DNA測序技術(shù)及展望-課件

DNA測序技術(shù)及展望DNA測序技術(shù)及展望ppt課件2021/3/261DNA測序技術(shù)及展望DNA測序技術(shù)及展望ppt課件2021第一代測序技術(shù)第二代測序技術(shù)第三代測序技術(shù)DNA測序技術(shù)的展望DNA測序技術(shù)及展望ppt課件2021/3/262第一代測序技術(shù)第二代測序技術(shù)第三代測序技術(shù)DNA測序技術(shù)的展第一代測序技術(shù)DNA測序技術(shù)及展望ppt課件2021/3/263第一代測序技術(shù)DNA測序技術(shù)及展望ppt課件2021/3/DNA測序即核酸DNA分子一級結(jié)構(gòu)的測定，是現(xiàn)代分子生物學(xué)一項重要的技術(shù)。DNA序列測定的意義DNA測序技術(shù)及展望ppt課件2021/3/264DNA測序即核酸DNA分子一級結(jié)構(gòu)的測定，是現(xiàn)代分子生物學(xué)一生命的奧秘蘊藏于“四字天書”之中…GCTTCTTCCTCATTTTCTCTTGCCGCCACCATGCCGCCACCATCATTTTCTCTTGCCGCCACCATGCTTCTTCCTCATTTTCTCTCCACCATGCCGCCACCACGCCACCATGCTTCTTCCTCATCTCGCTTTCTTGCCGCCACCATGCCGCCACCGCTTCTTCCtTCTCT…DNA測序技術(shù)及展望ppt課件2021/3/265生命的奧秘蘊藏于“四字天書”之中…GCTTCTTCCTCA第一代DNA測序技術(shù)：傳統(tǒng)的化學(xué)降解法、雙脫氧鏈終止法以及在它們的基礎(chǔ)上發(fā)展來的各種DNA測序技術(shù)。1963年，Sanger等人第一次完成胰島素51個氨基酸序列測定70年代后期，Sanger和Maxam----Gilbert等人又建立了Sanger雙脫氧鏈終止法和Maxam----Gilbert化學(xué)裂解法第一代DNA測序技術(shù)包括：化學(xué)降解法、雙脫氧鏈終止法、熒光自動測序技術(shù)和雜交測序技術(shù)。DNA測序技術(shù)及展望ppt課件2021/3/266第一代DNA測序技術(shù)：1963年，Sanger等人第一次完成1.1

化學(xué)降解法基本原理:利用特異的選擇性試劑，專一性的隨機斷裂DNA成不同長短的片段。根據(jù)試劑的選擇性及片段在高分辨力的聚丙烯酰胺凝膠電泳上的區(qū)帶位置，判斷DNA片段末端核苷酸的種類，從而測出DNA的序列。DNA測序技術(shù)及展望ppt課件2021/3/2671.1化學(xué)降解法基本原理:DNA測序技術(shù)及展望ppt課件

將雙鏈DNA樣品變?yōu)閱捂湣總€單鏈的同一方向末端都用放射性同位素標記,以便顯示DNA條帶↓分別用不同方法處理,獲得只差一個核苷酸的降解DNA群體↓電泳，讀取DNA的核苷酸順序技術(shù)路線DNA測序技術(shù)及展望ppt課件2021/3/268將雙鏈DNA樣品變?yōu)閱捂溂夹g(shù)路線DNA測序技術(shù)堿基特異修飾方法GPh8.0,用硫酸二甲酯對N7進行甲基化,使C8-C9鍵對堿基裂解有特殊敏感性A+GpH2.0哌啶甲酸可使嘌呤環(huán)的N原子化,從而導(dǎo)致脫嘌呤,并因此消弱腺嘌呤和鳥嘌呤的糖苷鍵C+T肼可打開嘧啶環(huán),后者重新環(huán)化成五元環(huán)后易除去C1.5mol/LNaCl存在時,可用肼除去胞嘧啶Maxam-Gilbert法所用的化學(xué)技術(shù)DNA測序技術(shù)及展望ppt課件2021/3/269堿基特異修飾方法GPh8.0,用硫酸二甲酯對N7進行甲基化DNA測序技術(shù)及展望ppt課件2021/3/2610DNA測序技術(shù)及展望ppt課件2021/3/2610

化學(xué)降解法剛問世時，準確性較好，也容易為普通研究人員所掌握，因此用得較多。優(yōu)點：即所測序列來自原DNA分子而不是酶促合成產(chǎn)生的拷貝，排除了合成時造成的錯誤。缺點：操作過程較麻煩，且用到放射性物質(zhì)，逐漸被簡便快速的Sanger法所代替。DNA測序技術(shù)及展望ppt課件2021/3/2611化學(xué)降解法剛問世時，準確性較好，也容易為普通研DNA測序技術(shù)及展望利用DNA聚合酶和雙脫氧鏈終止物測定DNA核苷酸順序的方法，是由英國劍橋分子生物學(xué)實驗室的生物化學(xué)家F.Sanger等人于1977年發(fā)明的。F.Sanger（1980年諾貝爾獎獲得者）

dideoxychain-terminationmethodDNA測序技術(shù)及展望ppt課件2021/3/2612DNA測序技術(shù)及展望利用DNA聚合酶和雙脫氧鏈“雙脫氧末端終止”的含義DNA測序技術(shù)及展望ppt課件2021/3/2613“雙脫氧末端終止”的含義DNA測序技術(shù)及展望ppt課件20

PCR（聚合酶鏈式反應(yīng)）原理反應(yīng)所需物質(zhì)：DNA模板、引物、DNA聚合酶、dNTP、緩沖液每個循環(huán)包括：變性（90℃）、退火（54

℃）、延伸（72℃）DNA測序技術(shù)及展望ppt課件2021/3/2614PCR（聚合酶鏈式反應(yīng)）原理反應(yīng)所需物質(zhì)：D

雙脫氧鏈終止法基本原理：DNA聚合酶不能夠區(qū)分dNTP和ddNTP，ddNTP參入到寡核苷酸鏈的3’-末端，終止DNA鏈的增長。合成的互補鏈在不同位置隨機終止反應(yīng)，產(chǎn)生只差一個核苷酸的DNA分子，讀取待測DNA的順序。DNA測序技術(shù)及展望ppt課件2021/3/2615雙脫氧鏈終止法基本原理：DNA測序技術(shù)及展望ppt課件Sanger雙脫氧末端終止法測序原理DNA測序技術(shù)及展望ppt課件2021/3/2616Sanger雙脫氧末端終止法測序原理DNA測序技術(shù)及展望

讀出模板互補序列dNTP

凝膠電泳

較大片段

較小片段ddGTPddATPddCTPddTTP

反應(yīng)混合物Klenow酶

未知序列的單鏈DNA

讀出待測序列CTGACTTCGACAAAGAA5′3′ACTGddGddGddGddGGACTGAAGCTGTT3′5′CTGACTTCGACAA5′3′DNA測序技術(shù)及展望ppt課件2021/3/2617讀出模板互補序列dNTP凝膠電泳較大片段較小片段ddDNA測序技術(shù)及展望ppt課件2021/3/2618DNA測序技術(shù)及展望ppt課件2021/3/2618Sanger法因操作簡便，得到廣泛的應(yīng)用。后來在此基礎(chǔ)上發(fā)展出多種DNA測序技術(shù)，其中最重要的是熒光自動測序技術(shù)。DNA測序技術(shù)及展望ppt課件2021/3/2619Sanger法因操作簡便，得到廣泛的應(yīng)用。后來在此基礎(chǔ)上發(fā)熒光自動化測序基本原理：與鏈終止法測序原理相同用不同熒光色彩標記ddNTPddATP標記紅色熒光ddTTP標記綠色熒光ddCTP標記藍色熒光

ddGTP標記黃色熒光每種ddNTP帶有各自特定的熒光顏色,簡化為由1個泳道同時判讀4種堿基DNA測序技術(shù)及展望ppt課件2021/3/2620熒光自動化測序基本原理：與鏈終止法測序原理相同DNA測序技術(shù)DNA測序技術(shù)及展望多色熒光標記毛細管電泳

單色熒光標記平板電泳同位素標記平板電泳ACGTACGT測序圖譜TA

TTGCATTGTC

TGCATTGT

C

TDNA測序技術(shù)及展望ppt課件2021/3/2621DNA測序技術(shù)及展望多色熒光標記單色熒光標記同位素標記ACGDNA測序技術(shù)及展望computeranalysis凝膠中DNA移動方向樣品槽激光器輸入光學(xué)系統(tǒng)成象透鏡聚焦透鏡高靈敏度相機旋光鏡/棱鏡組件DNA測序技術(shù)及展望ppt課件2021/3/2622DNA測序技術(shù)及展望computeranalysis凝膠中DNA自動測序結(jié)果舉例目前商品化生產(chǎn)的最先進測序儀為ABI3730測序儀，最長可以測1200個堿基DNA測序技術(shù)及展望ppt課件2021/3/2623DNA自動測序結(jié)果舉例目前商品化生產(chǎn)的最先進測序儀為ABI3目前所用測序技術(shù)的缺點1、DNA鏈終止法決定了一個反應(yīng)所測序列不能太長，目前1000

bp左右。2、測序反應(yīng)費時費力第一個人類基因組測序花了13年的時間，耗費了30億美元的費用。3、測序準確度不高DNA聚合酶造成的堿基錯配，DNA序列判讀錯誤。4、測序基于PCR反應(yīng)，需要引物，有些些結(jié)構(gòu)復(fù)雜的難于進行PCR反應(yīng)的片段不能測序。DNA測序技術(shù)及展望ppt課件2021/3/2624目前所用測序技術(shù)的缺點1、DNA鏈終止法決定了一個反應(yīng)所測序DNA測序技術(shù)及展望DNA測序技術(shù)及展望ppt課件2021/3/2625DNA測序技術(shù)及展望DNA測序技術(shù)及展望ppt課件2021DNA測序技術(shù)及展望ppt課件2021/3/2626DNA測序技術(shù)及展望ppt課件2021/3/2626DNA測序技術(shù)及展望ppt課件2021/3/2627DNA測序技術(shù)及展望ppt課件2021/3/2627DNA測序技術(shù)及展望ppt課件2021/3/2628DNA測序技術(shù)及展望ppt課件2021/3/2628DNA測序技術(shù)及展望ppt課件2021/3/2629DNA測序技術(shù)及展望ppt課件2021/3/2629DNA測序技術(shù)及展望ppt課件2021/3/2630DNA測序技術(shù)及展望ppt課件2021/3/2630DNA測序技術(shù)及展望ppt課件2021/3/2631DNA測序技術(shù)及展望ppt課件2021/3/2631DNA測序技術(shù)及展望ppt課件2021/3/2632DNA測序技術(shù)及展望ppt課件2021/3/2632DNA測序技術(shù)及展望ppt課件2021/3/2633DNA測序技術(shù)及展望ppt課件2021/3/2633DNA測序技術(shù)及展望ppt課件2021/3/2634DNA測序技術(shù)及展望ppt課件2021/3/2634DNA測序技術(shù)及展望ppt課件2021/3/2635DNA測序技術(shù)及展望ppt課件2021/3/2635DNA測序技術(shù)及展望ppt課件2021/3/2636DNA測序技術(shù)及展望ppt課件2021/3/2636DNA測序技術(shù)及展望ppt課件2021/3/2637DNA測序技術(shù)及展望ppt課件2021/3/2637DNA測序技術(shù)及展望ppt課件2021/3/2638DNA測序技術(shù)及展望ppt課件2021/3/2638DNA測序技術(shù)及展望ppt課件2021/3/2639DNA測序技術(shù)及展望ppt課件2021/3/2639DNA測序技術(shù)及展望ppt課件2021/3/2640DNA測序技術(shù)及展望ppt課件2021/3/2640DNA測序技術(shù)及展望ppt課件2021/3/2641DNA測序技術(shù)及展望ppt課件2021/3/2641DNA測序技術(shù)及展望ppt課件2021/3/2642DNA測序技術(shù)及展望ppt課件2021/3/2642DNA測序技術(shù)及展望ppt課件2021/3/2643DNA測序技術(shù)及展望ppt課件2021/3/2643DNA測序技術(shù)及展望ppt課件2021/3/2644DNA測序技術(shù)及展望ppt課件2021/3/2644DNA測序技術(shù)及展望ppt課件2021/3/2645DNA測序技術(shù)及展望ppt課件2021/3/2645

通過幾十年的逐步改進,第1代測序儀的讀長可以超過1000bp,原始數(shù)據(jù)的準確率可以高達99.999%,測定每千堿基序列的成本是0.5美元,每天的數(shù)據(jù)通量可以達到600000堿基。DNA測序技術(shù)及展望ppt課件2021/3/2646通過幾十年的逐步改進,第1代測序儀的讀長可以第二代測序技術(shù)DNA測序技術(shù)及展望ppt課件2021/3/2647第二代測序技術(shù)DNA測序技術(shù)及展望ppt課件2021/3/第一代測序技術(shù)在分子生物學(xué)研究中發(fā)揮過重要的作用，如人類基因組計劃(HGP)主要基于第一代DNA測序技術(shù)。隨著人類基因組計劃的完成，人們進入了后基因組時代，即功能基因組時代，傳統(tǒng)的測序方法已經(jīng)不能滿足深度測序和重復(fù)測序等大規(guī)?；蚪M測序的需求，這促使了新一代DNA測序技術(shù)的誕生。新一代測序技術(shù)即第二代測序技術(shù)。DNA測序技術(shù)及展望ppt課件2021/3/2648第一代測序技術(shù)在分子生物學(xué)研究中發(fā)揮過重要的作用測序設(shè)備發(fā)展現(xiàn)狀第一代（穩(wěn)定需求）ABi3130xL3730xL3500xL第三代HelicosBiosciencesHelicosGeneticAnalysisSystemPacificBiosciencesRSSystem第二代（高速發(fā)展）RocheGenomeSequencerFLXSystemGSJuniorSystemIlluminaGenomeAnalyzerIIxMiSeqHiSeq1000HiSeq2000LifeTechnologies(ABi)5500SOLiD?System5500xLSOLiD?SystemIon

TorrentPGM?DanaherMotionPolonatorG.007CompleteGenomics無錫艾吉因生物信息技術(shù)有限公司AG-100深圳華因康基因科技有限公司Pstar-1中科院北京基因組所/半導(dǎo)體所BIGIS-1BIGIS-4DNA測序技術(shù)及展望ppt課件2021/3/2649測序設(shè)備發(fā)展現(xiàn)狀第一代（穩(wěn)定需求）第三代第二代（高速發(fā)展）D199020052020Year2015201020001995Mb1000Mb4000ABI373ABI377ABI3130ABI3730ABI3730xlGA-I

GA-IILessThan5yrsHiSeq1000/2000Mb4500ABI3700ABI3700xlSOLiDSOLiD2SOLiD35500xlSOLiDABI3130xlGA-IIx5500SOLiD測序設(shè)備的壟斷和高速度換代DNA測序技術(shù)及展望ppt課件2021/3/2650199020052020Year20152010200019第二代測序技術(shù)將片段化的基因組DNA兩側(cè)連上接頭，隨后用不同的方法產(chǎn)生幾百萬個空間固定的PCR克隆陣列。每個克隆由單個文庫片段的多個拷貝組成，然后進行引物雜交和酶延伸反應(yīng)。所有克隆在同一平面上，反應(yīng)大規(guī)模平行進行，每個延伸反應(yīng)所摻入的熒光標記的成像檢測也能同時進行，從而獲得測序數(shù)據(jù)。

DNA序列延伸和成像檢測不斷重復(fù)，最后經(jīng)計算機分析獲得完整的DNA序列。DNA測序技術(shù)及展望ppt課件2021/3/2651第二代測序技術(shù)將片段化的基因組DNA兩側(cè)連上接頭DNA測序技術(shù)及展望高通量準確度高成本低覆蓋度高產(chǎn)出巨大DNA測序技術(shù)及展望ppt課件2021/3/2652DNA測序技術(shù)及展望高通量DNA測序技術(shù)及展望ppt課件2第二代DNA測序技術(shù)平臺Roche,

454

GSFLXIllumina,

SolexaGenomeAnalyzer/Hiseq2000ABI,

SOLiDDNA測序技術(shù)及展望ppt課件2021/3/2653第二代DNA測序技術(shù)平臺Roche,454GSFLXDDNA測序技術(shù)及展望200520062007BirthdayPrinciple焦磷酸測序Pyrosequencing合成法Sequencing-by-Synthesis連接法Sequencing-by-LigationDNA測序技術(shù)及展望ppt課件2021/3/2654DNA測序技術(shù)及展望200520062007Birthday2.1454測序技術(shù)

原理：在DNA聚合酶、ATP硫酸化酶、熒光素酶和雙磷酸酶的作用下，將每一個dNTP的聚合與一次化學(xué)發(fā)光信號的釋放偶聯(lián)起來，通過檢測化學(xué)發(fā)光信號的有無和強度，達到實時檢測DNA序列的目的。DNA測序技術(shù)及展望ppt課件2021/3/26552.1454測序技術(shù)原理：在DNADNA測序技術(shù)及展望ppt課件2021/3/2656DNA測序技術(shù)及展望ppt課件2021/3/2656DNA測序技術(shù)及展望1、文庫制備：基因組DNA/cDNA片段化處理至300-800bp，經(jīng)末端修復(fù)與特異性接頭連接等修飾后變性處理回收單鏈的DNA。DNA測序技術(shù)及展望ppt課件2021/3/2657DNA測序技術(shù)及展望1、文庫制備：DNA測序技術(shù)及展望pp2、EmulsionPCR：單鏈DNA文庫被固定在DNA捕獲磁珠上，乳化，形成油包水的混合物，每個獨特的片斷在自己的微反應(yīng)器里進行獨立的擴增，回收純化

DNA測序技術(shù)及展望ppt課件2021/3/26582、EmulsionPCR：DNA測序技術(shù)及展望ppt課3、測序反應(yīng)：攜帶DNA片段的磁珠被放入PTP板中供測序反應(yīng)使用。

DNA測序技術(shù)及展望ppt課件2021/3/26593、測序反應(yīng)：DNA測序技術(shù)及展望ppt課件2021/3/4、數(shù)據(jù)分析：GSFLX系統(tǒng)在10小時的運行當(dāng)中可獲得100余萬個讀長，讀取超過4-6億個堿基信息

DNA測序技術(shù)及展望ppt課件2021/3/26604、數(shù)據(jù)分析：DNA測序技術(shù)及展望ppt課件2021/3/454技術(shù)的主要缺點是無法準確測量同聚物的長度。例如當(dāng)待測序列中出現(xiàn)Poly(A)時，測序反應(yīng)中會一次多加上一個T，而加入T的數(shù)目只能從熒光信號的強度來推測，有可能造成結(jié)果不準確。因而，454技術(shù)主要的錯誤不是來自核苷酸的替換，而是來自插入或缺失。454技術(shù)最大的優(yōu)勢在于較長的讀取長度，使得后繼的序列拼接工作更加高效、準確。DNA測序技術(shù)及展望ppt課件2021/3/2661454技術(shù)的主要缺點是無法準確測量同聚物的長度。DNA測序技

454生命科學(xué)公司在2005年最早推出了第二代測序平臺GenomeSequencer20，并測序了支原體Mycoplasmagenitalium的基因組；2007年推出性能更優(yōu)的第二代基因組測序系統(tǒng)一GenomeSequencerFLXSystem(GSFLX)。

羅氏在2005年便與454公司洽談并購事宜，2007年完成并購，緊接著公布了DNA雙螺旋的發(fā)現(xiàn)者之一——沃森（JimWatson）的個人基因組，測序總花費不到一百萬美元。DNA測序技術(shù)及展望ppt課件2021/3/2662454生命科學(xué)公司在2005年最早推出了第二代測2.2Solexa-Illumina

Genome

Analyzer

核心技術(shù)：“DNA簇”和“可逆性末端終止”。原理：合成測序，將基因組DNA的隨機片段附著到光學(xué)透明的玻璃表面（即Flowcell），這些DNA片段經(jīng)過延伸和橋式擴增后，在Flowcell上形成了數(shù)以億計Cluster，每個Cluster是具有數(shù)千份相同模板的單分子簇。

利用帶熒光基團的四種特殊脫氧核糖核苷酸，通過可逆性終止的“邊合成邊測序”技術(shù)對待測的模板DNA進行測序。DNA測序技術(shù)及展望ppt課件2021/3/26632.2Solexa-IlluminaGenomeAn圖2.Solexa測序技術(shù)流程DNA測序技術(shù)及展望ppt課件2021/3/2664圖2.Solexa測序技術(shù)流程DNA測序技術(shù)及展望pptSolexa技術(shù)的需要的樣品量低至100ng，文庫構(gòu)建過程簡單，減少了樣品分離和制備的時間，讀取長度可以達到2×75

bp。主要的錯誤來源是核苷酸的替換，而不是插入或缺失，目前它的錯誤率大約在1-1.5%之間。每個循環(huán)獲得20.5-25Gb的測序結(jié)果，耗時約9.5天。在合成中每次只能添加一個dNTP，因此很好地解決了同聚物長度的準確測量問題。DNA測序技術(shù)及展望ppt課件2021/3/2665Solexa技術(shù)的需要的樣品量低至100ng，文庫構(gòu)建過程SequencingbyOligonucleotide

LigationandDetection基本原理：連接反應(yīng)進行測序，以四色熒光標記的寡核苷酸進行多次連接合成，取代傳統(tǒng)的聚合酶連接反應(yīng)。步驟包括：文庫準備擴增微珠與玻片連接連接測序2.3SOLiD測序技術(shù)DNA測序技術(shù)及展望ppt課件2021/3/2666SequencingbyOligonucleotide圖3.SOLiD測序技術(shù)流程DNA測序技術(shù)及展望ppt課件2021/3/2667圖3.SOLiD測序技術(shù)流程DNA測序技術(shù)及展望ppt課DNA測序技術(shù)及展望1、SOLiD基因組文庫的構(gòu)建

DNA測序技術(shù)及展望ppt課件2021/3/2668DNA測序技術(shù)及展望1、SOLiD基因組文庫的構(gòu)建DNA測DNA測序技術(shù)及展望2、油包水PCR

DNA測序技術(shù)及展望ppt課件2021/3/2669DNA測序技術(shù)及展望2、油包水PCRDNA測序技術(shù)及展望DNA測序技術(shù)及展望3、含DNA模板P1磁珠的固定

DNA測序技術(shù)及展望ppt課件2021/3/2670DNA測序技術(shù)及展望3、含DNA模板P1磁珠的固定DNA測DNA測序技術(shù)及展望4、SOLiD雙堿基編碼原理及測序流程

DNA測序技術(shù)及展望ppt課件2021/3/2671DNA測序技術(shù)及展望4、SOLiD雙堿基編碼原理及測序流程DNA測序技術(shù)及展望4、SOLiD雙堿基編碼原理及測序流程

DNA測序技術(shù)及展望ppt課件2021/3/2672DNA測序技術(shù)及展望4、SOLiD雙堿基編碼原理及測序流程DNA測序技術(shù)及展望5.數(shù)據(jù)分析原理

SOLiD流程DNA測序技術(shù)及展望ppt課件2021/3/2673DNA測序技術(shù)及展望5.數(shù)據(jù)分析原理SOLiD流程DNASOLiD技術(shù)與Solexa技術(shù)類似，后續(xù)的序列拼接工作也比較復(fù)雜。SOLiD技術(shù)每個循環(huán)的數(shù)據(jù)產(chǎn)出量為10-15Gb，耗時約為6-7天。SOLiD技術(shù)每個循環(huán)可以測兩個上樣玻片，讀取長度可達2×50bp，而且由于采用兩堿基測序，該技術(shù)的準確率能達到99.94%以上。超高通量是SOLiD系統(tǒng)最突出的特點，目前SOLiD3單次運行可產(chǎn)生50GB的序列數(shù)據(jù)，相當(dāng)于17倍人類基因組覆蓋度。DNA測序技術(shù)及展望ppt課件2021/3/2674SOLiD技術(shù)與Solexa技術(shù)類似，后續(xù)的序列拼接工作也比DNA測序技術(shù)及展望ppt課件2021/3/2675DNA測序技術(shù)及展望ppt課件2021/3/2675第三代測序技術(shù)DNA測序技術(shù)及展望ppt課件2021/3/2676第三代測序技術(shù)DNA測序技術(shù)及展望ppt課件2021/3/第三代測序技術(shù)是以單分子測序為特點的測序技術(shù)。生物科學(xué)公司(BioScienceCorporation)的HeliScope單分子測序儀(HeliScopeSingleMolecularSequencer)太平洋生物科學(xué)公司(PacificBiosciences)的單分子實時DNA測序技術(shù)[SingleMoleculeRealTime(SMRT)DNAsequencingtechnology]牛津納米孔技術(shù)公司(OxfordNanoporeTechnologiesLtd)的納米孔單分子測序技術(shù)等。DNA測序技術(shù)及展望ppt課件2021/3/2677第三代測序技術(shù)是以單分子測序為特點的測序技術(shù)。D

目前,我國也啟動了第三代測序技術(shù)的研究。2009年12月,中科院北京基因組研究所與浪潮成立“中科院北京基因組研究所—浪潮基因組科學(xué)聯(lián)合實驗室”,利用各自的優(yōu)勢聯(lián)合研發(fā)國產(chǎn)第三代測序儀,第一臺樣機預(yù)計2013年問世,屆時有望緩解測序儀核心技術(shù)受制于國外公司的現(xiàn)狀。第二代的高通量測序技術(shù)已經(jīng)得到了很好的發(fā)展和應(yīng)用,但是由于其測序速度、成本、準確度等關(guān)鍵問題的解決仍存在困難,研究者們很快將目光轉(zhuǎn)向了更高更新的測序解決方案。單分子測序也就應(yīng)運而生。DNA測序技術(shù)及展望ppt課件2021/3/2678目前,我國也啟動了第三代測序技術(shù)的研第三代測序技術(shù)非常驚人！1、它實現(xiàn)了DNA聚合酶內(nèi)在自身的反應(yīng)速度，一秒可以測10個堿基，測序速度是化學(xué)法測序的2萬倍。2、它實現(xiàn)了DNA聚合酶內(nèi)在自身的processivity（延續(xù)性，也就是DNA聚合酶一次可以合成很長的片段），一個反應(yīng)就可以測非常長的序列。二代測序現(xiàn)在可以測到上百個堿基，但是三代測序現(xiàn)在就可以測幾千個堿基。這為基因組的重復(fù)序列的拼接提供了非常好的條件。3、它的精度非常高，達到99.9999%。4、可直接測RNA序列。5、可直接測甲基化的DNA序列。DNA測序技術(shù)及展望ppt課件2021/3/2679第三代測序技術(shù)非常驚人！DNA測序技術(shù)及展望ppt課件20

2008年4月，HelicoBioScience公司的Timothy等人在Science上報道了他們開發(fā)的真正的單分子測序技術(shù)，