乳酸的分析與檢驗(yàn)

《生物產(chǎn)品的分析與檢驗(yàn)》有機(jī)酸的分析與檢驗(yàn)-----乳酸分析與測定主講教師：張惠1．乳酸的化學(xué)結(jié)構(gòu)2．乳酸的性質(zhì)3．乳酸的用途3．乳酸的測定方法（實(shí)訓(xùn)案例）以啤酒中乳酸含量的測定為實(shí)訓(xùn)案例，介紹酸堿滴定法和對(duì)羥基聯(lián)苯比色法測定乳酸含量的方法。主要內(nèi)容一、乳酸的性質(zhì)與結(jié)構(gòu)乳酸（lacticacid），又名α-羥基丙酸，2-羥基丙酸；丙醇酸；乳酸是一種含有羥基和羧基的有機(jī)酸，廣泛存在于人體、動(dòng)植物和微生物中；乳酸是食品工業(yè)中常用食物酸味劑和防腐劑，也是醫(yī)藥、化工等工業(yè)的重要原料。結(jié)構(gòu)簡式：CH3CH(OH)COOH，相對(duì)分子量為90.08，結(jié)構(gòu)式為：酸堿滴定法對(duì)羥基聯(lián)苯比色法測定啤酒中乳酸含量酸堿滴定法測定乳酸含量將試樣加入過量的NaOH標(biāo)準(zhǔn)溶液，加熱后使乳酸和乳酸干酐與堿反應(yīng)完全，冷卻后以酚酞作指示劑，用強(qiáng)酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定過量的堿。根據(jù)消耗的強(qiáng)酸標(biāo)準(zhǔn)溶液體積，可以求出乳酸的含量。（一）測定原理溶液的配制（1）1mol/L氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定液的配制與標(biāo)定（2）1mol/L硫酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制與標(biāo)定（3）1%酚酞指示劑的配制（4）溴甲酚綠混合指示液（二）操作步驟2.試樣中乳酸含量的測定稱取試樣1.5g(稱準(zhǔn)至0.0002g)于150mL的三角瓶中，加50ml新煮沸的冷蒸餾水，加40mL1mol/L氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液，煮沸5分鐘，加酚酞指示液2滴，趁熱用硫酸標(biāo)液（1mol/L）滴定，酚酞指示液變紅時(shí)停止滴定，記錄消耗硫酸標(biāo)液的體積數(shù)（mL），每1mL氫氧化鈉滴定液（0.1mol/L）相當(dāng)于90.08mg乳酸（C3H6O3）。用空白試驗(yàn)校正。（二）操作步驟（1）乳酸含量測定結(jié)果數(shù)據(jù)記錄如下表

測定次數(shù)測定內(nèi)容123硫酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度/mol/L

滴定管初始讀數(shù)/mL

滴定管終讀數(shù)/mL

試樣消耗硫酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積/mL

空白滴定消耗硫酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積/mL

乳酸含量，w，%

乳酸平均含量/%

相對(duì)平均偏差/%

（三）結(jié)果記錄與計(jì)算（2）乳酸含量測定結(jié)果計(jì)算公式：W—乳酸含量，%V1--試樣消耗硫酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積，mLV2--空白滴定消耗硫酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積，mLc--硫酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度，mol/Lm—稱取樣品質(zhì)量0.09008—與1mL硫酸標(biāo)準(zhǔn)溶液相當(dāng)?shù)囊院量吮硎镜娜樗豳|(zhì)量。（三）結(jié)果記錄與計(jì)算對(duì)羥基聯(lián)苯比色法測定乳酸含量在除去蛋白質(zhì)，葡萄糖等干擾物質(zhì)的啤酒中，乳酸在銅離子的催化下，與濃硫酸作用生成乙醛，乙醛能與對(duì)羥基聯(lián)苯作用生成在565nm處有特征吸收的紫紅色物質(zhì)，在一定范圍內(nèi)，乳酸濃度與波長為565nm的吸光度呈線性關(guān)系，因此可以通過測定565nm處的吸光度來測定乳酸的含量。（一）測定原理1.試劑無水乳酸鋰、對(duì)羥基聯(lián)苯、鎢酸鈉、硫酸銅、氫氧化鈣、濃硫酸、40%乙醛溶液、無水葡萄糖、蔗糖均為分析純?cè)噭?.主要溶液（1）鎢酸溶液（2）20%硫酸銅溶液（3）4%(W/V)硫酸銅溶（4）對(duì)羥基聯(lián)苯溶液（5）乳酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)存液(1mg/mL)（6）乳酸標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液(200μg/mL)（7）醛溶液(50μg/mL)（二）試劑與溶液1.樣品處理:取約3mL左右啤酒酒液，3000r/min離心5min，吸取上清液稀釋一定倍數(shù)后，吸取稀釋液2.00mL于潔凈離心管中，準(zhǔn)確加入2.00mL鎢酸溶液，混勻，室溫靜置至溶液有明顯絮狀物出現(xiàn)(約30~45min)，10000r/min離心10min，取上清液加入0.3g活性炭，反復(fù)搖后置室溫30min，過濾，濾液收集于5mL具塞試管中，60℃水浴保溫0.5h，冷卻待用。（三）操作步驟用200μg/mL乳酸標(biāo)準(zhǔn)使用液同樣品溶液（酒液）預(yù)處理后(可以不稀釋)，按下表1數(shù)量在預(yù)先編好號(hào)的試管中加入標(biāo)準(zhǔn)乳酸濾液和蒸餾水。2.標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制表1：乳酸標(biāo)準(zhǔn)液配制取酒液濾液按標(biāo)準(zhǔn)曲線的測定方法，以蒸餾水為空白測定其在560nm處的光吸收，所得數(shù)據(jù)在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得相應(yīng)的乳酸含量，即為酒液中的乳酸含量。酒液乳酸含