生物制品效力檢驗(yàn)

生物制品效力檢驗(yàn)

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四、效力檢驗(yàn)

獸醫(yī)生物制品的效力檢驗(yàn)?zāi)康脑谟谠u(píng)定制品的實(shí)際使用價(jià)值，如疫苗和類毒素的免疫力，血清的特異性抗體效價(jià)及其抗病效力，診斷試劑的特異性、靈敏性和檢出率等。

（一）效力檢驗(yàn)內(nèi)容

1.免疫原性菌(毒)種的免疫原性決定疫苗的免疫力，但在疫苗制造過程中由于處理不當(dāng)也會(huì)影響菌(毒)的免疫原性，從而影響疫苗的免疫效果。此外，有些疫苗株具有對(duì)多個(gè)血清型良好的免疫原性，而有些疫苗株則存在嚴(yán)格的特異免疫原性。

2.免疫產(chǎn)生期與持續(xù)期

疫苗的免疫產(chǎn)生期與持續(xù)期和菌(毒)株的性質(zhì)、抗原性有關(guān)。一般抗原性強(qiáng)的疫苗株對(duì)同源動(dòng)物的免疫產(chǎn)生期早而免疫持續(xù)期較長(zhǎng)。如兔出血癥組織滅活疫苗接種兔后3～4d即產(chǎn)生強(qiáng)免疫力，血清HI抗體滴度很高，免疫力可持續(xù)1年以上。通常可根據(jù)疫苗的免疫產(chǎn)生期與持續(xù)期制定出合理的免疫程序。

任何疫苗免疫動(dòng)物時(shí)均需要含有一定的抗原量，才能導(dǎo)致機(jī)體對(duì)其產(chǎn)生免疫應(yīng)答，從而形成免疫力，此種疫苗的抗原量即為疫苗的最小免疫量。最小免疫量通常以半數(shù)保護(hù)量(PD50)或半數(shù)免疫量(ImD50)表示。在側(cè)定時(shí)，應(yīng)以菌落單位(CFU)或空斑單位(PFU)作為疫苗分裝時(shí)的劑量單位，而不是以稀釋度為標(biāo)準(zhǔn)。

（二）效力檢驗(yàn)要點(diǎn)生物制品的效力檢驗(yàn)，多數(shù)采用動(dòng)物、培養(yǎng)或免疫血清學(xué)等方法進(jìn)行，少數(shù)(如診斷抗原)也可用化學(xué)方法檢查。

1.動(dòng)物保護(hù)力試驗(yàn)

動(dòng)物保護(hù)力試驗(yàn)為獸醫(yī)生物制品特別是疫苗類制品最常用的效力檢驗(yàn)方法，疫苗的免疫原性、免疫產(chǎn)生期與持續(xù)期、最小免疫量等都可通過動(dòng)物進(jìn)行檢測(cè)或測(cè)定。

各種制品所用的動(dòng)物種類、標(biāo)準(zhǔn)各不相同，或用敏感的等級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，或用同源動(dòng)物，通常在所用的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物難以判定時(shí)可允許用同源動(dòng)物重檢。動(dòng)物保護(hù)力試驗(yàn)方法很多，但大多采用攻毒方法，并設(shè)立對(duì)照動(dòng)物。

(1)定量免疫定量強(qiáng)毒攻擊法攻擊用的強(qiáng)毒量，通常都是實(shí)驗(yàn)資料，多為最小致死量的若干倍，不同動(dòng)物的強(qiáng)毒攻擊量也不同。一般在動(dòng)物經(jīng)免疫后2～3周，連同對(duì)照動(dòng)物用定量的強(qiáng)毒攻擊，然后以攻擊動(dòng)物的存活或不感染比例判定該制品的免疫效果(即保護(hù)力)。

例如在豬丹毒弱毒菌苗效力檢驗(yàn)時(shí)，以每只注射含有1000萬個(gè)豬丹毒弱毒菌苗的小鼠5只，在免疫14d后連同3只以上對(duì)照小鼠各攻擊1000個(gè)小鼠致死量的豬丹毒強(qiáng)毒菌，免疫鼠應(yīng)活存4/5以上，對(duì)照鼠應(yīng)全部死亡即可判定菌苗效力檢驗(yàn)合格。

(2)變數(shù)免疫定量強(qiáng)毒攻擊法

將疫苗作不同稀釋度并各免疫一定數(shù)量動(dòng)物，經(jīng)一定時(shí)間建立免疫后，各免疫組動(dòng)物連同對(duì)照動(dòng)物用同一劑量強(qiáng)毒攻擊，觀察一定時(shí)間后統(tǒng)計(jì)存活和死亡數(shù)，以統(tǒng)計(jì)學(xué)處理計(jì)算PD50。

例如，在雞新城疫油佐劑滅活疫苗效力檢驗(yàn)時(shí)，選擇3～4周齡敏感雞35只，以1/25、1/50、1/100稀釋疫苗0.5mL各皮下或肌肉注射10只雞，另5只為對(duì)照，3～5周后各肌肉注射105EID50。的新城疫強(qiáng)毒，觀察14d按每組的死亡數(shù)、對(duì)照組全死的結(jié)果計(jì)算出PD50。并規(guī)定該苗每一個(gè)使用劑量(0.5mL)的效價(jià)不低于50個(gè)PD50(3)定量免疫變量強(qiáng)毒攻擊法設(shè)免疫組與對(duì)照組動(dòng)物，各又分為動(dòng)物數(shù)量相等的小組。免疫組動(dòng)物用同一劑量制品免疫，經(jīng)一定時(shí)間建立免疫后與對(duì)照組動(dòng)物用不同稀釋度的強(qiáng)毒攻擊，觀察、計(jì)算、比較免疫組與對(duì)照組的存活率。按LD50計(jì)算，如對(duì)照組攻擊10-5稀釋度強(qiáng)毒有50%的動(dòng)物死亡，而免疫組動(dòng)物攻擊10-3稀釋度強(qiáng)毒動(dòng)物死亡50%，即免疫組動(dòng)物對(duì)強(qiáng)毒的耐受力比對(duì)照組高100倍，也就是免疫組有100個(gè)LD50保護(hù)力。目前，狂犬病疫苗的效力即按此方法檢驗(yàn)。(4)血清免疫抗體測(cè)定部分生物制品效力可用檢測(cè)免疫動(dòng)物血清中特異性抗體效價(jià)來衡量免疫力或效力。例如，抗炭疽血清效力檢驗(yàn)，給8只敏感豚鼠分別注射血清0.5ml與1.0ml，各4只，24h后，連同4只對(duì)