項(xiàng)目六 微生物菌種保藏技術(shù)

微生物技術(shù)生物工程學(xué)院任務(wù)一

微生物菌種保藏

項(xiàng)目六微生物菌種保藏技術(shù)

教學(xué)目標(biāo)能力目標(biāo)知識(shí)目標(biāo)素質(zhì)目標(biāo)會(huì)誘變育種準(zhǔn)備操作；能誘變育種的控制過(guò)程；會(huì)誘變后菌種的篩選

；會(huì)菌種的保藏操作

；了解誘變的原理

；掌握誘變劑的種類(lèi)；掌握誘變濃度的選擇

；掌握菌種保藏的原理

；誘變過(guò)程控制；菌種保藏過(guò)程?！鞍咐苯虒W(xué)法。“行動(dòng)導(dǎo)向”教學(xué)法。“演示性”教學(xué)法?！耙龑?dǎo)-自主學(xué)習(xí)”教學(xué)法。24教學(xué)方法13菌種保藏過(guò)程重點(diǎn)難點(diǎn)設(shè)置情境---引出課堂任務(wù)案例一：某生物制品企業(yè)現(xiàn)要保存一批大腸桿菌生產(chǎn)菌種，保藏期為一年以上，假設(shè)你是該企業(yè)菌種庫(kù)的人員，請(qǐng)選擇合適的保藏方法并實(shí)施。學(xué)生根據(jù)學(xué)習(xí)材料進(jìn)行討論設(shè)計(jì)方案.1教師邊演示菌懸液制備和凍干過(guò)程及其注意事項(xiàng)，邊講解冷凍真空干燥菌種保藏原理等。教師示范和講解1訓(xùn)練任務(wù)2分組操作：先制備菌懸液后進(jìn)行凍干，教師根據(jù)學(xué)生出現(xiàn)的問(wèn)題進(jìn)行有側(cè)重點(diǎn)的示教操作步驟，指出并解釋操作中的重點(diǎn)和難點(diǎn)。學(xué)生再練習(xí)，教師巡回指導(dǎo)，糾正學(xué)生操作上的錯(cuò)誤，并隨時(shí)解答學(xué)生的疑難問(wèn)題。（隨堂打分：自我學(xué)習(xí)能力及操作技能。）

結(jié)果展示教師點(diǎn)評(píng)并依據(jù)評(píng)價(jià)指標(biāo)進(jìn)行評(píng)價(jià)

歸納總結(jié)學(xué)生代表概括知識(shí)點(diǎn)和操作注意事項(xiàng)34設(shè)置情境---引出課堂任務(wù)案例二：我們?cè)趯?shí)驗(yàn)室液體培養(yǎng)了1罐（5L）沙門(mén)氏菌菌種，請(qǐng)你設(shè)計(jì)一菌種保藏方案并實(shí)施，以達(dá)到方便保存、保藏期在3-6個(gè)月的目的。。

學(xué)生學(xué)習(xí)材料討論設(shè)計(jì)方案1教師邊演示菌種保藏和注意事項(xiàng)，邊講解斜面菌種保藏原理等。教師示范和講解2學(xué)生分組練習(xí)任務(wù)，教師巡回指導(dǎo)。同時(shí)對(duì)每個(gè)學(xué)生進(jìn)行過(guò)程考核和結(jié)果考核。學(xué)生練習(xí)任務(wù)3歸納總結(jié)教師引導(dǎo)學(xué)生總結(jié)主要知識(shí)點(diǎn)和操作關(guān)鍵。41、準(zhǔn)備斜面培養(yǎng)基；2、無(wú)菌劃線(xiàn)接種上述斜面上；3、將上述斜面放到37℃培養(yǎng)。4、將長(zhǎng)旺盛的菌種于4℃保藏。

沙門(mén)氏菌的菌種保藏保藏：將有用的微生物以特定培養(yǎng)形態(tài)在特定的環(huán)境條件下存放，以保持種的存活、純粹和遺傳性狀的穩(wěn)定。一、條件及原理

1.

低營(yíng)養(yǎng)2.

干燥3.隔氧4.低溫降低代謝速率或使細(xì)胞處于休眠狀態(tài)5.密封保持干燥、隔氧。菌種保藏原理1單純傳代保存法（斜面或穿刺）保存期3-6個(gè)月，適用于細(xì)菌或酵母。2結(jié)合單孢子分離的傳代保存法3-6個(gè)月適用于遺傳不穩(wěn)定的菌種,既保藏了菌種，又保持了生產(chǎn)能力。3米孢子保存密封，4℃冰箱3-6個(gè)月；真空抽干后密封，保藏6-12個(gè)月。適用于霉菌的保藏。常用的保藏方法4沙土管保存

4℃冰箱保存，1-3年保存期。適用于霉菌、放線(xiàn)菌和形成芽孢的細(xì)菌的保藏5孢子或營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞懸浮液保存懸浮于滅菌的10%-20%甘油介質(zhì)，低溫冰箱（-50--70℃）1-2年。

6冷凍干燥管保存（lyophilizationfreeze-drying)

收集菌種滅菌脫脂牛奶或馬血清作為懸浮介質(zhì)

滅菌安瓿管預(yù)凍真空凍干密封，

4℃冰箱，保存3-5年適用于一切微生物的保存細(xì)胞10%-20%甘油作為懸浮介質(zhì)分裝入無(wú)菌聚丙烯管預(yù)凍置液氮內(nèi)（-196℃），保存5-10年適用于所有微生物、動(dòng)物和植物細(xì)胞的保存7液氮管保存(storageinliquidnitrogen)設(shè)置情境---引出課外任務(wù)案例二：我們?cè)趯?shí)驗(yàn)室液體培養(yǎng)了1罐（5L）發(fā)面用啤酒酵母菌種，請(qǐng)你設(shè)計(jì)一菌種保藏方案并實(shí)施，以達(dá)到方便保存、保藏期在一年以上的目的。訓(xùn)練任務(wù)1分組操作：接種酵母與液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)，教師根據(jù)學(xué)生出現(xiàn)的問(wèn)題進(jìn)行有側(cè)重點(diǎn)的示教操作步驟，指出并解釋操作中的重點(diǎn)和難點(diǎn)。學(xué)生再練習(xí)，教師巡回指導(dǎo)，糾正學(xué)生操作上的錯(cuò)誤，并隨時(shí)解答學(xué)生的疑難問(wèn)題。（隨堂打分：自我學(xué)習(xí)能力及操作技能。）1、準(zhǔn)備液體培養(yǎng)基；2、無(wú)菌接種液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)，鏡檢確認(rèn)符合要求；3、向上述菌液加入15～20％的無(wú)菌甘油，混勻取1～2ml上述混合物，置無(wú)菌離心管內(nèi)。4、進(jìn)行必要的標(biāo)識(shí)置低溫冰箱中。酵母菌菌種保藏

結(jié)果展示教師點(diǎn)評(píng)并依據(jù)評(píng)價(jià)指標(biāo)進(jìn)行評(píng)價(jià)

歸納總結(jié)學(xué)生代表概括知識(shí)點(diǎn)和操作注意事項(xiàng)34布置課外任務(wù)：案例三實(shí)際任務(wù)的完成和拓展知識(shí)的學(xué)習(xí)！設(shè)置情境---引出課外任務(wù)案例三：假設(shè)你是發(fā)酵企業(yè)的員工，要求將啤酒酵母保藏3-6個(gè)月，請(qǐng)你設(shè)計(jì)一菌種保藏方案并實(shí)施。案例四：濱州市食用菌企業(yè)技術(shù)員買(mǎi)來(lái)一試管食用菌菌種，為保證該管菌種能滿(mǎn)足半年的生產(chǎn)需要，技術(shù)員應(yīng)怎樣擴(kuò)繁、保藏菌種？