基因工程復(fù)習(xí)題

其次章《基因工程》復(fù)習(xí)題一、選擇題1.限制性核酸內(nèi)切酶是由細菌產(chǎn)生的，其生理意義是（D）A修復(fù)自身的遺傳缺陷 B促進自身的基因重組C強化自身的核酸代謝 D提高自身的防衛(wèi)實力2.生物工程的上游技術(shù)是（D）A基因工程與分別工程 B基因工程與發(fā)酵工程C基因工程與細胞工程 D基因工程與蛋白質(zhì)工程3.基因工程操作的三大基本元件是:(I供體受體載體抗體V配體)（A）A.I++B.I++C.++D.++V4.多聚接頭（）指的是（A）A.含有多種限制性內(nèi)切酶識別與切割依次的人工片段B.含有多種復(fù)制起始區(qū)的人工片段C.含有多種依次的人工片段D.含有多種啟動基因的人工片段5.下列五個片段中含有回文結(jié)構(gòu)的是（D）A. B.C. D.6.若將含有5'末端4堿基突出的外源片段插入到含有3'末端4堿基突出的載體質(zhì)粒上，又必需保證連接區(qū)域的堿基對數(shù)目既不增加也不削減，則需用的工具酶是（D）IT4聚合酶T4連接酶堿性磷酸單酯酶A.B.I+C.+D.I++7.下列有關(guān)連接反應(yīng)的敘述，錯誤的是（A）A.連接反應(yīng)的最佳溫度為37℃B.連接反應(yīng)緩沖體系的甘油濃度應(yīng)低于10%C.連接反應(yīng)緩沖體系的濃度不能高于1D.連接酶通常應(yīng)過量2-5倍8.T4連接酶是通過形成磷酸二酯鍵將兩段片段連接在一起，其底物的關(guān)鍵基團是（D）A.2'和5'–P B.2'和3'C.3'和5'–P D.5'和3'9.載體的功能是(I運輸外源基因高效進入受體細胞為外源基因供應(yīng)復(fù)制實力為外源基因供應(yīng)整合實力)（D）A.I B.I+ C.+ D.I++10.克隆菌擴增的目的是(I增殖外源基因拷貝表達標(biāo)記基因表達外源基因)（D）A.I+ B.I+ C.+ D.I++11.下列各組用于外源基因表達的受體細胞與其特點的對應(yīng)關(guān)系中，錯誤的是（C）A.大腸桿菌－繁殖快速 B.枯草桿菌－分泌機制健全C.鏈霉菌－遺傳穩(wěn)定 D.酵母菌－表達產(chǎn)物具有真核性12.考斯質(zhì)粒（）是一種（B）A.自然質(zhì)粒載體B.由λ的區(qū)與一質(zhì)粒重組而成的載體C.具有溶原性質(zhì)的載體D.能在受體細胞內(nèi)復(fù)制并包裝的載體13.某一重組（6.2）的載體部分有兩個酶切位點。用酶切后凝膠電泳上出現(xiàn)四條長度不同的帶子，其長度總和與已知數(shù)據(jù)吻合，該重組分子插入片段上的酶切位點共有（D）A.4個 B.3個 C.2個 D.至少2個14.外源基因在大腸桿菌中以融合蛋白的形式表達的優(yōu)點是(I融合基因能穩(wěn)定擴增融合蛋白能抗蛋白酶的降解表達產(chǎn)物易于親和層析分別)（D） B.I+ C.I+ D.+15.提高重組率的方法包括(I加大外源與載體的分子之比載體分子除磷連接酶過量延長連接反應(yīng)時間)（A）A.I+ B.I++ C.I++ D.++16.識別基因序列不同，但酶切后產(chǎn)生的粘性末端相同的一類酶為（B）A.同工酶B.同尾酶C.同裂酶D.同位酶17322質(zhì)粒作為基因克隆載體應(yīng)有下列何種調(diào)控元件（）和復(fù)制子標(biāo)記D.多克隆位點18.λ噬菌體外包裝目的基因片段的大小應(yīng)為（D）A.小于λ噬菌體的50%B.小于噬菌體的75%C.大于λ噬菌體的105%D.為λ噬菌體的75%～105%19連接酶的功能是()A.復(fù)原3’與5’之間的磷酸二酯鍵B.復(fù)原缺口C.復(fù)原裂口D.可使平末端與粘性末端連接20質(zhì)粒作為基因克隆載體應(yīng)有下列何種調(diào)控元件(ABCD)復(fù)制子標(biāo)記D.多克隆位點21.下列屬于獲得目的基因的方法的是(D)①利用反轉(zhuǎn)錄形成②從基因組文庫中提?、蹚氖荏w細胞中提?、芾眉夹g(shù)⑤利用轉(zhuǎn)錄 ⑥人工合成A.①②③⑤B.①②⑤⑥C.①②③④D.①②④⑥22.的質(zhì)粒分子帶有一個抗菌素抗性基因，該抗性基因在基因工程中的主要作用是BA．提高受體細胞在自然環(huán)境中的耐藥性B．有利于對目的基因是否導(dǎo)入進行檢測C．增加質(zhì)粒分子的分子量D．便于與外源基因連接23.有關(guān)基因工程的敘述正確的是DA．限制酶只在獲得目的基因時才用B．重組質(zhì)粒的形成是在細胞內(nèi)完成的C．質(zhì)粒都可作為運載體D．蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)可為合成目的基因供應(yīng)資料24.哪項不是基因表達載體的組成部分(B)A.啟動子B.終止密碼C.標(biāo)記基因D.目的基因25.下列哪項不是將目的基因?qū)胫参锛毎姆椒?B)A．基因槍法B．顯微注射法 C.農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法D．花粉管通道法26.以下說法正確的是（C）A、全部的限制酶只能識別一種特定的核苷酸序列B、質(zhì)粒是基因工程中唯一的運載體C、運載體必需具備的條件之一是：具有多個限制酶切點，以便與外源基因連接D、基因限制的性狀都能在后代表現(xiàn)出來27.不屬于質(zhì)粒被選為基因運載體的理由是（D）A、能復(fù)制B、有多個限制酶切點C、具有標(biāo)記基因D、它是環(huán)狀28.有關(guān)基因工程的敘述中，錯誤的是（A）A、連接酶將黏性末端的堿基對連接起來B、限制性內(nèi)切酶用于目的基因的獲得C、目的基因須由運載體導(dǎo)入受體細胞D、人工合成目的基因不用限制性內(nèi)切酶29.有關(guān)基因工程的敘述正確的是（D）A、限制酶只在獲得目的基因時才用B、重組質(zhì)粒的形成在細胞內(nèi)完成C、質(zhì)粒都可作為運載體D、蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)可為合成目的基因供應(yīng)資料30.基因工程是在分子水平上進行設(shè)計施工的。在基因操作的基本步驟中，不進行堿基互補配對的步驟是（C）A、人工合成目的基因B、目的基因與運載體結(jié)合C、將目的基因?qū)胧荏w細胞D、目的基因的檢測和表達31.下列獲得目的基因的方法中須要模板鏈?zhǔn)牵˙）A.從基因文庫中獲得目的基因B.利用技術(shù)擴增目的基因C.反轉(zhuǎn)錄法D.通過合成儀利用化學(xué)方法人工合成32.下列有關(guān)基因工程的敘述中，錯誤的是A、連接酶將粘性末端的堿基對連接起來B、基因探針是指用放射性同位素或熒光分子等標(biāo)記的分子C、基因治療主要是對有缺陷的進行修復(fù)D、蛋白質(zhì)中氨基酸序列可為合成目的基因供應(yīng)資料二、是非推斷題1連接酶是一種能催化二條鏈之間形成磷酸二酯鍵的酶，因此該酶既可修復(fù)基因序列中的缺口，也可修復(fù)裂口。（×）2.質(zhì)粒提取后，在瓊脂糖電泳出現(xiàn)一條帶時說明質(zhì)粒提取純度高，當(dāng)為三條帶時為純度不高。（×）3、入噬菌體的插入型載體只有一個單一限制酶切點，替換型載體有2個成對的限制性酶切點。（√）4、原核細胞和真核細胞轉(zhuǎn)錄的均具有與結(jié)合的序列，以利于進行有效的轉(zhuǎn)錄。（×）5、文庫是包含有細胞中全部，因此該文庫能包含細胞全部的遺傳信息。（X）三、填空題1、在標(biāo)記基因插入外源基因，經(jīng)誘導(dǎo)，在培育基中顯白色，為陽性克隆，未插入基因的克隆顯藍色，為陰性克隆。2、志向的質(zhì)粒克隆載體應(yīng)具備以下基本條件，如能自主復(fù)制、一種或多種限制酶的酶切位點、篩選標(biāo)記、分子量小易拷貝。3、點突變的基因系列在堿基替換中，若為一個嘌呤換成另一個嘌呤或一個嘧啶換成另一個嘧啶者稱轉(zhuǎn)換，若一個嘌呤換成一個嘧啶或一個嘧啶換成一個嘌呤者稱顛換。4、基因表達的四大表達系統(tǒng)分別為大腸桿菌、酵母菌、哺乳動物細胞、昆蟲細胞。5、基因與載體的平末端連接方法有哪些T4連接酶連接法。末端核苷酸轉(zhuǎn)移酶加同聚物尾巴后，再用連接酶進行連接；化學(xué)合成連接物后連接分子。6、如何利用抗性標(biāo)記基因篩選陽性克??？抗性標(biāo)記篩選；抗性基因插入失活篩選；基因失活篩選。7、核酸操作的基本技術(shù)有哪些①核酸提取與純化②核酸的檢測與保存③核酸的凝膠電泳④核酸分子雜交8、基因工程所需的基本條件1、用于核酸操作的工具酶；2、用于基因克隆的載體；3、用于基因轉(zhuǎn)移的受體菌或細胞。9、酶在有狀況下，呈現(xiàn)聚合酶活性，在沒有狀況下呈現(xiàn)外切酶活性。10、利用技術(shù)擴增目的基因①概念：全稱為聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，是一項在生物體外復(fù)制特定片段的核酸合成技術(shù)②原理：復(fù)制③條件：已知基因的核苷酸序列四種脫氧核苷酸一對引物、聚合酶.前提條件：④方式：以_指數(shù)方式擴增，即2（n為擴增循環(huán)的次數(shù)）⑤結(jié)果使目的基因的片段在短時間內(nèi)成百萬倍地擴增11．技術(shù)擴增過程a、變性（90℃-95℃）：雙鏈模板在熱作用下，氫鍵斷裂，形成單鏈b、復(fù)性（55℃-60℃）：系統(tǒng)溫度降低，引物與模板結(jié)合，形成局部雙鏈。c、延長（70℃-75℃）：在酶的作用下，從引物的5′端→3′端延長，合成與模板互補的鏈。名詞說明1.同尾酶某些限制性內(nèi)切酶識別的堿基依次不同，但酶切后產(chǎn)生同樣粘性末端的兩種酶2.柯斯（C0S）質(zhì)粒帶有λ噬菌體的位點和整個322的依次的大腸桿菌質(zhì)粒。3序列為能在細菌核糖體上產(chǎn)生有效結(jié)合和轉(zhuǎn)譯的特別序列。4.質(zhì)粒不親和性：在沒有選擇壓力的狀況下，兩種不同質(zhì)粒不能夠在同一宿主細胞系中穩(wěn)定地共存的現(xiàn)象。5文庫：是指某生物某一發(fā)育時期所轉(zhuǎn)錄形成的片段與某種載體連接而成的克隆的集合。6.穿梭質(zhì)粒載體：指一類由人工構(gòu)建的具有兩種不同復(fù)制起點的選擇標(biāo)記，因而可在兩種不同宿主細胞中存活和復(fù)制的質(zhì)粒載體。7.基因()具有特定功能的片段，這些片段有的編碼蛋白質(zhì)，有的編碼、，有的則是與復(fù)制、轉(zhuǎn)錄調(diào)控有關(guān)的序列。8.基因重組:由于不同鏈的斷裂和連接而產(chǎn)生片段的交換和重新組合，形成新分子的過程。9.基因工程又叫做基因拼接技術(shù)或重組技術(shù)。是在生物體外，通過對分子進行人工“剪切”和“拼接”，對生物的基因進行改造和重新組合，然后導(dǎo)入受體細胞內(nèi)進行無性繁殖，使重組基因在受體細胞內(nèi)表達，產(chǎn)生出人類所須要的新的生物類型和生物產(chǎn)品10.目的基因()：又叫靶基因()，是指依據(jù)基因工程的目的,設(shè)計的所須要的某些分子片段，它含有一種或幾種遺傳信息的全套密碼()五問答題1.真核細胞基因組中的基因常有內(nèi)含子存在，能否在原核細胞中表達？能，為什么？不能，為什么？不能，因為原核細胞缺乏對真核基因中內(nèi)含子的剪接功能和轉(zhuǎn)錄后加工系統(tǒng)。原核生物必需有相應(yīng)的原核聚合酶可識別原核細胞的啟動子,以催化的合成?；虮磉_是以操縱子為單位，操縱子由數(shù)個相關(guān)的結(jié)構(gòu)基因和調(diào)控功能的部位組成的。因此在構(gòu)建原核表達載體時必需有1個強的原核啟動子與其兩側(cè)的調(diào)控序列。2.質(zhì)粒單酶切點的基因連接如何降低本底和防止自我環(huán)化和提高連接效率？目的基因片斷與載體由相同的單一限制性核酸內(nèi)切酶（如）消化酶切后,兩者的兩端均具有相同的粘性末端,稱為單酶切點的粘性末端,又稱全同源性粘性末端⑴高背景載體經(jīng)單一限制性核酸內(nèi)切酶切割后,載體分子易于自我環(huán)化,既不利于目的基因的重組連接,大大降低陽性克隆效率,又可使非重組性載體造成高背景。為了防止載體的自我環(huán)化，通常用堿性磷酸酶去除載體粘性末端的5’以抑制的自我環(huán)化。在連接反應(yīng)中,具有5’，的目的基因片斷可有效地與去磷酸化質(zhì)粒載體通過粘性末端發(fā)生互補連接,盡管產(chǎn)生的重組分子于連接點含有兩個缺口的開環(huán)分子,盡管在轉(zhuǎn)化時其轉(zhuǎn)化效率高于線性低于閉和環(huán),但轉(zhuǎn)化大腸桿菌后,在菌體內(nèi)其缺口可獲得修復(fù)。⑵雙向插入經(jīng)單一限制核酸內(nèi)切酶（如）切割的目的基因和載體,因二者的粘性末端是相同的,因此在連接反應(yīng)中,目的基因可發(fā)生雙向插入,載體對目的基因表達是有方向的,而目的基因可雙向與之相連,這種連接若以克隆目的基因片段為目的沒有影響,若以表達為目的,我們就要對插入的片段進行方向鑒定,因目的基因由起始密碼子向終止密碼子方向表達是定向轉(zhuǎn)錄的,一旦啟動子與目的基因編碼依次方向相反就不能正確轉(zhuǎn)錄目的基因的。若構(gòu)建表達重組體選用雙酶切切割目的基因和載體，可使目的基因與載體的連接發(fā)生定向連接重組,以便定向克隆。3.將外源性克隆到區(qū)段的插入型噬菌體上后，如何篩選重組噬菌體？β-半乳糖苷酶失活的插入型載體，在其基因組中含有一個大腸桿菌的區(qū)段，此區(qū)段編碼有β-半乳糖苷酶基因，在誘導(dǎo)物（異丙基硫代半乳糖苷）存在下，β-半乳糖苷酶能作用(5-溴-4-氯3-吲哚-β半乳糖苷)形成藍色化合物（5-溴-4-氯靛藍）。這樣由這種載體感染的大腸桿菌指示菌（基因缺陷菌），涂布在補加有和的培育基平板上，會形成藍色的噬斑，但若在區(qū)段上插入外源片段，就會阻斷β-半乳糖苷酶基因的編碼序列，這種λ重組體感染的指示菌由于不能合成β-半乳糖苷酶，只能形成無色的噬菌斑，相反未發(fā)生外源基因插入則出現(xiàn)藍色噬菌斑，以利篩選。4.基因與載體的平末端連接方法有哪些？簡要或圖示說明均可。T4連接酶法連接平末端分子的方法有2種，一種是干脆用T4連接酶連接，另一種是先用末端核苷酸轉(zhuǎn)移酶給平末端分子加上同聚物尾巴之后再用連接酶進行連接。T4連接酶同一般的大腸桿菌連接酶不同。T4連接酶除了能夠封閉具有3’和5’末端的雙鏈的缺口之外,在存在和加入高濃度酶的條件下,它還能夠連接具有完全配對堿基的平末端分子,但其連接效率比粘性端要低的多。（2）同聚物加尾法運用末端核苷酰轉(zhuǎn)移酶，能夠?qū)⒑塑账幔ㄍㄟ^脫氧核苷三磷酸前體）加到分子單鏈延長末端的3’基因上,它并不須要模板鏈的存在,它一個一個加上核苷酸,構(gòu)成由核苷酸組成的尾巴,長度可達100個核苷酸。5.如何從所克隆到基因重組體中鑒定目的基因的存在和正確性？依據(jù)插入基因的遺傳性狀進行篩選只有當(dāng)已知需克隆基因所編碼蛋白質(zhì)的功能,且該蛋白質(zhì)又為細菌的生命活動所必需時,即可用該方法篩選。如：已知蛋白質(zhì)中的亮氨酸（）為養(yǎng)分缺陷菌所必需,當(dāng)外源目的基因可表達亮氨酸,將該基因的重組子轉(zhuǎn)入缺陷菌中,在不含亮氨酸的基本培育基平板中,只有重組子表達的亮氨酸才能被缺陷菌所利用而能生長繁殖,形成菌落。因而能生長的細菌集落，均為陽性的重組子克隆，而無該重組子的缺陷菌在不含亮氨酸的平板上則不能生長，不能形成菌落。依據(jù)重組子的結(jié)構(gòu)特征篩選(1).重組子大小鑒別篩選重組子中因裝有一段較大分子量的外源基因,因此其分子量明顯比原載體大得多,因此可從平板上挑取菌落分別提取重組載體（如質(zhì)粒重組子）和原載體（質(zhì)粒），無需用限制性內(nèi)切酶消化，干脆進行凝膠電泳，攜帶外源性目的基因的重組子質(zhì)粒因分子量大，電泳遷移率較小，其電泳條帶在后，而原載體質(zhì)粒因分子量較小，電泳遷移率較大，其電泳條帶在前。通過比較可初步推斷重組子中是否插入外源基因片段。本方法適用于插入片段較大的重組子的初步篩選。(2).酶切鑒定對于篩選出的具有重組子的菌株，應(yīng)經(jīng)小量培育后，再分別提取原載體或重組體載體（重組質(zhì)?；蛑亟M噬菌體），依據(jù)已知重組時外源基因兩端的酶切位點，分別用相應(yīng)的兩種內(nèi)切酶進行酶解，經(jīng)瓊脂糖電泳后，原載體因無外源性目的基因，切開后變成線性，電泳呈一條帶，若載體上有外源性目的基因插入，切開后電泳出現(xiàn)兩條帶：一條為載體質(zhì)粒線性條帶，一條為釋放出的插入基因片斷的小分子條帶，這樣就可以看出載體中是否有插入的目的基因片斷，以與由條帶對比分析可得知插入基因片段的大小(3).目的基因序列測定6.基因工程誕生的理論基礎(chǔ)是什么？是現(xiàn)代分子生物學(xué)領(lǐng)域理論上的三大發(fā)覺和技術(shù)上的三大獨創(chuàng)。理論上的三大發(fā)覺：①證明了是遺傳物質(zhì)②揭示了分子的雙螺旋結(jié)構(gòu)模型和半保留復(fù)制機理③遺傳密碼的破譯和遺傳信息傳遞方式的確定技術(shù)上的三大獨創(chuàng)：①限制核酸內(nèi)切酶的發(fā)覺與切割②連接酶的發(fā)覺與片段的連接③基因工程載體的探討與應(yīng)用7.如何有效地提高外源基因的表達效率？⑴提高啟動子強度⑵縮短啟動子同克隆基因間距離⑶高效的翻譯起始序列⑷高效的轉(zhuǎn)錄終止區(qū)⑸提高質(zhì)粒拷貝數(shù)與穩(wěn)定性⑹用以下方法提高翻譯水平：①調(diào)整序列與間的距離②用點突變的方法變更某些堿基③增