從環(huán)境中分離酵母菌實驗設(shè)計案

/實驗設(shè)計方案從環(huán)境中分離酵母菌班級：10級生科（2）班組員:劉楠楠:2潘婷:2李煒昊：2馬森:2實驗：從環(huán)境中分離出酵母菌實驗設(shè)計方案采樣采樣的理由：酵母菌與人類的關(guān)系密切酵母菌是一類單細胞真菌的俗稱，分類學(xué)上分屬于子囊菌綱半知菌類特征:

1.

個體一般以單細胞狀態(tài)存在；

2.

多數(shù)營出芽生殖，有的裂殖；

3.

能發(fā)酵糖類產(chǎn)能；

4.

細胞壁常含有甘露聚糖；

5.

喜在含糖量較高、酸度較大的水生環(huán)境中生長。酵母菌分布：主要生長在偏酸的含糖環(huán)境中，在水果、蜜餞的表面和果園土壤中最為常見。種類：據(jù)1982年的資料，已知的酵母有56屬，500多種。酵母菌與人類的關(guān)系極其密切。千百年來，人類幾乎天天離不開酵母菌，例如酒類的生產(chǎn)，面包的制作，乙醇和甘油發(fā)酵，石油及油品的脫蠟，飼用、藥用等的生產(chǎn)。酵母菌細胞的形態(tài)和構(gòu)造電子顯微鏡下的釀酒酵母細胞結(jié)構(gòu)示意圖細胞直徑比細菌粗10倍左右，如Saccharomycescerevisiae細胞的寬度為2.5~10μm，長度為4.5~21μm。因此在光學(xué)顯微鏡下可以模糊地看到它們細胞內(nèi)的各種結(jié)構(gòu)分化。酵母菌細胞的形態(tài)通常有球狀、卵圓狀、橢圓狀、柱狀或香腸狀等多種。細胞壁：酵母細胞壁呈“三明治”結(jié)構(gòu)外層：甘露聚糖（約占30%，以α-糖苷鍵聯(lián)結(jié)（并非所有酵母菌都有）內(nèi)層：葡聚糖（約占30-40%，由D-葡萄糖以β-糖苷鍵聯(lián)結(jié)）中間層：蛋白質(zhì)（含6-8%，多為酶類）細胞膜：酵母菌的細胞膜與原核生物的基本相同。但有的酵母菌如釀酒酵母中含有固醇類（甾醇）、VitD的前體麥角固醇，這在原核生物是罕見的。細胞核:核膜：核孔40～70nm，透性比任何生物膜都大。染色體:由DNA和組蛋白牢固結(jié)合而成，呈線狀,數(shù)目因種而異。核仁：核內(nèi)有一或幾個區(qū)域rRNA含量很高，這一區(qū)域為核仁，是合成核糖體的場所。中心體:在核膜外，由蛋白質(zhì)亞基組成的細絲狀結(jié)構(gòu)，在細胞繁殖分裂中起作用。細胞核的功能:攜帶遺傳信息，控制細胞的增殖和代謝。酵母菌的繁殖方式大而厚，圓形，光滑濕潤，粘性，顏色單調(diào)。常見白色、土黃色、紅色。采樣的方法：原理：大多數(shù)酵母菌為腐生，，常見于含糖分較高的環(huán)境中，例如果園土、菜地土及果皮等植物表面。故可以從甘蔗、成熟葡萄或蘋果等果皮上取樣。利用酵母菌喜歡酸性環(huán)境的特點，常用酸性液體培養(yǎng)基獲得酵母菌的培養(yǎng)液（這樣做的好處是酸性培養(yǎng)條件則可抑制細菌的生長）實驗材料和用具1、蘋果果皮、0.1%美藍染液、1ml的無菌吸管、無菌培養(yǎng)皿等。2、豆芽汁葡萄糖培養(yǎng)基原料：黃豆芽（100克）、葡萄糖（50克）、蒸餾水（1000ml），自然PH配制方法：陳新鮮豆芽100克，放入燒杯中，加水1000ml,煮沸約30min，用紗布過濾，用水補足原量，再加入葡萄糖50克，煮沸融化，121℃實驗步驟l、接種：取一小塊果皮，不需沖洗，直接接入到豆芽汁葡萄糖培養(yǎng)液試管中，置28一30℃，培養(yǎng)24小時2、培養(yǎng)，用無菌吸管取上述培養(yǎng)后培養(yǎng)液0.lml，注入另一管乳酸馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)液中，置28一30℃3、觀察：用無菌操作法取少許菌液置于載玻片中央的0.l%美藍染色液中，混勻后加蓋玻片制成水浸片，先用低倍鏡后換高倍鏡觀察酵母菌的形態(tài)和出芽生殖情況。4、活酵母菌可使美藍還原，從而使菌體不著色，用此方法可判斷酵母菌的死活。芽殖過程：母細胞形成小突起（A—D）核裂（E—G）原生質(zhì)分配（H—I）新膜形成（J—K）形成新細胞壁（L）二、分離原理：馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基溶化后制成平板。用劃線法分離酵母菌培養(yǎng)液，從而得到單個菌落。挑取單個菌落反復(fù)再次劃線分離純化，最終可獲得純培養(yǎng)。培養(yǎng)基的設(shè)計：馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基：原料：馬鈴薯（200克）、葡萄糖（20克）、瓊脂（15-20克）、蒸餾水（1000ml），自然PH配制方法：將馬鈴薯去皮后，切片，加水煮爛（煮沸20—30分鐘，能被玻璃棒戳破即可），用4層紗布過濾，再加入糖和瓊脂，加熱融化后再補足水分至1000ml,并在121攝氏度條件下高壓滅菌20分種。方法:平板劃線法鑒定原理：大多數(shù)酵母菌的菌落特征與細菌相似，但比細菌菌落大而厚，菌落表面光滑、濕潤、粘稠，容易挑起，菌落質(zhì)地均勻，正反面和邊緣、中央部位的顏色都很均一，菌落多為乳白色，少數(shù)為紅色，個別為黑色。啤酒酵母的菌落紅酵母的菌落各種酵母菌的菌落。方法:制玻片并在顯微鏡下觀察其形態(tài)四、實驗的過程記錄及其結(jié)果、結(jié)果分析日期2012/5/272012/2012/2012/2012/6/記錄配制豆芽汁葡萄糖培養(yǎng)液，并接種，用的材料是成熟的蘋果皮。在28℃的環(huán)境下培養(yǎng)了24小時，觀察現(xiàn)象，培養(yǎng)液變渾濁。配制豆芽汁培養(yǎng)基，進一步進行培養(yǎng)。1.取菌液制片并滴加少許的美藍染液，用顯微鏡觀察，酵母菌大部分為活的，且處于母細胞形成小突起階段。2.配制馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，用劃線法分離酵母菌1.觀察培養(yǎng)基上的菌落，菌落表面光滑、濕潤，容易挑起，菌落的質(zhì)地很均勻，為乳白色。初步斷定分離純化出來的是酵母菌。2.鏡檢，在顯微鏡下觀察大部分酵母菌處于核裂階段，少數(shù)處于新膜形成階段?？蓴喽榻湍妇?、結(jié)果及結(jié)果分析:在本實驗中，我們的最根本目的是從環(huán)境中分離出酵母菌，依據(jù)酵母菌的特性，我們選擇從成熟的蘋果皮中提取，依據(jù)酵母菌的形態(tài)、菌落特征我們進行了鑒定，最終在經(jīng)過六天的實驗后從環(huán)境中提取出了酵母菌，但在實驗的過程中所提取出來的酵母菌的量不多，分析原因大概有如下兩點:1.蘋果皮在接種前洗過，把一些菌洗掉了。2.接種時，接種的量不足，導(dǎo)致后續(xù)的培養(yǎng)出來的量也不足。六、實驗感想：此次實驗是由四人的一個小組合