF動(dòng)物。前者要求太低，后者要求太高。結(jié)合我國的實(shí)際情況，以既排除對(duì)動(dòng)物群有危害的病原體、又排除對(duì)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究有干擾的微生物和寄生蟲為原則。由此可見，我國的SPF動(dòng)物微生物學(xué)和寄生蟲學(xué)質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)高于國外的控制標(biāo)準(zhǔn)。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的微生物學(xué)控制二、無特定病原體動(dòng)物的用途SPF動(dòng)物排除了各種致病菌，因此試驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確可靠。目前國際上公認(rèn)SPF動(dòng)物適用于所有科研實(shí)驗(yàn)，是國際標(biāo)準(zhǔn)級(jí)別的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。它的應(yīng)用價(jià)值在于它無人畜共患病，無主要傳染病，無對(duì)實(shí)驗(yàn)研究時(shí)能產(chǎn)生干擾的微生物。目前，SPF動(dòng)物已廣泛應(yīng)用于各個(gè)領(lǐng)域。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的微生物學(xué)控制1．生物醫(yī)學(xué)研究:在藥理學(xué)、毒理學(xué)、腫瘤免疫學(xué)及傳染病學(xué)等學(xué)科的研究中，SPF動(dòng)物為首選動(dòng)物。2.血清、疫苗生產(chǎn):細(xì)菌、病毒診斷血清，各種疫苗生產(chǎn)所采用的動(dòng)物應(yīng)為SPF動(dòng)物，如SPF蛋(無垂直感染)。3.生物學(xué)鑒定:狂犬疫苗要用SPF小鼠；結(jié)核菌素要用SPF小鼠進(jìn)行生物學(xué)鑒定。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的微生物學(xué)控制三、無特定病原體動(dòng)物的培育

和飼養(yǎng)管理l、SPF動(dòng)物必須飼養(yǎng)在屏障系統(tǒng)內(nèi)培育SPF動(dòng)物的目的是為實(shí)驗(yàn)研究提供健康無病的動(dòng)物。因此，SPF動(dòng)物飼養(yǎng)于在溫濕度恒定的萬級(jí)空氣凈化的屏障系統(tǒng)中、實(shí)行嚴(yán)格的微生物學(xué)和寄生蟲學(xué)控制。其飼育設(shè)施有：SPF級(jí)動(dòng)物房、超凈生物層流架、帶空氣過濾帽的飼養(yǎng)盒等。使用的設(shè)施應(yīng)定期按規(guī)定的檢測內(nèi)容和方法來檢查有無致病菌(即特定的病原體)的污染，如有污染，其動(dòng)物視不同情況應(yīng)降低等級(jí)使用或全部淘汰，并要查明污染原因及時(shí)采取防范措施。在屏障系統(tǒng)內(nèi)工作的人員亦應(yīng)經(jīng)常進(jìn)行健康檢查。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的微生物學(xué)控制SPF動(dòng)物的飼養(yǎng)環(huán)境中沒有致病微生物，所以其生產(chǎn)的效果比普通動(dòng)物好，生產(chǎn)效率高，飼養(yǎng)過程中損失小。但屏障系統(tǒng)一旦遭到污染，病原體的傳播卻更強(qiáng)烈，所以，保持屏障系統(tǒng)的完好是非常重要的。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的微生物學(xué)控制2、必須嚴(yán)格選擇原種動(dòng)物建立SPF動(dòng)物種群，其原種必須來源于無菌動(dòng)物或悉生動(dòng)物才能保證。即將無菌動(dòng)物或悉生動(dòng)物放在屏障系統(tǒng)中飼養(yǎng)，使之自然感染特殊病原體以外的一般微生物。某些病原體可以通過胎盤屏障傳給胎仔(如致瘤病毒、淋巴細(xì)胞性脈絡(luò)叢腦膜炎病毒等)，這個(gè)問題在培養(yǎng)SPF動(dòng)物原種時(shí)應(yīng)充分考慮。要嚴(yán)格選擇動(dòng)物剖腹產(chǎn)母體，該動(dòng)物應(yīng)末感染能通過胎盤屏障的微生物，最好通過幾代連續(xù)剖腹產(chǎn)來培育原種無菌動(dòng)物，從而作為培育SPF動(dòng)物的原種。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的微生物學(xué)控制3．必須嚴(yán)格掌握SPF動(dòng)物的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

SPF動(dòng)物必須首先排除各種人畜共患的傳染病病原體，還應(yīng)排除影響該種動(dòng)物生產(chǎn)和實(shí)驗(yàn)使用中產(chǎn)生干擾的病原體，定期按規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)檢測是保證實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量的重要措施。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的微生物學(xué)控制第四節(jié)清潔級(jí)動(dòng)物一、清潔級(jí)動(dòng)物的概念清潔級(jí)動(dòng)物(cleananimals,CL)是指除普通動(dòng)物應(yīng)排除的病原外，不攜帶別動(dòng)物危害大和對(duì)科學(xué)研究干擾大的病原體，是根據(jù)我國國情而設(shè)定的等級(jí)動(dòng)物。其種群來源于SPF動(dòng)物、無菌動(dòng)物或剖腹產(chǎn)動(dòng)物。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的微生物學(xué)控制二、清潔級(jí)動(dòng)物的特點(diǎn)清潔級(jí)動(dòng)物比普通級(jí)動(dòng)物要求排除的微生物和寄生蟲多，但比SPF動(dòng)物少。清潔級(jí)動(dòng)物除肉眼觀察無病外，尸體解剖時(shí)，主要臟器、組織無論是肉眼觀看還是病理組織切片均應(yīng)無病變。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的微生物學(xué)控制三、清潔級(jí)動(dòng)物的應(yīng)用國際上普遍認(rèn)為清潔級(jí)動(dòng)物是按照微生物學(xué)和寄生蟲學(xué)控制要求最低的動(dòng)物其為清潔普通級(jí)動(dòng)物，僅適合于短期試驗(yàn)或部分科學(xué)研究實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的微生物學(xué)控制四、清潔級(jí)動(dòng)物的飼養(yǎng)管理清潔級(jí)動(dòng)物飼養(yǎng)于溫濕度恒定的萬級(jí)空氣凈化的屏障系統(tǒng)中。其所用的飼料、墊料、飲用水、籠器具等都經(jīng)過消毒滅菌處理。飲水可用高壓滅茵水或采用PH值2.5～2.8的酸化水?？諝庖残杞?jīng)初、中、高效過濾，工作人員需換滅菌工作服、鞋、帽、口罩等進(jìn)入動(dòng)物室進(jìn)行操作。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的微生物學(xué)控制第五節(jié)普通級(jí)動(dòng)物一、普通級(jí)動(dòng)物的概念普通級(jí)動(dòng)物(conventionalanimals，CV)是在微生物學(xué)和寄生蟲學(xué)控制上要求最低的動(dòng)物，它要求不攜帶人獸共患病和動(dòng)物烈性傳染病的病原體。這類動(dòng)物是微生物學(xué)和寄生蟲學(xué)控制要求最低的動(dòng)物，飼育在開放環(huán)境設(shè)施中。我國現(xiàn)行的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物國家標(biāo)準(zhǔn)中取消了大、小鼠的普通級(jí)，原鼠、地鼠、免、犬、猴仍保留有普通級(jí)。它的優(yōu)點(diǎn)是生產(chǎn)成本低，一般場所即可飼養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的微生物學(xué)控制二、普通級(jí)動(dòng)物的用造普通級(jí)動(dòng)物是實(shí)驗(yàn)動(dòng)物微生物學(xué)和寄生蟲學(xué)控制要求最低的動(dòng)物，對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的反應(yīng)較差，多用于生物醫(yī)學(xué)教學(xué)示教，或作為某些科學(xué)研究為探索方法而從事的預(yù)試驗(yàn)之用，以及豚鼠、免、犬、猴等大動(dòng)物的實(shí)驗(yàn)研究。不可用于科研、生產(chǎn)和鑒定。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的微生物學(xué)控制三、普通級(jí)動(dòng)物的飼養(yǎng)管理普通級(jí)動(dòng)物飼養(yǎng)在開放系統(tǒng)中，動(dòng)物室內(nèi)溫度、濕度良好，室內(nèi)通風(fēng)良好。為預(yù)防人獸共患病及動(dòng)物烈性傳染病的發(fā)生，日常飼養(yǎng)及管理必須采取一定的防護(hù)措施。要求飼料、飼具消毒，防止野生動(dòng)物(野鼠)的入侵，飲水要符合城市飲水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)；飼料應(yīng)經(jīng)清洗消毒后再喂；外來動(dòng)物必須嚴(yán)格隔離檢疫；房屋要有防野鼠、防昆蟲的設(shè)備；要堅(jiān)持經(jīng)常性的環(huán)境衛(wèi)生及籠器具的清洗消毒，嚴(yán)格處理淘汰及死亡動(dòng)物；限制無關(guān)人員進(jìn)入動(dòng)物室。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的微生物學(xué)控制第六節(jié)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物微生物學(xué)及寄生蟲學(xué)質(zhì)量監(jiān)測一、檢測意義定期進(jìn)行微生物學(xué)及寄生蟲學(xué)監(jiān)測，以確定實(shí)驗(yàn)動(dòng)物是否符合原定級(jí)別質(zhì)量。監(jiān)測可以避免人獸共患病原感染，保護(hù)人員健康。監(jiān)測可以避免誤用不合適的動(dòng)物，確保動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確可靠。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的微生物學(xué)控制二、微生物學(xué)及寄生蟲學(xué)監(jiān)測等級(jí)國家標(biāo)準(zhǔn)監(jiān)測標(biāo)準(zhǔn)的制定是提高實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量的重要前提。有了明確的等級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，飼養(yǎng)管理人員才能按照標(biāo)準(zhǔn)對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的飼養(yǎng)環(huán)境、飼料和設(shè)施條件進(jìn)行改善，才能制定相應(yīng)的飼養(yǎng)管理制度。檢疫人員才能按照標(biāo)準(zhǔn)對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行相應(yīng)病原體的檢測，及時(shí)發(fā)現(xiàn)問題，提出凈化和改進(jìn)的建議。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的微生物學(xué)控制級(jí)別越高的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，監(jiān)測的微生物和寄生蟲的種類就越多。根據(jù)近10年來我國實(shí)驗(yàn)動(dòng)物感染病原微生物和寄生蟲的底樣