23.3 吞噬細(xì)胞功能檢測講解

第二十三章

免疫細(xì)胞及其功能檢驗(yàn)技術(shù)知識目標(biāo)1.掌握：單個(gè)核細(xì)胞和淋巴細(xì)胞及其亞群的分離純化；T細(xì)胞及其亞群的表面標(biāo)志和功能檢測方法；B細(xì)胞功能檢測方法和原理；NK細(xì)胞的表面標(biāo)志。2.熟悉：NK細(xì)胞功能的檢測方法和原理。3.了解：中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞功能檢測方法和原理。能力目標(biāo)掌握密度梯度離心法分離外周血單個(gè)核細(xì)胞的操作流程；熟悉FCM和磁珠分離法分離淋巴細(xì)胞及其亞群的操作方法。思政-素質(zhì)目標(biāo)責(zé)任心、質(zhì)控、生物安全意識、臨床免疫學(xué)思維教學(xué)目標(biāo)目錄免疫細(xì)胞的分離與純化一淋巴細(xì)胞數(shù)量及功能檢測二吞噬細(xì)胞功能檢測三一、中性粒細(xì)胞功能檢測趨化功能檢測：體內(nèi)法（也稱皮膚窗口法）體外法（濾膜滲透法/

Boyden小室法、瓊脂糖平板法）吞噬功能檢測：（吞噬金黃色葡萄球菌或白色念珠菌）殺傷功能檢測：

溶菌法、硝基藍(lán)四氮唑（NBT）還原試驗(yàn)吞噬細(xì)胞功能檢測三體內(nèi)實(shí)驗(yàn)法--皮膚窗口法在受檢者前臂屈側(cè)中央3㎜范圍內(nèi)，搔刮皮膚后，用蓋玻片壓緊固定，在第2，5，8，12，24，36小時(shí)各取樣一次，染色觀察中性粒細(xì)胞聚集開始時(shí)間、聚集程度等。健康正常人一般2～3小時(shí)后開始聚集，達(dá)50～100個(gè)，6小時(shí)可達(dá)1000個(gè)以上。（一）中性粒細(xì)胞趨化功能檢測體外法--Boyden小室法Boyden小室體外法--瓊脂糖平板法原理及技術(shù)要點(diǎn)

在瓊脂糖凝膠平板的中孔加白細(xì)胞懸液，左孔加趨化因子，右孔加對照液，溫育4～8小時(shí)后，用顯微鏡測微器測定中性粒細(xì)胞向左孔的移動(dòng)距離A和向右孔的移動(dòng)距離B，計(jì)算趨化指數(shù)。趨化指數(shù)越大運(yùn)動(dòng)能力越強(qiáng)將細(xì)胞懸液與金黃色葡萄球菌或白色念珠菌懸液混合，溫育后涂片、固定和染色。在油鏡下觀察中性粒細(xì)胞對細(xì)菌的吞噬情況，計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞中吞噬和未吞噬細(xì)菌的中性粒細(xì)胞數(shù)，并記錄吞噬的細(xì)菌數(shù)。（二）中性粒細(xì)胞吞噬功能檢測（三）中性粒細(xì)胞殺傷功能檢測硝基藍(lán)四氮唑（NBT）還原試驗(yàn)

方法：1.抗凝血+硝基藍(lán)四氮唑（NBT），溫育25min；2.推片染色、鏡檢（含甲臜顆粒的中性粒細(xì)胞）。正常值：NBT陽性細(xì)胞率應(yīng)7%~15%二、巨噬細(xì)胞功能檢測炭粒廓清試驗(yàn)：主要用于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)吞噬功能檢測：（吞噬雞紅細(xì)胞或白假絲酵母等）促凝血活性測定：正常小鼠肝中庫普弗細(xì)胞可吞噬清除90％炭粒，脾巨噬細(xì)胞約吞噬清除10％炭粒。據(jù)此給小鼠靜脈注射定量印度墨汁（炭粒懸液），間隔一定時(shí)間反復(fù)取靜脈血，測定血中炭粒的濃度，根據(jù)血流中炭粒被廓清的速度，判斷巨噬細(xì)胞的功能。主要用于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)（一）炭粒廓清試驗(yàn)（二）巨噬細(xì)胞吞噬功能檢測巨噬細(xì)胞雞紅細(xì)胞或白假絲酵母＋孵育涂片染色鏡檢計(jì)算吞噬率和吞噬指數(shù)小結(jié)Ficoll單次密度梯度離心法分離外周血單個(gè)核細(xì)胞；流式細(xì)胞術(shù)和磁珠分離法進(jìn)行細(xì)胞分離和數(shù)量檢測；淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn)：常用MTT法和3H-TdR摻入法；細(xì)胞功能檢測：T細(xì)胞（增殖、殺傷、胞內(nèi)細(xì)胞因子等），