腦脊液寡克隆區(qū)帶對多發(fā)性硬化的診斷意義

關(guān)于腦脊液寡克隆區(qū)帶對多發(fā)性硬化的診斷意義引言世界多發(fā)性硬化日由國際多發(fā)性硬化聯(lián)盟于2009年5月27日建立，以喚起全世界對多發(fā)性硬化癥的關(guān)注，推動相關(guān)研究和醫(yī)療進展，并約定每年五月的最后一個星期三為世界多發(fā)性硬化日。今年的世界多發(fā)性硬化日是5月25日，為第八個世界多發(fā)性硬化日。第2頁,共25頁，2024年2月25日，星期天然而多發(fā)性硬化早在19世紀中期即已經(jīng)有記載，是中世紀的神秘疾病……是詛咒？是天譴？引言第3頁,共25頁，2024年2月25日，星期天1、什么是多發(fā)性硬化癥？多發(fā)性硬化（multiplesclerosis，MS）是以中樞神經(jīng)系統(tǒng)脫髓鞘病變?yōu)樘攸c的自身免疫性疾病，病灶的空間多發(fā)性、病程的時間多發(fā)性是其主要臨床特點。臨床表現(xiàn)復(fù)雜多樣，中樞神經(jīng)系統(tǒng)均可受累（腦、脊髓、視神經(jīng)），我國以視神經(jīng)、脊髓損害多見。病因和發(fā)病機制尚未完全明確，可能與自身免疫、遺傳、環(huán)境因素、病毒感染、個體易感等相關(guān)。第4頁,共25頁，2024年2月25日，星期天2、多發(fā)性硬化癥的全球分布情況：

流行病資料表明，接近地球兩極地帶，特別是北半球北部高緯度地帶的國家，本病發(fā)病率較高。多發(fā)性硬化癥（MS）高危地區(qū)包括美國北部、加拿大、冰島、英國、北歐、澳洲的塔斯馬尼亞島和新西蘭南部，患病率為40/10萬或更高。赤道國家發(fā)病率小于1/10萬，亞洲和非洲國家發(fā)病率較低，約為5/10萬。我國屬于低發(fā)病區(qū)，與日本相似。

第5頁,共25頁，2024年2月25日，星期天3、多發(fā)性硬化癥的國內(nèi)情況：第6頁,共25頁，2024年2月25日，星期天第7頁,共25頁，2024年2月25日，星期天多發(fā)性硬化易發(fā)生于15到40歲的青壯年人群，而且女性患者居多，全球目前約有230萬名多發(fā)性硬化患者，國內(nèi)約有5萬確診患者。北京醫(yī)院神經(jīng)科主任醫(yī)師許賢豪指出，多發(fā)性硬化癥由于不常見且癥狀多樣和隱蔽，八成就醫(yī)患者曾被誤診，一些患者發(fā)展到全身癱瘓仍未被確診。第8頁,共25頁，2024年2月25日，星期天我國在20世紀50年代，認為多發(fā)性硬化癥是罕見病，僅有個別報道。但20世紀70年代以后，國內(nèi)發(fā)病率有增高趨勢。近年來全國各地報道日益增加，并有大宗病例報道，已成為神經(jīng)系統(tǒng)較常見的疾病，采用傳統(tǒng)的診斷方法往往不能做出早期診斷而延誤治療。腦脊液寡克隆區(qū)帶不僅對MS診斷特異性較高，而且敏感性強，是MS的重要實驗室診斷指標(biāo)，使MS得早期診斷，早期治療成為現(xiàn)實。第9頁,共25頁，2024年2月25日，星期天

4、什么是寡克隆區(qū)帶？正常生理狀態(tài)下，人體內(nèi)含有很多克隆株的漿細胞所合成的免疫球蛋白，進行電泳時r-球蛋白區(qū)域會形成均勻的連續(xù)的區(qū)帶，即多克隆免疫球蛋白區(qū)帶。而在病理免疫狀態(tài)下人體的幾個克隆株漿細胞會發(fā)生異常增生，其所合成的免疫球蛋白在電泳時會在r-球蛋白區(qū)域可見2條或2條以上分開的、不均一、比較狹窄、不連續(xù)的清晰蛋白區(qū)帶，稱之為寡克隆區(qū)帶（OCB）。第10頁,共25頁，2024年2月25日，星期天1960年1971年1979年Karcher，vanSande和Lowenthal用瓊脂糖凝膠電泳法從亞急性硬化性全腦炎患者的CSFγ-球蛋白中分離出幾個光密度不同的條帶。Kutt也發(fā)現(xiàn)MS患者CSF電泳后在靠近陰極端形成狹窄而不連續(xù)區(qū)帶。由Link證實為OCBIgG區(qū)帶。Thompson報道CSF有非典型淋巴細胞和典型的漿細胞的多發(fā)性硬化（MS）患者在CSF電泳時均檢出了OCB。

1959年5、寡克隆區(qū)帶的發(fā)現(xiàn)第11頁,共25頁，2024年2月25日，星期天6、寡克隆區(qū)帶的產(chǎn)生機制OCB是數(shù)個B細胞系株(克隆)在CNS局部產(chǎn)生的特殊抗體，因此關(guān)于OCB產(chǎn)生的機制KAＲUSSIS等提出是由于內(nèi)源性B細胞遺傳的異常，選擇性地使某些B細胞克隆增強轉(zhuǎn)錄，引起增殖并導(dǎo)致免疫球蛋白失衡。OCB的產(chǎn)生有賴于存在限制異質(zhì)性Ig的合成，反映出CNS內(nèi)部對某些微生物和自身抗原的隔離免疫應(yīng)答?？梢?，OCB是針對CNS內(nèi)部持續(xù)抗原刺激的一種特異反應(yīng)，CSF中OCB陽性高度提示在CNS內(nèi)有Ig的異常合成，存在鞘內(nèi)局部免疫應(yīng)答。OCB多數(shù)是IgG，很少是IgA或IgM。第12頁,共25頁，2024年2月25日，星期天7、寡克隆區(qū)帶的檢測方法臨床主要采用主要采用瓊脂糖凝膠電泳、聚丙烯酰胺凝膠電泳和等電聚焦電泳三類方法分離蛋白。瓊脂糖凝膠電泳聚丙烯酰胺凝膠電泳等電聚焦電泳瓊脂糖凝膠電泳操作簡單，孔徑較大，有利于蛋白質(zhì)的分離和轉(zhuǎn)膜，所以更適宜實驗室推廣使用由于聚丙烯酰胺凝膠電泳制膠復(fù)雜，且對人體有毒而使應(yīng)用受限等電聚焦是利用蛋白質(zhì)等兩性分子等電點的不同，在穩(wěn)定、連續(xù)、線性的pH梯度中將蛋白質(zhì)區(qū)分出不同條帶，是當(dāng)前分辨率最高的電泳技術(shù)。第13頁,共25頁，2024年2月25日，星期天采用電泳法分離蛋白后，再采用考馬斯亮藍、硝酸銀、過氧化物酶或親和素-生物素復(fù)合物等染色方法使蛋白條帶顯色，得出OCB的染色型，然后進行分析。第14頁,共25頁，2024年2月25日，星期天8、寡克隆區(qū)帶的結(jié)果判斷第15頁,共25頁，2024年2月25日，星期天正常情況下，CSF中Ig含量極少。病理情況下，CSF中r-球蛋白（主要是IgG）病理性增高主要有以下三種情況：以往國內(nèi)相關(guān)研究僅檢測CSF中的OCB，由于血腦屏障的破壞，可導(dǎo)致出現(xiàn)假陽性。因此，配對分析CSF和血清中的OCB，得到CSF-OCB的結(jié)果，可排除血腦屏障的影響。（1）血腦屏障損害，血源性IgG進入CSF（3）既有血腦屏障損害，又有鞘內(nèi)IgG自身合成（2）CNS內(nèi)源性合成增加，不依賴血清IgG水平變化8.1寡克隆區(qū)帶結(jié)果判斷—配對分析第16頁,共25頁，2024年2月25日，星期天8.2寡克隆區(qū)帶結(jié)果判斷—結(jié)果描述

歐洲專家組推薦以下5種類型描述OCB結(jié)果：

1.血清與CSF均未檢出OCB2.局限于CSF中的OCB，血清中未見3.除CSF與血清中共有的OCB外，CSF中還存在特有區(qū)帶4.CSF與血清中區(qū)帶相同5.CSF和血清中的單克隆區(qū)帶正常提示存在IgG鞘內(nèi)合成顯示同時存在血腦屏障損傷及IgG鞘內(nèi)合成提示存在血腦屏障損傷提示副蛋白血癥第17頁,共25頁，2024年2月25日，星期天雖然(b)、(c)、(d)和(e)圖均提示產(chǎn)生了體液免疫反應(yīng)，但僅(b)和(c)圖提示存在IgG鞘內(nèi)合成，是反映CNS病變的重要標(biāo)志，可以判斷為陽性結(jié)果。第18頁,共25頁，2024年2月25日，星期天9、腦脊液寡克隆區(qū)帶

對多發(fā)性硬化的診斷意義歐美學(xué)者報道確診MS患者OCB陽性率為90%-95%，但國內(nèi)報道MS患者OCB陽性率多為30%-60%，日本學(xué)者報道MS患者陽性率為36%，韓國學(xué)者報道韓國MS患者陽性率為31.6％。這些研究結(jié)果提示亞洲MS人群OCB陽性率均明顯低于西方國家(95％)。第19頁,共25頁，2024年2月25日，星期天第20頁,共25頁，2024年2月25日，星期天目前，OCB仍是MS實驗室檢測中應(yīng)用最為廣泛的生物學(xué)指標(biāo)。傳統(tǒng)的腦脊液常規(guī)、生化檢查對MS的輔助診斷缺乏特異性。腦脊液OCB陽性有助于MS的診斷，雖然非MS特異性改變，其他炎癥性或非炎癥性疾病，例如副腫瘤綜合征(NPS)、SLE、神經(jīng)白塞病、干燥綜合征(SS)、神經(jīng)梅毒、HIV感染和神經(jīng)萊姆病等亦可呈陽性,但其敏感性和特異性較傳統(tǒng)的CSF檢查高，對MS早期診斷及療效觀察有重要的臨床價值。第21頁,共25頁，2024年2月25日，星期天此外，寡克隆區(qū)帶還有助于判斷預(yù)后，腦脊液寡克隆區(qū)帶陽性的臨床孤立綜合征(CIS)患者較陰性者更易進展為多發(fā)性硬化。OCB反映了MS患者中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)IgG發(fā)生質(zhì)的改變，是MS最常見的免疫學(xué)異常表現(xiàn)，也是MS最有價值的單項檢測，1983年以來已被國際MS