檢驗方法性能驗證

ByLaura檢測系統(tǒng)的方法學(xué)性能驗證新疆醫(yī)科大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)院檢驗系張朝霞教授1精選ppt教學(xué)目的與要求教學(xué)要求：掌握：定性試驗和定量試驗方法學(xué)評價的主要指標(biāo)，定量試驗的性能驗證方法。熟悉：定性試驗評價的內(nèi)容和方法了解：檢測系統(tǒng)評價的基本步驟2精選ppt1.測量誤差：測量結(jié)果減去被測量的真值的差，簡稱誤差。2.隨機(jī)誤差：測量結(jié)果與在重復(fù)條件下，對同一被測量進(jìn)行無限多次測量所得結(jié)果的平均值之差。3.系統(tǒng)誤差：在重復(fù)性條件下，對同一被測量進(jìn)行無限多次測量所得結(jié)果的平均值與被測量的真值之差稱為系統(tǒng)誤差。亦稱為正確度．復(fù)習(xí)基礎(chǔ)知識3精選ppt4、正確度：檢測結(jié)果離真值的偏移程度5、精密度：表示測量結(jié)果中隨機(jī)誤差大小的程度。6、準(zhǔn)確度：

準(zhǔn)確度是測量結(jié)果中系統(tǒng)誤差（正確度）與隨機(jī)誤差（精密度）的綜合。4精選ppt定量試驗方法的驗證和確認(rèn)試驗二.更改檢測系統(tǒng)的確認(rèn)試驗準(zhǔn)確度（EP9）精密度（EP5）可報告范圍（EP6-P2）參考區(qū)間（C28-A2）分析靈敏度（EP17-A）線性范圍（EP6-A）分析特異性(包括干擾物質(zhì)）（EP7-P）5精選ppt一.未更改檢測系統(tǒng)的驗證1、精密度（批內(nèi)、批間）2、準(zhǔn)確度（標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、標(biāo)準(zhǔn)方法、方法學(xué)比對）3、可報告范圍（驗證最大稀釋倍數(shù)）4、參考區(qū)間（檢測20個正常樣本驗證）定量試驗方法的驗證和確認(rèn)試驗6精選ppt精密度評價

一

二

三第一節(jié)定量檢測系統(tǒng)的性能評價

正確度評價線性范圍和可報告范圍的評價7精選ppt第8頁測定系統(tǒng)方法學(xué)操作程序校準(zhǔn)品儀器試劑配方和來源一、測定系統(tǒng)的關(guān)鍵要素8精選ppt二、評價的基本步驟

1.確定方法的質(zhì)量目標(biāo)，總允許誤差2.選定評價指標(biāo)有量值溯源的配套檢測系統(tǒng)，正確度、精密度、可報告范圍、參考區(qū)間驗證。

不配套的檢測系統(tǒng)：線性范圍、回收和干擾試驗3.收集評價的實驗數(shù)據(jù)4.判斷方法的臨床可接收性熟悉9精選ppt三、評價文件（1）EP5-A：臨床化學(xué)設(shè)備操作精密度評價核準(zhǔn)指南EP6-A：定量分析方法的線性評價：EP7-P：臨床化學(xué)實驗干擾，用于干擾物對檢測結(jié)果影響的定性。

EP9-A：用病人標(biāo)本進(jìn)行方法學(xué)比較和偏倚評估，主要用于檢測兩種臨床方法或設(shè)備間的偏倚。10精選ppt評價文件（2）EP10-A：定量實驗室方法的初步評價EP14-A：基質(zhì)效應(yīng)的評價EP15-A：精密度和準(zhǔn)確度性能的應(yīng)用EP21-P（NEW）：臨床實驗方法總分析誤差的評估11精選ppt1.批內(nèi)方案2.批間方案3.EP方案（EP5-Ａ，EP15－A）四、評價方法（一）精密度評價試驗12精選pptＥＰ5－Ａ方案1.試驗樣品一般選擇2個，一個在參考區(qū)間附近，另一個為異常值2.批內(nèi)精密度評價：即一個樣品重復(fù)測定20次，計算出均值，標(biāo)準(zhǔn)差和變異系數(shù)。

3.總精密度評價：用2個樣品每天測定2批，批間測定間隔不得少于2h，每批平行測定2份，至少共測定20天，80個數(shù)據(jù)。每對結(jié)果間的差（共40個）代表批內(nèi)差；2批均值之間的差（共20個）代表批間差；每天4個結(jié)果的均值（共20個）代表日間差。每批測定至少做一個質(zhì)控。

13精選ppt1.用有量值溯源的參考物質(zhì)進(jìn)行測定2.使用決定性方法或參考方法3.與具有量值溯源檢測系統(tǒng)進(jìn)行比對

（1）EP方案（EP9-Ａ，EP15－A）（2）簡易比對方案（二）正確度評價試驗14精選ppt(1)EP15－A方案應(yīng)來源于健康人或患者，無明顯干擾因素。全部標(biāo)本在整個線性范圍內(nèi)均勻分布，標(biāo)本至少20例。

標(biāo)本要求15精選ppt測定方法注意：1，可一天，但不超過4小時內(nèi)。2.可3-4天（但盡可能短）。3.每個標(biāo)本只需測定1。4.二種方法都有室內(nèi)質(zhì)控16精選ppt計算偏移1.偏移2.相對偏移3.平均偏移4.相對平均偏移5.與質(zhì)量要求比較17精選ppt1.選擇高、中、低濃度五份樣本同時用各臺儀器按常規(guī)樣本測定的方法，測定其各項參數(shù)，每份樣本測定2次，求其均值。(2)簡易比對方法18精選ppt3.計算與核對標(biāo)準(zhǔn)[1]計算：按PT計算方法計算偏倚。PT計算公式：（確定儀器測定值-比對儀器測定值）/確定儀器測定值×100[2]標(biāo)準(zhǔn)：偏移偏倚保持所有標(biāo)本結(jié)果差異在CLIA88允許誤差的1/4內(nèi)19精選ppt檢驗科比對記錄20精選ppt1.確定測量的線性范圍和臨床上可能出現(xiàn)的范圍。2.取線性范圍內(nèi)的高值標(biāo)本，用稀釋液稀釋，最低預(yù)期值在線性低限。3.計算回收率：在可接受范。（三）臨床可報告范圍21精選ppt最大稀釋倍數(shù)測定稀釋倍數(shù)預(yù)期值實測值回收率％1：5

1：10

1：20

1：40

22精選ppt4.可報告范圍計算：（1）上限為線性范圍上線×稀釋倍數(shù)（2）下限為線性范圍低限23精選ppt第二節(jié)定性檢測系統(tǒng)的性能驗證

一、驗證的內(nèi)容（掌握）:（1）敏感性

（2）特異性

（3）正確度（4）符合性（5）精密度(Precision)（6）CUTOFF值驗證24精選ppt二、定性臨床應(yīng)用與分類1、定性測定的臨床應(yīng)用免疫學(xué)測定：感染性疾病、腫瘤標(biāo)志物核酸和基因檢測微生物檢驗細(xì)胞學(xué)檢驗寄生蟲檢驗驗25精選ppt2、定性實驗的臨床分類篩查實驗：如便潛血、TP診斷實驗：如微生物學(xué)培養(yǎng)與細(xì)菌鑒定確認(rèn)實驗：對以上已做出的檢驗結(jié)果進(jìn)行驗證和確認(rèn)26精選ppt三、驗證目的和時機(jī)（熟悉）:1.目的：（1）評價各定性檢測參數(shù)是否滿足臨床檢測和認(rèn)可組織的要求.（2）驗證廠家提供的試劑參數(shù)能在本實驗室得到重現(xiàn).27精選ppt幾個重要概念及計算公式的回顧:1.敏感性:將實際患病者正確診斷為陽性的百分率。計算公式為：真陽性/（真陽性+假陰性）X100%.2.特異性:指將實際無病者檢測為陰性的百分率。計算公式為：真陰性/(真陰性+假陽性）X100%.28精選ppt

陽性結(jié)果的可靠性（預(yù)示值）：即測定為陽性的標(biāo)本實際上為陽性的可能性。=[真陽性/（真陽性+假陽性）]×100%

陰性結(jié)果的可靠性（預(yù)示值）：則為一份給出陰性結(jié)果的樣本實際上為陰性的可靠性。=[真陰性/（真陰性+假陰性）]×100%29精選ppt（一）準(zhǔn)確度驗證:1.樣本的臨床診斷已知（敏感性、特異性）室間質(zhì)評材料(衛(wèi)生部)廠商提供的已賦值的參考材料用參考方法或決定方法定值的材料（或金標(biāo)準(zhǔn)診斷的標(biāo)本）。30精選ppt選取40份（20份）樣本,最好陰陽性各半↓隨機(jī)盲法重新分號↓檢測樣本↓將所有檢測結(jié)果匯總填表↓計算評價性能指標(biāo)31精選ppt32精選ppt敏感度=100%×[A/（A+C）]特異性=100%×[D/（B+D）]相關(guān)樣本的患病率=100%×[（A+C）/N]陽性結(jié)果預(yù)測值（PVP）=100%×[A/（A+B）]陰性結(jié)果預(yù)測值（PVN）=100%×[D/（C+D）]方法效率（正確率）=100%×[（A+D）/N]33精選ppt2.樣本的臨床診斷未知（符合性）同一項目不同檢測方法或儀器的比對適用范圍:一個項目有兩種以上的方法或者兩臺以上的儀器(包括同一型號的儀器)同時檢測,需要進(jìn)行一致性比對.34精選ppt選取40份（20份）樣本,最好陰陽性各半↓隨機(jī)每8（4）份分成一組↓兩種方法(或兩臺儀器)每天平行檢測一組樣本↓將所有檢測結(jié)果匯總↓評價符合率35精選ppt36精選ppt陽性符合率=100%×[a/(a+c)]陰性符合率=100%×[d/(b+d)]總符合率=100%×[(a+d)/n]37精選ppt更換批號的簡易比對：新鮮患者血清陰性2例，陽性3例，陽性包含有S/CO高、中、低值，用新舊批號試劑檢測。低值避開“灰區(qū)”夾心法：S/CO低值1.2－3競爭法：S/CO低值0.4－0.6判斷標(biāo)準(zhǔn)：符合率為100%為可接受。38精選ppt二.精密度驗證:1.批內(nèi)精密度:同一份樣本在同一批次內(nèi)平行重復(fù)檢測20次.然后計算均值,SD和CV.2.批間精密度:同一份樣本連續(xù)檢測20天,每天平行檢測雙孔.然后計算均值,SD和CV.注意:1.用S/CO比值進(jìn)行統(tǒng)計計算.2.最好選擇臨界值,或弱陽性樣本.判斷標(biāo)準(zhǔn):ELISA批內(nèi)CV＜10%，批間＜20%39精選ppt補(bǔ)充：自動加樣針的攜帶污染率的驗證1、取強(qiáng)陽性樣品和一陰性樣品，按l（陽）、2（陽）、3（陰）、4（陰）、5（陰）的順序測定。2、計算攜帶污染程度：攜帶污染率=[3（陰）一5（陰）]/[2（陽）一5（陰）]×100％（用檢測的OD值計