臨檢血液概述采血抗凝劑概要

臨檢血液概述采血抗凝劑概要臨檢血液概述采血抗凝劑概要1臨床檢驗基礎是采用各種實驗室檢查方法和技術，對來自機體的血液、尿液、糞便以及分泌物和排泄物等標本進行一般性狀觀察，理學、化學、免疫學、病原學和顯微鏡等檢查，為疾病篩查和診斷提供簡便、快速的檢測結果。22021/1/12臨床檢驗基礎是采用各種實驗室檢查方法和技術，對來自機體的血2第一節(jié)概述血液生理概要標本采集、送檢、保存與處理

標本抗凝

血涂片的制備血細胞染色方法血細胞顯微鏡計數(shù)法32021/1/12第一節(jié)概述血液生理概要標本采集、送檢、保存與處理3教學目標掌握：

血液標本采集的方法及評價，抗凝劑的選擇應用，血涂片制備方法和染色原理，血細胞顯微鏡計數(shù)方法。熟悉：

血液生理概述和標本保存。42021/1/12教學目標掌握：42021/1/124一血液生理概要1.血液的組成血漿：血液加抗凝劑后分離出來的液體部分。血清：血液離休后自然凝固分離出來的液體。45%血塵55%8－9%91－92%52021/1/12一血液生理概要1.血液的組成45%血塵55%8－9%91－52.血液的理化性質(zhì)血量：正常人血液量70±10ml/kg體重，成人4~5L，占體重的6%~8%。顏色：動脈血鮮紅色HbO2↑靜脈血暗紅色Hbred↑貧血病人紅色變淺CO、氰化物中毒櫻紅色紅細胞懸浮穩(wěn)定性唾液酸根形成Zeta電位

62021/1/122.血液的理化性質(zhì)62021/1/126黏滯性血細胞比容（紅細胞數(shù)量）血漿粘度（血漿蛋白濃度）比密血液比密與紅細胞相關男1.055~1.063女1.051~1.060血漿比密與血漿蛋白相關1.025~1.030滲透壓血漿滲透壓290~310mOsm/（kg?H2O）PH7.35~7.45凝固性凝血因子激活

72021/1/12黏滯性血細胞比容（紅細胞數(shù)量）72021/1/1273.血液的功能運輸功能協(xié)調(diào)功能維持內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定防御功能82021/1/123.血液的功能82021/1/128二、血標本的采集??、送檢、保存與處理（一）血標本的采集

采血靜脈采血毛細血管采血普通采血法真空采血法92021/1/12二、血標本的采集??、送檢、保存與處理（一）血標本的采集采9

靜脈采血法(venipunctureforbloodcollection)凡需血量較多的檢查＞0.5ml如：ESR、Hct、凝血因子的測定等。[部位]淺表靜脈均可,常用肘部靜脈，不明顯時可用手背、踝部，幼兒可用頸外靜脈。[體位]坐位或臥位[捆扎時間]＜1min102021/1/12靜脈采血法10112021/1/12112021/1/1211二、靜脈采血法【采血方法】準備→選擇靜脈→消毒→扎壓脈帶→穿刺、松壓脈帶→抽血→拔針止血→注入試管。如以下視頻所示122021/1/12二、靜脈采血法【采血方法】122021/1/1212靜脈采血法132021/1/12靜脈采血法132021/1/1213普通采血法1.避免溶血,器具干燥,避免氣泡2.先拔針頭,再緩緩注入試管3.與抗凝劑混勻時輕輕顛倒4.嚴格消毒5.抽血時只能外抽不能內(nèi)推142021/1/12普通采血法1.避免溶血,器具干燥,避免氣泡142021/1/14真空采血法（40年代，美國BD公司）

套筒式和頭皮靜脈式兩種優(yōu)點：

血樣無需容器之間的轉移，減少溶血現(xiàn)象，保持

血液標本的完整性，使檢驗結果更加準確，也有利于防止醫(yī)院內(nèi)血源性傳染病的交叉感染和環(huán)境

保護。缺點：

真空采血管價格較高注意:采血后,先拔下刺塞針端的采血試管,后拔穿刺針。152021/1/12真空采血法（40年代，美國BD公司）

套筒式和頭皮靜脈式兩種15I.采血針2008-10-21162021/1/122008-10-21162021/1/1216II.持針器2008-10-212008-10-21172021/1/12II.持針器2008-10-212008-10-2117217

III.真空采血管2008-10-21182021/1/12III.真空采血管2008-10-21182021/1/118192021/1/12192021/1/1219

血量＜0.1ml的檢驗項目：RBC計數(shù)、WBC計數(shù)、BPC計數(shù)、Hb測定等

毛細血管采血法Skinpunctureforbloodcollection202021/1/12毛細血管采血法Skin20[采血部位]WHO推薦采取毛細血管血以左手中指或無名指指尖內(nèi)側為宜1手指采血：

優(yōu)點：方便→獲較多血量→檢查結果比較恒定缺點：與靜脈血仍在某些差異。2耳垂采血：

優(yōu)點：痛感輕→方便→適用于反復采集

缺點：血循環(huán)差→受氣溫影響大檢查結果不恒定

RBC、WBC、Hb、Hct結果均比靜脈血高，特別是冬季。212021/1/12[采血部位]212021/1/12213、其他部位：拇指、拇趾或足底外側緣采血——半歲以下嬰幼兒皮膚完整處——嚴重燒傷者[采血針]三棱針或?qū)Ｓ玫摹安裳槨睘楹?，使用前者應高壓滅菌，一人一針?22021/1/123、其他部位：[采血針]222021/1/12222008-10-21232021/1/122008-10-21232021/1/1223242021/1/12242021/1/1224[注意事項]1、采血部位皮膚完整。2、無菌技術操作：防采血部位感染，一人一針防肝炎、艾滋病。3、采血針刺入皮膚應深淺適中。4、多項檢查時，采血次序為：BPC計數(shù)→RBC計數(shù)、Hb測定→WBC計數(shù)與分類。5、取血用于自動化血細胞分析儀，要防止棉球纖維混入堵塞儀器。252021/1/12[注意事項]252021/1/1225兩種采血方法的優(yōu)缺點比較毛細血管采血靜脈采血缺點限制了重復實驗和追加實驗，標本量少，局部炎癥可得假結果，組織液可混入不同抗凝劑的使用，改變血液性質(zhì)，影響有形成分的形態(tài)優(yōu)點價廉、快速、操作簡便，標本可直接測定標本代表性大，無組織液影響，適于臨床研究，可重復實驗和追加其他實驗262021/1/12兩種采血方法的優(yōu)缺點比較毛細血管采血靜脈采血缺點限制了重復實26

1.血標本運輸2.血標本保存3.檢驗后標本處理

（二）血液標本運輸、保存與處理272021/1/12（二）血液標本運輸、保存與處理272021/1/1227

三、血標本的抗凝1、枸櫞酸鈉（檸檬酸鈉）a.抗凝原理：螯合鈣離子使用方法配成109mmol/L的濃度和血液1：9

配成105mmol/L的濃度和血液1：4

化學名：3-羥基-3-羧基戊二酸（三鈉鹽）c.適用范圍：止血學檢驗、血沉、輸血保養(yǎng)液（毒性小）d.不適用于：血細胞計數(shù)282021/1/12三、血標本的抗凝1、枸櫞酸鈉（檸檬酸鈉）a.282.乙二胺四乙酸（EDTA）鹽a.抗凝原理：螯合鈣離子b.使用方法：15g/L濃度EDTA和血液1：10適用范圍：對血細胞形態(tài)影響小,適合血常規(guī)檢查、Hct不適用于：影響血小板聚集和凝血因子功能,不宜凝血因子檢查和血小板功能試驗。292021/1/122.乙二胺四乙酸（EDTA）鹽a.抗凝原理：293.肝素（含硫酸基團的粘多糖）抗凝原理：低濃度時抑制因子Ⅸa、Ⅷ和PF3之間的作用，加強抗凝血酶Ⅲ滅活絲氨酸蛋白酶，從而阻止凝血酶形成，還能抑制凝血酶的自我催化及抑制因子Ⅹ的作用；高濃度時阻斷凝血酶和纖維蛋白的反應。

b.適用方法：1g/L濃度的肝素鈉與血液1：10302021/1/123.肝素（含硫酸基團的粘多糖）抗凝原理30優(yōu)點：抗凝能力強、不影響血細胞體積、不易溶血、能耐高溫。適用范圍：紅細胞檢驗（紅細胞計數(shù)、血紅蛋白測定、紅細胞比積）和多種生化分析e.不適用于：

WBC和BPC計數(shù)、血涂片檢查、凝血功能檢驗。312021/1/12優(yōu)點：抗凝能力強、不影響血細胞體積、不易適用范圍：紅細胞檢驗314.草酸鈉（乙二酸的鈉鹽）a.抗凝原理：草酸鈣沉淀b.使用方法：草酸鈉0.1mol/L和血液1：9c.適用范圍：止血學檢驗。d.不適用于：對凝血因子V保護功能差，影響PT測定；沉淀物影響自動凝血儀的使用。322021/1/124.草酸鈉（乙二酸的鈉鹽）a.抗凝原理：草酸鈣沉淀b325.雙草酸鹽抗凝劑

a.抗凝原理：草酸鈣沉淀使用方法：草酸鉀0.8g,草酸銨1.2g（100ml）與血液1：10（80°C以下烘干）適用范圍：紅細胞檢驗（紅細胞比積、計數(shù)）

d.不適于:血小板計數(shù)和白細胞分類計數(shù),電解質(zhì)測定332021/1/125.雙草酸鹽抗凝劑a.抗凝原理：草酸鈣33

物理方法抗凝

脫纖維蛋白：

將血液注入有玻璃珠的器皿中，轉動，纖維蛋白纏繞凝固于玻璃球，使血液不能凝固。適用于免疫學檢驗和紅斑

性狼瘡細胞檢查。342021/1/12物理方法抗凝342021/1/1234小結血液是由血細胞和血漿組成的紅色、粘稠、不透明、帶腥味的混懸液。凡需血液量較少的檢驗項目，常用皮膚采血法，通常采手指血。采血時要注意采血部位要無病變，要擦去第一滴血，不能用力擠壓。凡需血液量較多的檢驗項目，要用靜脈采血法，其采血部位常用肘前靜脈。如需要抗凝抗凝血標本時，則需要根據(jù)檢驗項目的要求，采用枸櫞酸鈉、乙二胺四乙酸鹽和肝素等抗凝劑來阻止血液凝固。352021/1/12小結血液是由血細胞和血漿組成的紅色、粘稠、35362021/1/12362021/1/1236請您練習答案:皮膚采血法用注意什么問題?

①所選擇采血部位的皮膚應完好。②嚴格消毒皮膚，防止采血部位感染。③皮膚消毒后，待乙醇揮發(fā)干后再刺針。④如血流不暢，切不可用力擠壓勉強采血，而應重新針刺。⑤出血不止時，可用消毒干棉球壓迫至血不再流出為止，必要時應在報告單上注明，提醒臨床醫(yī)生注意。⑥進行多項細胞檢查要分項采血時，采血的次序為：血小板計數(shù)、紅細胞計數(shù)、白細胞計數(shù)。372021/1/12請您練習答案:皮膚采血法用注意什么問題?①所選擇采血部位的37請您練習請說出靜脈采血的步驟？答案:準備→選擇靜脈→消毒→扎壓脈帶→穿刺、松壓脈帶→抽血→拔針止血→注入試管。382021/1/12請您練習請說出靜脈采血的步驟？答案:準備→選擇靜脈→消毒→扎38請您練習答案:請說出枸櫞酸鈉的抗凝原理、用途及其用量？枸櫞酸鈉能與血液中的鈣離子形成可溶性的螯合物，使Ca2+失去凝血作用，從而阻止血液凝固。主要用于血沉、凝血象和血小板功能檢查。凝血象檢查常用0.109mol/L的水溶液，與血液之比通常為1：9。魏氏法血沉測定用濃度為0.105mol/L，與血液比例為1:4（V：V）。392021/1/12請您練習答案:請說出枸櫞酸鈉的抗凝原理、用途及其用量？枸櫞酸39請您練習請將下列抗凝方法和適宜的項目用線連接起來。枸櫞酸鈉血細胞比容測定乙二胺四乙酸鹽紅斑狼瘡細胞的檢驗肝素凝血象脫纖維法一般血液學檢查402021/1/12請您練習請將下列抗凝方法和適宜的項目用線連接起來。4020240教學目標1.敘述載玻片的清潔方法、血涂片的制備方法及合格血片的標準。2.闡述瑞氏染色的原理、染液成分、染色方法、注意事項和染色結果的判斷。3.知道吉姆薩染色法和混合染色法。412021/1/12教學目標1.敘述載玻片的清潔方法、血涂片的制備方法及合格血片41良好血涂片的標準厚薄適宜,頭體尾分明，細胞分布均勻,血膜邊緣整齊兩側兩端留有空隙良好血涂片尾體頭422021/1/12良好血涂片的標準厚薄適宜,頭體尾分明，良42四血涂片的制備血涂片染色顯微鏡檢查用途：細胞形態(tài)檢查，細胞數(shù)量評估，網(wǎng)織紅、異常細胞、寄生蟲檢驗。血膜過厚：細胞重疊縮小血膜過?。杭毎植疾粍?，白細胞多集中于邊緣432021/1/12四血涂片的制備血涂片染色顯微鏡檢查用途：細胞形態(tài)檢查，細胞431.玻片清潔：

a新玻片處理：用鹽酸浸泡24小時。

b用過玻片處理：用洗滌劑清洗。

c使用中玻片處理：只能持玻片邊緣，保持清潔、干燥、中性、無油膩。442021/1/12442021/1/1244操作推片載玻片25°--30°30°--45°血液推玻片載玻片制備過程：452021/1/12操作推片載玻片25°--30°30°--45°血液45角度大角度大速度快血膜厚血滴過大,血膜過厚造成血膜厚的原因示意圖462021/1/12角度大角度大速度快血膜厚血滴過大,血膜過厚造成血膜46造成血膜薄的原因示意圖角度小血滴小血膜薄角度小速度慢血膜薄<25°472021/1/12造成血膜薄的原因示意圖角度小血滴小血膜薄角度小速度慢47血膜分布不均：主要由于以下原因所致:推片用力不均,血膜成厚薄相間的梯形玻片不清潔有油跡血膜出現(xiàn)空泡區(qū)推片邊緣不齊血膜出現(xiàn)線條樣缺損482021/1/12血膜分布不均：主要由于以下原因所致:48堿性染料：為陽離子染料，能接受質(zhì)子，染細胞核的染料。如亞甲藍、天青。酸性染料：為陰離子染料，能釋放質(zhì)子。主要有熒烷-氧雜蒽染料和偶氮染料兩類，能結合細胞的堿性成分并染色，如血紅蛋白、嗜酸性顆粒成分等。3.復合染料：同時具有陰、陽離子型的染料如瑞氏染料（一）染料（天然染料和人工染料）

發(fā)色基團和助色基團使生物學染色劑產(chǎn)生顏色和被染組織親合。五細胞常用的染色方法492021/1/12堿性染料：為陽離子染料，能接受質(zhì)子，染細胞核酸性染料：為陰離49（二）細胞染色原理：1.物理作用：毛細管現(xiàn)象、滲透、吸收、吸附作用等化學作用：a.染料的化學成分：助色基團的存在，堿性染料在溶媒中為陽離子型，易與組織和細胞內(nèi)帶負電荷的酸性物質(zhì)結合；而酸性染料在溶媒中為陰離子型，與帶正電荷的堿性物質(zhì)結合。502021/1/12（二）細胞染色原理：1.物理作用：毛細管現(xiàn)象、滲透、吸收50瑞氏染色法（一）染色原理分兩相進行，第一相是酸性伊紅與細胞中的堿性物質(zhì)如血紅蛋白、嗜酸性顆粒結合；堿性亞甲藍與細胞中的酸性物質(zhì)如核染色質(zhì)、嗜堿性顆粒、血小板結合。第二相是亞甲藍和伊紅結合在適宜條件下形成紫色的亞甲藍-伊紅復合物，結果使白細胞核染色質(zhì)成紫色（瘧原蟲的染色質(zhì)成紅色），中性粒細胞的顆粒及血小板顆粒區(qū)成紫色。512021/1/12瑞氏染色法（一）染色原理512021/1/1251

b.蛋白質(zhì)的化學性質(zhì)：蛋白質(zhì)中的氨基酸含有不同數(shù)量的氨基（-NH2）和羧基（-COOH），同時還有其他活性基團。在游離狀態(tài)時，-NH2獲得一個H+變成帶正電的-NH3+，而-COOH失去一個H+變成帶負電的-COO-。分別與不同染料結合。

c.周圍環(huán)境的酸堿度：

如環(huán)境pH＜pI（pI為等電點），則蛋白質(zhì)帶正電，結合酸性

染料；反之，pH＞pI，則結合堿性染料。

PH↓→H＋增多→易與伊紅結合→染色偏紅PH↑→H＋減少→易與美藍結合→偏藍522021/1/12b.蛋白質(zhì)的化學性質(zhì)：c.52

（二）試劑

1.Wright染液瑞氏染粉0.1g,甲醇60.0ml

磷酸鹽緩沖液（PBS）：（PH6.4－6.8）磷酸二氫鉀（無水）0.3g，磷酸氫二鈉（無水）0.2g,蒸餾水加到1000ml。配好后用磷酸鹽溶液校正pH，塞緊瓶口備用。532021/1/12（二）試劑磷酸鹽緩沖液（PBS）：（PH6.4－6.531233.染色方法：a.用蠟筆在血膜兩頭劃線，平放于染色架上。b.加瑞氏染液覆蓋血膜，固定1min。c.滴加等量或稍多的緩沖液，混勻，染色5-10分鐘。d.用清水沖洗，待干后鏡檢。542021/1/121233.染色方法：542021/1/1254注意事項：

a.血膜要干透后