備課素材：帶寬能否準(zhǔn)確反映含量 高二下學(xué)期生物人教版選擇性必修3

帶寬能否準(zhǔn)確反映含量先看一道試題：為了探究DNA的復(fù)制方式，科學(xué)家將DNA帶15N標(biāo)記的大腸桿菌（0代）轉(zhuǎn)入以14NH4Cl為唯一氮源的培養(yǎng)液中培養(yǎng)。提取不同培養(yǎng)時(shí)期細(xì)菌的DNA進(jìn)行密度梯度超速離心，并繪制了DNA分布情況的示意圖，其中A組表示0代與1.9代的DNA混合的結(jié)果。下列敘述錯(cuò)誤的是（）A.圖中越靠下的條帶密度越大，條帶寬度與DNA含量有關(guān)B.圖中B組可能表示0代與4.1代的DNA混合之后的分布情況C.4.1代的條帶中寬帶理論上約為窄帶DNA含量的7倍左右D.綜合0代、1.0代、1.9代、3.0代、4.1代的結(jié)果才能證明DNA的半保留復(fù)制機(jī)制解析：A、離心法可將密度不同的物質(zhì)分離開(kāi)，越靠下的條帶密度越大，條帶寬度與DNA含量有關(guān)，A正確；B、圖中B組中輕帶的寬度和4.1帶的接近，重帶的寬度和0代的接近，所以B組可能表示0代與4.1代的DNA混合之后的分布情況，B正確；C、4.0代時(shí)，兩個(gè)DNA條帶的含量比值=（24-2）：2=7：1，因此4.1代的條帶中寬帶理論上約為窄帶DNA含量的7倍左右，C正確；D、綜合0代、1.0代、1.9代、3.0代就可以證明DNA的半保留復(fù)制，D錯(cuò)誤。故選：D。此題涉及DNA的復(fù)制密度梯度超速離心帶寬與含量的關(guān)系。那么，帶寬能否準(zhǔn)確反映含量？劉本舉的教學(xué)案例給出了論文中的原始圖仔細(xì)看圖，還真是有這樣的相關(guān)性。這個(gè)問(wèn)題和爭(zhēng)論與下面這個(gè)問(wèn)題本質(zhì)非常相似。如下圖：其實(shí)，不論是色素還是DNA，精確的含量測(cè)定通?？梢杂梦夤舛确y(cè)定，而分離的帶寬并不能準(zhǔn)確反映含量。兩種測(cè)定DNA含量的吸光光度法：1.凝膠電泳法：取2-5μlDNA溶解液與0.4μl6×載樣緩沖液混合，用0.75%瓊脂糖凝膠(含EB0.5μg/ml)檢測(cè)。溴化乙錠可迅速嵌于DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)中，嵌入DNA中的溴化乙錠受紫外光激發(fā)而發(fā)出熒光，這種熒光強(qiáng)度與DNA總質(zhì)量數(shù)成正比，通過(guò)比較樣品與標(biāo)準(zhǔn)品的熒光強(qiáng)度，對(duì)樣品中的DNA進(jìn)行定量。2.分光光度法，組成DNA的堿基，具有一定的吸收紫外線(xiàn)的特性，其最大吸收值在波長(zhǎng)250-270nm之間。這些堿基與戊糖、磷酸形成核苷酸后，其吸收紫外線(xiàn)的特性沒(méi)有改變，核酸的最大吸收波長(zhǎng)為260nm，利用DNA的這個(gè)物理特性來(lái)測(cè)定DNA的濃度。同時(shí)可以檢測(cè)280nm處紫外吸收值，當(dāng)OD260/OD280