抗體初篩試驗(yàn)

關(guān)于抗體初篩試驗(yàn)HIV抗體檢測(cè)的目的和要點(diǎn)目的診斷血液篩查監(jiān)測(cè)要點(diǎn)根據(jù)目的選擇檢測(cè)方法及檢測(cè)策略

!嚴(yán)格遵守實(shí)驗(yàn)室SOP

篩查試驗(yàn)陽(yáng)性—需做確證試驗(yàn)篩查試驗(yàn)陰性—不應(yīng)做確認(rèn)試驗(yàn)篩查及確證試驗(yàn)均應(yīng)做好咨詢(xún)工作第2頁(yè),共30頁(yè)，2024年2月25日，星期天HIV抗體篩查試驗(yàn)試劑儲(chǔ)存溫度效期樣品血清血漿全血方法

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA

化學(xué)發(fā)光或免疫熒光實(shí)驗(yàn)快速檢測(cè)(RT)及其它檢測(cè)試驗(yàn)

明膠顆粒凝集試驗(yàn)（PA）免疫滲濾試驗(yàn)免疫層析試驗(yàn)免疫膠體金法（硒）第3頁(yè),共30頁(yè)，2024年2月25日，星期天免疫膠體金法陰性質(zhì)控區(qū)（C）出現(xiàn)紅色反應(yīng)線(xiàn)陽(yáng)性質(zhì)控區(qū)（C）出現(xiàn)紅色反應(yīng)線(xiàn)檢測(cè)區(qū)（T）出現(xiàn)紅色反應(yīng)線(xiàn)無(wú)效質(zhì)控區(qū)（C）未出現(xiàn)紅色反應(yīng)線(xiàn)HIV抗體篩查試驗(yàn)第4頁(yè),共30頁(yè)，2024年2月25日，星期天HIV抗體篩查試驗(yàn)

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）方法類(lèi)型

雙抗原夾心法測(cè)抗體雙抗體夾心法測(cè)抗原捕獲法測(cè)抗體間接法測(cè)抗體競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)抗原\抗體第5頁(yè),共30頁(yè)，2024年2月25日，星期天用于檢測(cè)HIV抗體的ELISA法第一代：使用HIV全病毒裂解物為抗原，應(yīng)用間接法原理檢測(cè)HIV抗體。如日本富士公司生產(chǎn)的HIV-PA試劑。第二代：使用在細(xì)菌或真菌中表達(dá)的人工重組或化學(xué)合成多肽HIV抗原，應(yīng)用間接法原理檢測(cè)HIV抗體?；蛑亟M通常易于在培養(yǎng)基中生產(chǎn)大量同源性抗原，產(chǎn)品為單一目的基因而非多樣性抗原混合，特異性高于第一代試劑。第6頁(yè),共30頁(yè)，2024年2月25日，星期天用于檢測(cè)HIV抗體的ELISA法第三代：使用合成多肽HIV抗原（少數(shù)用重組抗原），應(yīng)用雙抗原夾心法原理檢測(cè)HIV抗體。由于標(biāo)記HIV抗原可同時(shí)檢測(cè)血清中HIV-1IgG、IgM、IgA抗體，此類(lèi)試劑的敏感性和特異性均優(yōu)于標(biāo)記抗人免疫球蛋白的間接法。高純度的HIV-1/-2型抗原待檢抗體酶標(biāo)記的HIV-1/-2型抗原第7頁(yè),共30頁(yè)，2024年2月25日，星期天用于檢測(cè)HIV抗體的ELISA法第四代此類(lèi)試劑在第三代試劑盒基礎(chǔ)上，將針對(duì)P24抗原的抗體與HIV-1抗原一起包被固相載體，可同時(shí)檢測(cè)HIV-1IgG、IgM、IgA抗體和P24抗原。增加了敏感性和特異性第8頁(yè),共30頁(yè)，2024年2月25日，星期天檢測(cè)HIV抗體的ELISA試劑試劑種類(lèi)必須使用經(jīng)國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局注冊(cè)批準(zhǔn)，批批檢合格的HIV抗體檢測(cè)試劑使用在有效期內(nèi)且保存條件符合要求的試劑存放試劑的冰箱溫度2-8℃，使用前要放置室溫平衡第9頁(yè),共30頁(yè)，2024年2月25日，星期天檢測(cè)HIV抗體的ELISA試劑完整的ELISA試劑盒包含以下各組分

已包被抗原或抗體的固相載體酶標(biāo)記的抗原或抗體

酶的底物

陰性對(duì)照品和陽(yáng)性對(duì)照品定性測(cè)定

標(biāo)本（和結(jié)合物）的稀釋液

洗滌液

酶反應(yīng)終止液第10頁(yè),共30頁(yè)，2024年2月25日，星期天ELISA檢測(cè)試劑固相載體

固相載體材質(zhì)

聚苯乙烯

固相載體形狀

微量滴定板

第11頁(yè),共30頁(yè)，2024年2月25日，星期天檢測(cè)HIV抗體的ELISA試劑結(jié)合物（酶標(biāo)記的抗體或抗原）辣根過(guò)氧化物酶(horseradishperoxidase,HRP)底物

四甲基聯(lián)苯胺(TMB)

反應(yīng)后顯藍(lán)色，終止后呈黃色，最適吸收波長(zhǎng)為450nm

第12頁(yè),共30頁(yè)，2024年2月25日，星期天檢測(cè)HIV抗體的ELISA試劑洗滌液常用含0.05%吐溫20磷酸緩沖鹽水終止液

HRP常用強(qiáng)酸，最常見(jiàn)2mol/L硫酸

第13頁(yè),共30頁(yè)，2024年2月25日，星期天ELISA試驗(yàn)

標(biāo)本的采取和保存加樣孵育洗滌顯色與終止酶標(biāo)儀測(cè)定第14頁(yè),共30頁(yè)，2024年2月25日，星期天標(biāo)本的采取和保存

避免溶血紅細(xì)胞溶解時(shí)會(huì)釋放出具有過(guò)氧化物酶活性的物質(zhì)，以HRP為標(biāo)記的ELISA測(cè)定中，溶血標(biāo)本可能會(huì)增加非特異性顯色

避免污染血清標(biāo)本宜在新鮮時(shí)檢測(cè)。如有細(xì)菌污染，菌體中可能含有內(nèi)源性HRP，也會(huì)產(chǎn)生假陽(yáng)性反應(yīng)保存一周內(nèi)2～8℃

一周以上-20℃第15頁(yè),共30頁(yè)，2024年2月25日，星期天標(biāo)本送檢信息姓名外螺旋蓋（帶膠墊）血清管

第16頁(yè),共30頁(yè)，2024年2月25日，星期天√×第17頁(yè),共30頁(yè)，2024年2月25日，星期天接收樣本時(shí)，必須填寫(xiě)樣本接收記錄單建立樣本的唯一性編碼

登記有關(guān)信息受檢者姓名、性別、年齡、職業(yè)、送檢單位、人群類(lèi)別、檢驗(yàn)結(jié)果、送檢日期、報(bào)告日期

樣本的接收第18頁(yè),共30頁(yè)，2024年2月25日，星期天樣本的接收認(rèn)真核對(duì)樣本與送檢單提供的信息是否相符、樣本有無(wú)破損和滲漏。如發(fā)現(xiàn)滲漏的，立即將尚存的樣本移出，對(duì)樣本管及包裝進(jìn)行消毒，同時(shí)報(bào)告主管領(lǐng)導(dǎo)和有關(guān)專(zhuān)家檢查樣本的物理性狀。并做好記錄。如果樣本不符合試驗(yàn)的要求，應(yīng)將樣本安全廢棄，同時(shí)立即通知送樣人第19頁(yè),共30頁(yè)，2024年2月25日，星期天樣本的接收

實(shí)驗(yàn)室工作人員在打開(kāi)樣本容器時(shí)，須小心，防止內(nèi)容物崩濺。樣本處理時(shí)，須穿戴防護(hù)衣，在生物安全柜中操作，同時(shí)應(yīng)戴一次性口罩、防護(hù)眼鏡，防止皮膚、粘膜污染。用后的包裝要進(jìn)行消毒第20頁(yè),共30頁(yè)，2024年2月25日，星期天檢測(cè)方法

必須按照試劑盒說(shuō)明書(shū)（sop）中規(guī)定的要求進(jìn)行操作包括進(jìn)行檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)條件如陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照的設(shè)置、試劑、標(biāo)本加樣量、孵育時(shí)間、反應(yīng)溫度、洗滌程序和次數(shù)等

標(biāo)本質(zhì)量

冷凍樣品實(shí)驗(yàn)前需解凍并混勻，血清或血漿樣品如溶血、微生物污染、血脂過(guò)多以及黃疸等情況，可能會(huì)對(duì)試驗(yàn)產(chǎn)生影響第21頁(yè),共30頁(yè)，2024年2月25日，星期天

加樣

移液器(包括單頭和多頭移液器)是實(shí)驗(yàn)室中重要的基本器具，一年至少校準(zhǔn)一次準(zhǔn)確加到微孔板底部，避免加在孔壁上部，并注意不可濺出，不可產(chǎn)生氣泡，加入后及時(shí)放入孵箱檢測(cè)方法第22頁(yè),共30頁(yè)，2024年2月25日，星期天檢測(cè)方法

孵育孵育的溫度要控制好，時(shí)間要掌握好，嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)操作注意封板，避免蒸發(fā)反應(yīng)板不宜疊放，反應(yīng)板至水面下的1/3處，以保證各板的溫度都能迅速平衡，保證溫度的均一性第23頁(yè),共30頁(yè)，2024年2月25日，星期天檢測(cè)方法

洗滌各種試劑盒的洗液不要混用。按要求稀釋?zhuān)匆喝绻Y(jié)晶應(yīng)待其融解后配制檢查洗板機(jī)管道是否通暢，是否有漏液現(xiàn)象按孔的大小調(diào)節(jié)好洗液的量孔內(nèi)液體被洗板機(jī)吸收得越干凈洗滌效果更好，手工洗板防止洗液在孔內(nèi)形成氣泡第24頁(yè),共30頁(yè)，2024年2月25日，星期天檢測(cè)方法

顯色與終止顯色劑不用過(guò)期顯色劑加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。如產(chǎn)生較多氣泡，則會(huì)導(dǎo)致假陽(yáng)性酶標(biāo)儀測(cè)定第25頁(yè),共30頁(yè)，2024年2月25日，星期天

每天（每次）核對(duì)酶標(biāo)儀濾光片波長(zhǎng)查洗板機(jī)管道是否通暢，是否有漏液現(xiàn)象每周清潔儀器表面，保護(hù)光學(xué)零件，不沾灰塵每月洗滌時(shí)檢查各孔是否與相應(yīng)的沖洗頭對(duì)位良好，負(fù)壓是否符合規(guī)定要求，這是保證各孔洗滌均衡一致的前提℃℃℃ELISA洗板機(jī)與酶標(biāo)儀(推薦方法)第26頁(yè),共30頁(yè)，2024年2月25日，星期天結(jié)果報(bào)告分析結(jié)果及發(fā)出檢測(cè)報(bào)告前，應(yīng)在試劑盒和外部質(zhì)控品結(jié)果滿(mǎn)足要求的前提下，對(duì)樣品進(jìn)行分析，試劑盒及外部質(zhì)控品不合格，樣品需要重新檢測(cè)，復(fù)核人對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行仔細(xì)復(fù)核并對(duì)結(jié)果提出結(jié)論，簽發(fā)人對(duì)試驗(yàn)結(jié)論進(jìn)行審核、分析、總結(jié)、簽字第27頁(yè),共30頁(yè)，2024年2月25日，星期天

結(jié)果報(bào)告篩查陰性樣本，出具具有法律效用的正式報(bào)告,血清建議保存1-2個(gè)月篩查陽(yáng)性樣本，及時(shí)送確證實(shí)驗(yàn)室。必要時(shí)可出具