實驗五、血液葡萄糖測定概論

實驗五血液葡萄糖的測定（福林-吳憲氏法）一、實驗?zāi)康?、掌握采用福林-吳憲氏法測定血液中葡萄糖的原理。2、熟悉分光光度計的使用。二、實驗原理磷鉬酸鉬藍(lán)（藍(lán)色）C6H12O6+2Cu(OH)2C5H11O5COOH+Cu2O↓3Cu2O+3H3PO4·2MoO3·12H2O6CuO+3H3PO4·Mo2O3·12H2ONa2CO3＋H2O＝NaOH+NaHCO3

NaOH+CuSO4=Cu(OH)2+Na2SO4堿性銅試劑鉬藍(lán)溶液顯藍(lán)色，其藍(lán)色的深淺與血濾液中葡萄糖的濃度成正比，選用顏色深淺較接近于測定管的標(biāo)準(zhǔn)管一同比色，即可求出測定管中葡萄糖的含量。血糖管的使用：血糖管下部的管徑較細(xì)，以避免還原生成的氧化亞銅被空氣中的氧再氧化，降低實際結(jié)果。無蛋白血濾液的制備

多生化分析要避免蛋白質(zhì)干擾，常常先將其中蛋白質(zhì)除去；分析血液中許多成分時，也常常需要除去蛋白質(zhì)，制成無蛋白質(zhì)的血濾液。制備無蛋白血濾液的方法很多，可根據(jù)不同的需要加以選擇。現(xiàn)將生化常用的無蛋白血濾液制備方法介紹如下：

鎢酸法

原理：血液中的蛋白質(zhì)在pH小于其等電點(diǎn)時，可用鎢酸來沉淀。鎢酸鈉與硫酸混合產(chǎn)生鎢酸和硫酸鈉，游離的鎢酸被，蛋白質(zhì)吸附，形成不溶性的鎢酸蛋白而沉淀，經(jīng)過濾或離心，除去沉淀即得無蛋白的血濾液。試劑：①10%鎢酸鈉溶液；②0.333mol／L硫酸溶液。儀器與器材：錐形瓶、吸管、奧氏吸管、濾紙、漏斗或離心管及離心機(jī)。方法與步驟：①取50ml錐形瓶1只，加入蒸餾水7份；②用奧氏吸管吸取抗凝血l份，擦去管壁外血液，將吸管插人錐形瓶中水的底部，緩慢地放出血液。放完血液后，將吸管提高吸取上清液再吹人，反復(fù)洗管3次。充分混合，使紅細(xì)胞完全溶解；③加入0.333mol／L硫酸溶液1份，隨加隨搖，充分混勻。此時血液由鮮紅變成棕色，靜置5～10min，使其酸化完全；④加入10％鎢酸鈉溶液1份，邊加邊搖，血液由透明變成凝塊狀。當(dāng)振搖到不再產(chǎn)生泡沫為止；⑤放置數(shù)分鐘后用定量濾紙過濾或離心除去沉淀，即得完全澄清的無蛋白血濾液，供測定用。用此法制得的無蛋白血濾液為10倍稀釋的血濾液。即每毫升血濾液相當(dāng)于全血0.ml，適用于葡萄糖、非蛋白氮、尿素氮、肌酸酐和氯化物等的測定。三、實驗步驟1、全血無蛋白濾液的制備抗凝血1ml蒸餾水7ml混勻1/3mol/L硫酸1ml振搖10%鎢酸鈉1ml振搖過濾放置5min無蛋白血濾液2、按表操作混勻，置沸水浴中煮8min。取出用流動自來水冷卻3min無蛋白血濾液蒸餾水標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖應(yīng)用液堿性銅試劑空白管標(biāo)準(zhǔn)管測定管1.01.0-1.0-----2.02.02.0血糖管試劑ml磷鉬酸試劑2.02.02.01：4磷鉬酸溶液加至混勻后放置2min12.512.512.53、比色測定將各管顛倒混勻后，用空白管調(diào)零，在420nm處測定吸收度。四、操作注意1、等水沸騰后，才能放入血糖管。加熱要準(zhǔn)確8分鐘。2、冷卻時切不可搖動血糖管，以免還原的氧化亞銅被空氣中的氧再氧化，降低實際結(jié)果。3、加入磷鉬酸后迅速比色。4、分光光度計的使用。分光光度計的使用1、接通電源，打開比色皿蓋，預(yù)熱20-30分鐘后，調(diào)節(jié)波長至所需波長。2、將盛有空白溶液的比色皿放在比色架的第一格，其余放測定溶液。將比色皿蓋蓋上，此時空白溶液在光路上。將光點(diǎn)調(diào)到“T”，調(diào)節(jié)T為100%。3、將光點(diǎn)調(diào)到“A”，輕輕拉動比色架固定拉桿，使第二個比色皿溶液處在光路中，此時讀數(shù)即為該溶液的吸收度。4、依次拉出第三、第四個比色皿，分別讀取