藥物分析課件

藥物的雜質檢查

一、藥物的雜質及其來源1、雜質的概念：藥物中的雜質是指存在于藥物中無治療作用或者影響藥物的療效和穩(wěn)定性，甚至對人體健康有害的一種物質。2、藥物的純度是指藥物的純凈程度它反映了藥物質量的優(yōu)劣。事實上，許多雜質不可能完全除掉。只要將其降低到最低限度，不妨礙藥物的療效和人體的健康，不影響藥物的穩(wěn)定性以及調配處理，可允許藥物中有一定限量的雜質存在。純凈的藥物是相對的，不純的藥物是絕對的。3、藥用規(guī)格與試劑規(guī)格的區(qū)別：藥物的純度又稱之為藥用規(guī)格；試劑的純度稱之為試劑規(guī)格藥物的純度（藥用規(guī)格或藥用純度）主要是從保證人民用藥安全、有效考慮，而化工產(chǎn)品及試劑純度并不考慮雜質的生理作用，僅從雜質可能引起的化學變化，在使用上所產(chǎn)生的影響以及它們使用的范圍和目的來加以規(guī)定。所以，二者不能相互代替使用。4、藥物中雜質的主要來源由生產(chǎn)中引入。如原料、中間體、副產(chǎn)物、殘留溶劑、器皿中金屬等貯藏過程中受外界因素的影響，引起藥物結構發(fā)生變化，水解、氧化、分解、聚合等。（與藥物的穩(wěn)定性有關）5、藥物中雜質的分類1)按來源分類：一般雜質/特殊雜質。一般雜質是指在自然界中分布較廣泛，在多種藥物的生產(chǎn)和貯藏過程中容易引入的雜質，如氯化物、硫酸鹽、鐵鹽、重金屬、砷鹽、酸堿、水分等。共12項，重點是前5項。特殊雜質是指在藥物的生產(chǎn)和貯藏過程中，根據(jù)該藥物的性質、生產(chǎn)方法和工藝條件，有可能引入的雜質。如阿司匹林中的游離水楊酸，鹽酸普魯卡因注射劑中對氨基苯甲酸，腎上腺素中的腎上腺酮等。2)按其性質分類：信號雜質/有害雜質。信號雜質本身一般無害，但其限量的多少可以反映出藥物的純度水平，如限量過大，表明藥物的純度差，因此也稱為指示性雜質。氯化物、硫酸鹽等就屬于信號雜質。重金屬、砷鹽、氰化物等，對人體有毒害，為有害雜質，在質量標準中必須嚴格控制，以保證用藥的安全。3)按其結構分類：無機雜質/有機雜質。二、藥物中雜質的限量檢查1、雜質限量檢查藥物中所含雜質的最大允許量，叫做雜質限量。藥物中雜質的檢查，一般不要求準確測定其含量，而只檢查雜質的量是否超過一定的限量。這種雜質檢查的方法叫做雜質的限量檢查（Limittest）。在藥品質量標準中雜質檢查多數(shù)為限量檢查。2、雜質限量檢查方法對照法（最常用的方法）靈敏度法比較法3、雜質限量的表示方法雜質限量就是指藥物中所含雜質的最大允許量，是通過與一定量的雜質標準溶液進行比較來確定，雜質的最大允許量也就是雜質標準溶液的濃度（C）與體積（V）的乘積。雜質的限量通常用百分之幾或百萬分之幾（ppm）來表示。4、雜質限量的計算三、一般雜質檢查的原理與方法一般雜質檢查包括：1、氯化物檢查法

2、硫酸鹽檢查法

3、鐵鹽檢查法

4、重金屬檢查法

5、砷鹽檢查法

6、酸堿度檢查法7、溶液顏色檢查法8、易炭化物檢查法9、澄清度檢查法10、熾灼殘渣檢查法11、干燥失重測定法12、有機溶劑殘留量測定法1、氯化物的檢查原理：

Cl-+Ag+→AgCl↓（稀硝酸環(huán)境下）與氯化鈉標準溶液比較濁度方法與限量：

1）樣品配成水溶液約25ml(溶液如為堿性，可加硝酸使成中性)+稀硝酸10ml+硝酸銀試液1.0ml+水至50ml搖勻,2）與氯化鈉標準溶液（10μg/ml,5.0-8.0μg/50ml）對照管比較。1）納氏比色管應置于黑色背景下，自上而下觀察。2）加入稀硝酸可加速生成AgCl，濁度較好，另外還可避免碳酸銀，氧化銀，磷酸銀沉淀的干擾，以每50ml中含稀硝酸10ml為宜。3）溫度以30-40

C濁度最大，室溫亦可。4）比色前應在暗處放置5min，光照將使AgCl分解，影響比色。5）氯化鈉標準溶液用量5.0-8.0ml/50ml（10μg/ml）時濁度區(qū)別最為明顯注意點：

1）溶液不澄清應過濾后取續(xù)濾液檢查，但紙中含有氯離子，用含硝酸的蒸餾水洗濾紙，再過濾。

2）溶液有色：①使其褪色，但不影響氯離子的測定（如檢查高錳酸鉀中的氯離子可先用乙醇褪色）；②將供試液分成兩份，一份加入硝酸銀反復沉淀，再在其中加入氯化鈉標準溶液，配成對照液；另一份作為供試液。

3）其它陰離子的干擾

I-、Br–

干擾的排除：①加入一定量的酸和過氧化氫，加熱煮沸，使其氧化為I2和Br2揮發(fā)后，溶液澄清后檢查。②利用AgI沉淀穩(wěn)定，在氨溶液中不溶解，而AgBr、AgCl沉淀在氨溶液中溶解的性質，除去I-的干擾。4）不溶于水的藥物：①加水使氯離子溶解后，過濾，取續(xù)濾液檢查。②藥物在稀乙醇或丙酮中有一定的溶解度，可加稀乙醇或丙酮溶解后檢查，但對照液也應用稀乙醇或丙酮配。

5）更難使氯離子溶出的藥物，如有機氯雜質，可采取堿水解后檢查。有的需有機破壞。2、硫酸鹽的檢查原理：

SO4

2-+Ba2+→BaSO4↓白色（稀鹽酸環(huán)境下）與標準硫酸鉀溶液比較濁度方法與限量：

樣品配成水溶液約40ml(溶液如為堿性，可加鹽酸使成中性)+稀鹽酸2ml+25%氯化鋇溶液5ml,+水至50ml搖勻,與硫酸鉀標準溶液（0.1mg/ml,1.0-5.0ml/50ml）對照管比較。1）加入稀鹽酸2ml(pH約為1.1，可避免碳酸鋇，磷酸鋇沉淀的干擾，如大于此酸度，靈敏度下降。

2）硫酸根濃度以50ml中含0.1-0.5mg為宜，濁度區(qū)別明顯。

3）溫度最佳25-30

C水浴10min,溫度低，濁度差。注意點：

1）溶液不澄清應過濾后取續(xù)濾液檢查，但要用含鹽酸的蒸餾水洗濾紙中的硫酸鹽。

2）有色溶液，處理方法同氯化物。

3）氯化鋇試液濃度以25%為最佳，應充分攪勻，以免影響濁度。

3、鐵鹽的檢查（影響藥物穩(wěn)定性）（一）硫氰酸鹽法（chp、usp采用）原理：

Fe3++6SCN-→

Fe(SCN)6

3-

（稀鹽酸環(huán)境下）與標準鐵溶液比較所呈顏色（紅色）方法與限量：

樣品配成水溶液約25ml+稀鹽酸4ml+過硫酸銨50mg,+水至35ml+30%硫氰酸銨溶液3ml+水至50ml,搖勻,與標準鐵溶液（10

g/ml,1.0-5.0ml/50ml）對照管比較。

1）標準鐵溶液（用稀硫酸配硫酸鐵銨FeNH4(SO4)2·12H2O，防止水解）濃度以50ml中含10-50

g為宜，吸收度與濃度呈良好的線性關系，呈色梯度明顯。

2）酸度以50ml中含稀鹽酸4ml為宜，所生成紅色最深。另外稀鹽酸可防止鐵水解和避免弱酸鹽的干擾。

3）過硫酸銨可使供試液中的Fe2+→Fe3+；防止光線使

Fe(SCN)6

3-褪色（

Fe(SCN)6

3-遇光敏感，易還原或分解）。另外過量的過硫酸銨還可增加配離子的穩(wěn)定性，提高反應靈敏度和消除氯化物與鐵鹽形成配合物的干擾。3、注意點：

1）某些藥物（葡萄糖、糊精、硫酸鎂）在檢查過程中需加硝酸處理，則不加過硫酸銨，但需煮沸除氧化氮（NO、NO2），因硝酸中含有亞硝酸，能與硫氰根離子作用，生成紅色亞硝酰硫氰化物，影響比色。

2）色調不一致時，可加正丁醇或異戊醇提取，取醇層比色，（

Fe(SCN)6

3-在有機溶液中溶解度大，易于濃縮）。3）重金屬干擾的排除：某些重金屬將極大地干擾測定（如汞、銀、銅離子，形成絡合物或沉淀）。

4）陰離子干擾的排除：氯離子、磷酸根離子、硫酸根等離子，與Fe3+

形成無色配離子干擾檢查，可適當增加酸度和增加硫氰酸銨試液的量，用正丁醇或異戊醇提取后比色。氯離子有影響，加入過量的硫氰酸銨可使氯離子干擾排除；硫酸根離子干擾較大，故不能在硫酸酸性條件下。

5）環(huán)狀結構或不溶于水的藥物需熾灼后檢查。（二）、巰基醋酸法（BP采用）原理：巰基醋酸還原Fe3+→Fe2+，在氨堿性條件下生成紅色配離子，與一定量標準鐵溶液經(jīng)同法處理后產(chǎn)生的顏色比較。在加巰基醋酸試液前加20%枸櫞酸2ml，使其與鐵離子成配離子，以免在氨堿性溶液中生成氫氧化鐵沉淀。特點：靈敏度高，但試劑較貴。4、重金屬的檢查（影響藥物穩(wěn)定性，

有毒，以鉛鹽為代表檢查）第一法：硫代乙酰胺法

僅適用于供試液澄清、無色、對檢查無干擾或經(jīng)處理后無干擾的藥物。原理：

CH3CSNH2+H2O→CH3CONH2+H2S

H2S

+Pb2+→PbS↓+2H+（pH3.5醋酸鹽緩沖液環(huán)境下）與標準鉛溶液比較所呈顏色（黃色到棕黑色）

方法與限量：

樣品+pH3.5醋酸鹽緩沖液2ml+水適量使成25ml+硫代乙酰胺試液2ml（溶液總量為27ml）,放置2min，與標準鉛鹽按同法制成的對照液比較。

1）納氏比色管應置于白紙背景下，自上而下觀察。

2）標準鉛溶液配法（10μg/ml硝酸鉛，取1-2ml,濃度以27ml溶液中含10—20μg的鉛）為防止鉛鹽水解，配制時，加入5ml硝酸，應在臨用前配制，使用不超過一周。

3）酸度以pH3.5為宜，此時PbS↓完全，酸度增大，呈色變淺，酸度太大則不顯色。若供試品呈強酸性，則需堿化至中性，然后加入醋酸鹽緩沖液。注意點：

1）供試品如有色，可采取外消色法（焦糖）,使兩管顏色相似或內消色法。

2）若溶液中有微量的高鐵鹽存在，在弱酸性溶液中將氧化硫化氫析出硫，影響比色，可加入維生素C或鹽酸羥胺，使Fe3+→Fe2+，F(xiàn)e2+不干擾測定。

3）若供試品為鐵鹽，可使其與鹽酸絡合為HFeCl62-,用乙醚除去再堿化后用氰化鉀掩蔽微量的鐵鹽，加硫化鈉檢查鉛鹽（酸性條件會破壞絡合物）。4）不溶性的硫化物應作處理（加酸、堿或形成配合物），使其可溶后檢查。

5）配制供試品溶液時，如使用鹽酸超過1.0ml，氨試液超過2ml，或加入其它試劑進行處理者，除另有規(guī)定外，對照液中應取同樣同量的試劑置瓷皿中蒸干，同上進行檢查。第二法：熾灼破壞法

將供試品熾灼破壞后檢查或取熾灼的殘渣進行檢查的方法，適用于在水、乙醇中難溶的藥物，或能與重金屬離子形成配合物的有機藥物。原理：同第一法方法與限量：同第一法注意點：

1）熾灼溫度應控制在500-600

C，否則重金屬將損失。

2）熾灼的殘渣用硝酸加熱處理時，要蒸干氧化氮，否則亞硝酸會氧化硫化氫析出硫而影響比色。

3）蒸干后加鹽酸使之成為氯化物，鹽酸中帶入重金屬的機會較多，應作空白檢查。第三法：硫化鈉法

適用于難溶于稀酸，但能溶于稀堿的藥物，如磺胺類、巴比妥類藥物。原理：S

2-

+Pb2+→PbS↓（在堿性條件下）與標準鉛溶液比較所呈顏色（黃色到棕黑色）方法與限量：

取供試品+氫氧化鈉試液5ml和水20ml使溶解+硫化鈉試液5滴，與標準鉛溶液比較所呈顏色。第四法：微孔濾膜法

適用于含2-5μg重金屬雜質的檢查（納氏比色管難以觀察的）。原理：同第一法方法與限量：

標準鉛溶液制備：精密量取標準鉛溶液一定量，用水或規(guī)定溶劑稀釋成10ml+pH3.5醋酸鹽緩沖液2ml與硫代乙酰胺試液1.0ml,放置10min，用50ml注射器轉移至濾器中濾過（濾速為1ml/min），濾畢，取下濾膜，在濾紙上干燥即得標準鉛斑。另取供試液10ml,同上操作，與標準鉛鹽對照液比較。5、砷鹽的檢查（一）、古蔡法（Gutzeit）原理

金屬鋅與酸作用生成新生態(tài)的氫，與藥物中微量的砷反應生成具有揮發(fā)性的砷化氫，遇溴化汞試紙，產(chǎn)生黃色至棕色的砷斑。

方法與限量：

1)標準砷斑用2ml，1μg/ml標準砷液相當于2μg的砷，制備可得清晰的砷斑。

2)反應液中加入碘化鉀和氯化亞錫能將As5+→As3+,碘化鉀被As5+氧化為碘分子又被氯化亞錫還原為碘離子，它與鋅離子能形成穩(wěn)定的絡合物，有利于砷化氫的不斷生成。另外，碘化鉀和氯化亞錫還能抑制銻化氫的生成（銻化氫也能與溴化汞試紙作用生成銻斑）。氯化亞錫又可與鋅作用，在鋅粒表面形成鋅錫齊，起去極化作用，從而使氫氣連續(xù)、均勻地發(fā)生。3）鋅粒和供試品中可能含有少量硫化物，在酸性條件下產(chǎn)生硫化氫氣體，與溴化汞的色斑，干擾試驗結果，故用醋酸鉛棉花吸收硫化氫。

4）醋酸鉛棉花的松緊程度應控制。注意點：

1）所生成的砷斑不穩(wěn)定，應干燥、避光、立即比較。

2）有機結合態(tài)的砷應破壞后檢查（加酸或堿），但溫度應低于600

C。

3）供試品若為鐵鹽，能消耗碘化鉀和氯化亞錫，可加酸性氯化亞錫，使高鐵離子還原后檢查。

4）供試品（硫化物、亞硫酸鹽、硫代硫酸鹽）若在酸性條件下生成硫化氫或二氧化硫，與溴化汞試紙作用生成黑色硫化汞和金屬汞，可先用硝酸處理，使其氧化為硫酸鹽。

5）銻鹽含量較多時，可改用白田道夫法檢查砷,其原理為氯化亞錫在鹽酸酸性條件下還原為棕褐色的膠態(tài)砷，與一定量的標準砷鹽比較，本法的靈敏度為20μg（以As2O3計）。（二）二乙基二硫代氨基甲酸銀法[Ag（DDC）法）]原理

同古蔡法，但砷化氫導出后與Ag（DDC）作用，生成紅色膠態(tài)銀，必要時可將吸收液移入吸收池，以Ag（DDC）為空白，在510nm處比色，與一定量的標準砷鹽比較，還可測定含量方法與限量：

1）加入有機堿可促進反應的進行，USP用0.5%Ag（DDC）的吡啶溶液（靈敏度高達0.5μgAs/30ml），ChP2000版用0.25%Ag（DDC）的三乙胺-氯仿溶液(靈敏度略低)。

2）銻鹽的干擾小。

（三）、次磷酸法原理

在鹽酸酸性條件下，次磷酸還原砷鹽為棕色的游離砷，再與一定量的標準砷鹽比較。方法與限量：

1）用于硫化物、亞硫酸鹽以及含銻藥物的砷鹽檢查，不產(chǎn)生干擾。

2）靈敏度較古蔡法低。注意四種檢查方法的生成物：古蔡法生成的是黃色至棕色的砷斑Ag（DDC）法生成的是紅色膠態(tài)銀

白田道夫法生成的是棕褐色的膠態(tài)砷

次磷酸法生成的是棕色的游離砷

6、硒、氟、硫化物的檢查(一)硒檢查法氧瓶燃燒法進行有機破壞（關鍵）鹽酸羥胺還原Se6+為Se4+在pH在2.0±0.2條件下，加入二氨基萘試液反應100分鐘產(chǎn)物用環(huán)己烷提取后于378nm波長測吸收度(二)氟檢查法有機氟化物氧瓶燃燒分解產(chǎn)生氟化氫，用水吸收，pH4.3時茜素氟藍與硝酸亞鈰以1：1結合成紅色配位化合物，遇到F－，三者以1：1：1結合成紫色配位化合物。(三)硫化物檢查法硫化物與鹽酸作用產(chǎn)生硫化氫氣體，遇醋酸鉛試紙產(chǎn)生棕色的硫化鉛“硫斑”，與一定量的標準硫化鈉溶液在相同條件下產(chǎn)生的硫斑相比較。儀器同古蔡法的檢砷裝置，但倒氣管不用裝醋酸鉛棉花，溴化汞試紙改成醋酸鉛試紙。7、干燥失重測定法

指藥物在規(guī)定條件下，經(jīng)干燥后所失的重量，通常以百分率表示，主要用于控制藥物中的水分或揮發(fā)性物質。測定方法有：（一）常壓恒溫干燥法適用于受熱穩(wěn)定的藥物，可在105

C干燥至恒重，如藥物含水量較多，或熔點較低，應適當降低干燥溫度或先于低溫下干燥失去大部分水，再提高溫度。（二）干燥劑干燥法適用于受熱易分解或易揮發(fā)的藥物，將藥物置于干燥器內，利用干燥器內的干燥劑，吸收供試品中的水分，干燥至恒重。常用干燥劑的吸收能力：五氧化二磷

硅膠

硫酸（三）減壓干燥法適于受熱不穩(wěn)定、熔點低或難以干燥的藥物。減壓條件下，水或其他揮發(fā)性物質沸點降低，大大縮短干燥時間和干燥溫度，1、熱重分析法（TGA）在程序控制溫度下，測量物質的質量與溫度的關系。熱重分析儀主要有一個不受溫度影響，靈敏度極好的微量分析天平，放在程序升溫爐中，將供試品放入天平后，按一定程序升溫，并以惰性氣體帶走揮發(fā)性成分，由于揮發(fā)性成分的失去，供試品的重量發(fā)生改變。以溫度為橫坐標，重量為縱坐標，可作出一條熱重曲線。特點：1）、能準確、快速測定物質的質量變化和變化速度。2）、樣品用量少，10mg即可測定，適用于貴重藥物或易變質藥物。3）、TGA可區(qū)別藥物所含的是結晶水或吸附水，并可測定結晶水含量。2、差示熱分析法(DTA)物質在加熱過程中，發(fā)生物理或化學變化，同時有吸熱和放熱而影響溫度，將樣品與一種熱容相似的惰性參比物質，同置于一個可控制的加熱器中，利用熱電偶分別連接供試品和參比物質，并按一定程序升溫，測量供試品與參比物質之間的溫度差（溫度差=T供試品-T參比物質）隨溫度或時間的變化。DTA曲線中，吸熱反應產(chǎn)生負峰，放熱反應產(chǎn)生正峰；物理變化常得到尖峰，而化學變化峰型較寬。特點：

1）可測定藥物的熔點、根據(jù)吸熱或放熱峰的數(shù)目、形狀、和位置可對樣品進行定性分析，并估計純度

2）樣品用量比TGA更少

3）很多物質在加熱過程中會揮發(fā)失重，或發(fā)生化學反應產(chǎn)生揮發(fā)性物質，故DTA和TGA可結合使用。3、差示掃描量熱法（DSC）在整個分析過程中，維持樣品與參比物質的溫度相同，測定維持在相同溫度條件下所需的能量差。當樣品發(fā)生吸熱反應時，溫度要下降，必須補充較參比物質更多的能量才能使其溫度與參比物質相同。由于供給的能量差相當于樣品發(fā)生變化時所吸收或釋放的能量，記錄維持平衡能量即是所需轉化能量，所以，DSC較DTA更適合測量物質在物理或化學中焓的變化。DSC與DTA不同，它是以熱流率（mJ/s）為縱坐標，溫度或加熱時間為橫坐標，通常曲線的吸熱反應峰向上，放熱反應峰向下。特點：1）、峰在溫度軸的位置、形狀、數(shù)目與藥物的性質有關，可用于鑒別物質，檢查純度和測定相變溫度。峰的面積與反應熱焓有關，可估計參與反應物質的量或測定熱化學參數(shù)。2）、DSC與DTA可用于低共熔雜質的分析。（藥物中低共熔雜質的量增多，熔點會降低）。3）、DSC與DTA還可用于藥物中無效或低效晶型的檢查（不同晶型的藥物，其熔點往往不同，在差熱曲線熔化吸收峰的位置就不同）。熱分析法檢查純度的前提：

1）雜質量要小，純度大于98.5%

2）雜質與藥物能形成低共熔混合物，并能溶解于熔化的藥物

3）無固體溶液形成。8、水分測定法主要采用費休法（CP還收載甲醛法）原理：用費休試液（碘、二氧化硫、吡啶和甲醇）進行非水溶液中的氧化還原滴定，即利用碘氧化二氧化硫為三氧化硫時需要一定量的水分參加反應。I2+SO2+H2O2HI+SO3費休試劑的滴定度：

供試品中水分的含量：F=WAB

供試品中水分的含量（％）＝*100%（AB）*FWF值在4.0mg/ml上下為宜，3.0mg/ml以下滴定不敏銳9、熾灼殘渣檢查法檢查有機藥物中非揮發(fā)性無機雜質的一種方法。有機藥物經(jīng)高溫（700-800

C）加熱炭化，加入硫酸，低溫加熱除盡硫酸蒸氣后，于高溫（700-800

C）熾灼至完全灰化，使有機物質破壞分解為揮發(fā)性物質逸出，非揮發(fā)性無機雜質成為硫酸鹽。注意點：1、操作及稱重方法：

1）坩堝要事先恒重，精密稱定，所得的殘渣要恒重；

2）坩堝應斜置，防止暴沸和濺出；

3）有機藥物在坩堝中加熱開始時應緩緩加熱，加入硫酸后也應緩緩加熱，防止藥物暴沸、濺出和硫酸腐蝕;4）坩堝熾灼后要放于干燥器中冷卻后稱重。2、如供試品為重金屬，熾灼溫度應為500-600

C，防止重金屬逸失。3、藥物的熾灼殘渣限量一般為0.1%-0.2%（1g供試品不超過1-2mg）。含氟藥物用鉑坩堝10、易炭化物檢查法

檢查藥物中易被硫酸（含硫酸94.5%-95.5%，g/g）炭化或氧化而呈色的有機物質，同樣與標準比色液比較，借以控制藥物中易炭化物的含量。

檢查時將一定量的供試品加入5ml的硫酸中，振搖溶解后，靜置15min，與一定標準比色液比較，不得更深。11、溶液顏色檢查法ChP采取兩種檢查方法：①目視比色法(黃色、藍色、紅色原液)②分光光度法③色差計法

1、目視比色法：

取一定量的供試品，置于25ml納氏比色管中，加水溶解至10ml，另取規(guī)定色調色號的標準比色液10ml,置25ml納氏比色管中,兩管同置白色背景，自上而下或平視觀察，供試品管所顯顏色與對照品管比較，不得更深。

標準比色液由重鉻酸鉀、硫酸銅、氯化鈷配成。2、分光光度法檢查有色雜質：

配制一定濃度的供試品溶液，在規(guī)定波長測定吸收度，吸收度不得過規(guī)定值。3、色差計法：通過色差計直接測定溶液的透射三刺激值，對溶液顏色進行定量表述和分析。目視法難以判斷時使用。12、溶液澄清度檢查法檢查藥物中的不溶性雜質，主要用于制備注射劑的原料藥或注射劑檢查。對照用的比濁液可用1.00%的硫酸肼與10%烏洛托品混合配制，生成的甲醛腙在水中形成白色渾濁，以不同量的水稀釋可得不同濁度的標準液。藥典中澄清的定義為：供試品溶液的澄清度相同于所用的溶劑，或不超過0.5號濁度標準液。13、酸堿度檢查法（一）酸堿滴定法eg：檢查NaCl的酸堿度（二）指示劑法eg：純化水法（三）pH測定法eg：注射劑等四、特殊雜質的檢查原理方法特殊雜質指在該藥物的生產(chǎn)和貯存過程中，根據(jù)藥物的性質、生產(chǎn)方法和工藝條件，可能引入的特有雜質。特殊雜質的檢查方法，主要是根據(jù)藥物和雜質在理化性質和生理作用的差異來進行。方法：（一）物理法

（二）化學法

（三）旋光法（四）分光光度法（五）色譜法（一）物理法1、臭味和揮發(fā)性的差異

利用藥物中存在的雜質具有特殊臭味，可以從臭味判斷該雜質的存在。

檢查揮發(fā)性藥物中的不揮發(fā)物，利用藥物在室溫或加熱揮發(fā)后，殘留殘渣，于一定溫度烘至恒重，其重量不得超過規(guī)定，借以控制不揮發(fā)性雜質。2、顏色的差異

某些藥物無色，而其分解變色產(chǎn)物有色，或在生產(chǎn)過程中引入了有色物質，可通過檢查供試品溶液的顏色來控制有色雜質的量。3、溶解行為的差異

有的藥物可溶于水、有機溶劑或酸、堿中，而其雜質不溶；反之，雜質可溶而藥物不溶。(二）化學法1、酸堿性的差異2、氧化還原性的差異

藥物是否易被氧化與還原與其氧化還原電位有關，氧化還原電位可受酸堿等諸多因素的影響，但從標準電位比較，常可看出哪個易氧化，如果雜質的標準電位較小，即說明較易被氧化。利用其易氧化的性質，?？蓮姆磻痤伾淖兓瘉頇z查雜質。3、雜質與一定試劑反應產(chǎn)生沉淀4、雜質與一定試劑反應產(chǎn)生顏色

5、雜質與一定試劑反應產(chǎn)生氣體例：氰化物檢查方法：

原理:氰化物在酸性條件或水溶液中，產(chǎn)生氫氰酸擴散或逸出，遇試劑顯色。6、藥物經(jīng)有機破壞后檢查雜質

有機藥物在生產(chǎn)過程中可能引入鹵素、硫、磷、硒等，作為雜質必須檢查。但某些環(huán)狀藥物，這些雜質以共價鍵與藥物分子結合，不能直接檢出，必須經(jīng)有機破壞，使雜質游離，采用適當?shù)姆椒z出。有機破壞方法多采用氧瓶燃燒法第一法：儀器裝置：砷鹽檢查法的裝置，但使用時，導氣管不加醋酸鉛棉花，溴化汞試紙改為堿性硫酸亞鐵試紙。檢查法：供試品加入瓶中，加水10ml,與酒石酸溶液3ml，迅速將裝妥的導氣管密塞于瓶上，搖勻，小火加熱，微沸1min,取下堿性硫酸亞鐵試紙，加三氯化鐵與鹽酸各一滴，15min內不得顯綠色或藍色。特點：靈敏度高，但不適用于在酸性條件下加熱會產(chǎn)生氰化物的藥物。第二法：適用于在酸性條件下加熱會產(chǎn)生氰化物的藥物檢查法：取規(guī)定量的供試品，置磨口玻塞錐形瓶中，加水溶解成5ml，立即將精密加有三硝基苯酚鋰試液1ml的小杯（容積為5ml）平放入瓶底，密塞，在暗處放置過夜，取出小杯，加水2ml,混勻，于500nm處測定吸收度；另取規(guī)定量標準氰化鉀溶液（5μg/ml），加水至5ml，用同法處理所得的吸收度相比較，供試溶液的吸收度不得超過標準溶液。特點：靈敏度高，但影響因素較多如時間、溫度、顯色試劑的用量要與藥典一致。三、旋光法具有旋光活性的藥物在制備過程中易引入光學異構體，利用他們旋光性的差別，通過測定旋光度或比旋光度進行雜質限量控制。Eg：檢硫酸阿托品中的莨菪堿四、分光光度法紫外分光光度法比色法紅外分光光度法原子吸收分光光度法(一)紫外分光光度法根據(jù)藥物與雜質結構中紫外吸收光譜的差異，進行雜質檢查。

1）雜質在某一波長有最大吸收，而藥物在此波長無吸收，通過控制供試品溶液在雜質特征吸收波長處的吸收度來控制雜質的量。Eg：檢腎上腺素中腎上腺酮(310nm處有吸收)

2）雜質與藥物紫外吸收光譜重疊，但可改變藥物在某兩個波長處的吸收度比值來控制雜質的量。（二）比色法（三）紅外分光光度法主要用于檢查藥物中低效或無效晶型。

（三）原子吸收分光光度法原子吸收分光光度法利用藥物中所含待測元素燈發(fā)出的特征譜線通過供試品蒸汽時，被蒸汽中待測元素的基態(tài)原子所吸收，通過測定輻射光強度的減弱程度，可以求出供試藥物中待測元素的含量。優(yōu)缺點：1）專屬性強，主要用于金屬離子的測定。2）方法準確，取樣量少，可分析ng級到pg級的金屬元素，速度快。3）應用范圍廣，目前可測70種原子。4）一種燈只能測一種元素，價貴。含量測定方法：

1）標準曲線法：在儀器推薦的濃度范圍內，制備含待測元素的標準溶液至少3份，濃度依次增加，并分別加入供試品溶液配制中的相應試劑。除另有規(guī)定外，一般用去離子水制成水溶液。測定時，先將去離子水噴入火焰，調讀數(shù)為0，再將最濃的標準溶液噴入火焰，調讀數(shù)為滿標度；然后依次噴入標準溶液，取每一濃度3次讀數(shù)的平均值，與相應濃度作標準曲線。按規(guī)定制備樣品溶液，使待測元素的估計濃度在標準曲線濃度范圍內，將供試品噴入火焰，取3次讀數(shù)的平均值，從標準曲線上查得相應的濃度，計算元素的含量。雜質檢查法：

取供試品制備供試溶液；另取等量的供試品，加入限度量的待測元素溶液，制成對照溶液，并將對照溶液噴入火焰，調節(jié)儀器使具有合適的讀數(shù)（a）;在相同條件下噴入供試品溶液，讀數(shù)為（b）,b值要小于（a-b）。五、色譜法色譜法是利用藥物與雜質在吸附或分配性質上的差異進行分離分類：紙色譜法薄層色譜法高效液相色譜法氣象色譜法（一）紙色譜法以紙為載體，以紙上所含水分或其它物質為固定相，用展開劑進行展開的分配色譜。常用于極性較大的藥物雜質檢查。但展開時間長，斑點較易擴散，不能用強酸的腐蝕性顯色劑，應用少。（二）薄層色譜法最常用于特殊雜質限量檢驗的一種方法（1）靈敏度法：在一定供試品及檢查條件下，不允許有雜質斑存在（2）雜質對照品法根據(jù)雜質限量，取一定濃度已知雜質的對照品溶液和供試品溶液，分別點加在同一硅膠（或其它吸附劑）薄層板上，展開和定位后檢查。特點：能較為理想地定量和定性，但首先須確認雜質為何物且制備該雜質的對照品。（3）供試品自身對照法

將供試品溶液按限量要求稀釋至一定濃度作為對照溶液，與供試溶液分別點加在同一薄層板上，展開后，定位，供試品溶液所顯雜質斑點不得深于對照品溶液所顯主斑點顏色。

特點：1）當雜質結構不能確定，或無雜質的對照品時，可采用此法。2）較簡便，易于普及。3）要求雜質與對照品的顯色靈敏度應相同或相似。（4）對照藥物法無雜質對照品、雜質與供試品顯色差異較大時，取與供試品相同的藥物最對照。（三）高效液相色譜法

(1)峰面積歸一化法

測量各雜質峰的面積和色譜圖上除溶劑峰以外的各色譜峰面積，計算雜質峰面積占總峰面積的百分率。

特點：1）不需對照品，簡便易行。2）記錄圖譜的時間應為主峰保留時間的幾倍。3）通常只能粗略考察供試品的雜質量，除另有規(guī)定外，一般不宜用于微量雜質的檢查。(2)主成分自身對照法

將供試溶液稀釋成一定濃度，作為對照液。分別取供試品溶液和對照品溶液進樣，將供試品溶液中各雜質峰面積及其總和，與對照液主成分峰面積比較，以控制供試品中雜質的量。

特點：1）簡單方便，無須對照品。2）適用于雜質與主成分峰面積相差懸殊時的雜質檢查3）忽略了各雜質與主成分的響應值，可能不同。(3)加校正因子的主成分自身對照法

精密稱取雜質對照品和待測成分對照品各適量，配制測定雜質校正因子的溶液，進樣，記錄色譜圖，計算雜質的校正因子。此校正因子可直接載入各品種正文，用于校正雜質的實測峰面積。式中，AS為內標物質的峰面積或峰高；AR為對照品的峰面積或峰高；CS為內標物質的濃度；CR為對照品的濃度。再取含有內標物質的供試品溶液，注入色譜儀，記錄色譜圖，測量供試品中待測成分（或雜質）和內標物質的峰面積或峰高，按下式計算含量：式中，Ax為供試品或雜質的峰面積或峰高；CX為供試品或雜質的濃度。特點：1）準確度好，考慮了雜質與主成分響應值的不同。2）必須有雜質標準品，國內不普及，但國外藥典已不少見。(4)內標法加校正因子測定供試品中某個雜質或主成分含量：

精密稱取對照品和內標物質，分別配制成溶液，精密量取各溶液，配成校正因子測定的對照溶液。取一定量注入色譜儀，記錄色譜圖。測量對照品和內標物質的峰面積或峰高，計算含量。(5)外標法：

精密稱取對照品和供試品，配制成溶液，分別精密量取一定量，注入色譜儀，記錄色譜圖。測量對照品和供試品待測成分的峰面積或峰高，按下式計算含量：特點：1）若用定量環(huán)進樣，進樣量準確，定量好2）必須有雜質標準品。一、結構一、基本結構

R1CO-NH

CC=OR2CO-NH取代基

母核（環(huán)狀丙二酰脲）常見巴比妥類藥物及其結構

名稱

R1R2備注

巴比妥-C2H5-C2H5苯巴比妥-C2H5-C6H5司可巴比妥-CH2CH=CH2-C3H7異戊巴比妥-C2H5硫噴妥鈉

-C2H5

CH(CH2)2CH32位C上硫代鈉鹽

CH3

CH3CH2CH2CHCH3二、性質1、溶解性本類藥物不溶于水，易溶于乙醇及有機溶劑。其鈉鹽易溶于水而難溶于有機溶劑。2、弱酸性（1）發(fā)生互變巴比妥酸類環(huán)狀結構中具有1，3－二酰亞胺基團，易發(fā)生酮式－烯醇式互變。（2）電離呈弱酸性在水溶液中可發(fā)生二次電離，電離出氫離子，相當于二元酸與強堿形成水溶性鹽。R1CO-NH

CC=OR2CO-NHR1CO-NH

CC-OHR2CO-N-H+HR1CO-NH

CC-OR2CO-N-H+H

OR1C=N

CC-OR2CO-N3、易水解性巴比妥類藥物中酰亞胺基團與堿液共沸即水解放出氨氣，使?jié)駶櫦t色石蕊試紙藍。

R1

CO-NH R1CCO+5NaOH→CHCOONa+2NH3↑+2NaCO3R2CO-NHR2巴比妥類鈉鹽的水解

R1

CO-NHR1COONaCC-OHCR2CO-NR2CONHCONH2R1CHCONHCOCH2R2H2O室溫-CO24、與金屬離子反應

巴比妥類藥物的基本結構中含有丙二酰脲基團(-CONHCONHCO-),在適宜的pH液中,易與重金屬離子，如銀鹽、銅鹽、鈷鹽等絡合而呈色或產(chǎn)生有色沉淀。與銀鹽反應：碳酸鈉溶液中，與硝酸銀反應，一銀鹽溶解，二銀鹽白色沉淀。與銅鹽反應：銅-吡啶溶液中與巴比妥類藥物反應-紫色；與硫噴妥鈉反應顯綠色。5、紫外吸收光譜特征5,5取代巴比妥類藥物其本身在紫外區(qū)沒有明顯吸收，加堿生成一鈉鹽或二鈉鹽后，以酸根陰離子形式存在，增加了共軛雙鍵，在紫外區(qū)就有了特征吸收。此特性可以用于本類藥物的鑒別和含量測定。如：右圖為巴比妥類藥物的UV吸收圖A線：在酸性液中不發(fā)生電離B線：pH10一級電離λmax=240nmBC線：pH13二級電離λmax=255nm1,5,5取代無二級電離

C硫代在酸堿中均有吸收

A

A：未電離

B：一級電離

C：二級電離三、鑒別試驗一、丙二酰脲類反應中國藥典附錄中“一般鑒別試驗”項下用于丙二酰脲的鑒別反應為銀鹽反應和銅鹽反應。1、銀鹽反應本品

加Na2CO3溶解

滴加硝酸銀試液2、與銅鹽反應巴比妥類藥物在吡啶溶液中與銅砒啶試液作用，生成配位化合物，顯紫色或生成紫色沉淀（1）銅砒啶試液制備（2）與銅砒啶試液反應三、特殊取代基或元素反應

（重點）（一）芳環(huán)取代基的反應（苯巴比妥）1、與硫酸－亞硝酸鈉的反應苯巴比妥＋硫酸－亞硝酸鈉→橙黃色→橙紅色2、與甲醛硫酸的反應苯巴比妥＋甲醛－硫酸→玫瑰紅色（二）不飽和烴基的反應1、與碘或溴試液反應司可巴比妥鈉結構中含丙稀基，可與碘試液發(fā)生加成反應，使碘試液棕黃色消失。2、與高錳酸鉀反應(含不飽和烴基,具還原性)（三）硫元素反應硫噴妥鈉分子結構中含有硫元素，在NaOH試液中與鉛離子反應，生成白色沉淀，加熱后，轉變?yōu)楹谏玴bS.四、熔點測定利用巴比妥類鈉鹽藥物易溶于水，加酸加熱煮沸后，可析出巴比妥類藥物的沉淀，經(jīng)過濾干燥后，測其熔點來鑒別。1、苯巴比妥鈉的鑒別本品0.5g加稍過量稀HCl干燥，測熔點加水溶解

析出白色↓濾過174～178℃▲四、特殊雜質檢查苯巴比妥的特殊雜質檢查1、酸度2、中性或堿性雜質3、乙醇溶液的澄清度五、含量測定（一）、銀量法1、原理：本品加碳酸鈉溶解，用硝酸銀（0.1mol/L)滴定至出現(xiàn)二銀鹽的白色渾濁，即為終點。2、判斷終點方法（1）直接觀察法（2）電位法（中國藥典采用）溶劑系統(tǒng)：甲醇－30％無水碳酸鈉電極系統(tǒng)：指示電極：銀電極參比電極：飽和甘汞電極3、計算：含量％＝VTF×100%MS4、注意事項；1）加新配無水碳酸鈉：碳酸鈉久置吸收空氣中二氧化碳，生成碳酸氫鈉，使含量下降。2）銀電極在臨用前用稀硝酸浸洗，再用水淋洗干凈。二、溴量法1、適用：5位取代基含雙鍵的巴比妥類藥物2、原理：例：司可巴比妥鈉分子結構中有烯丙基，含有雙鍵，可與溴定量發(fā)生加成反應。3、方法：取供試品精密稱定精密加溴滴定液

暗處靜置15’置碘瓶加水溶解加鹽酸，振搖1’加KI，密塞，搖勻

用Na2S2O3滴定

滴定至藍使剩余溴轉化為碘

近終點加淀粉指示液

色消失3、計算：含量％＝（V空－V)T*F×100％

供試品重▲三、酸堿滴定法1、原理：巴比妥類藥物呈弱酸性，以標準堿直接滴定。2、方法：本品0.5g加乙醇20ml溶解0.1mol/lNaOH滴定精密稱定麝香草酚酞指示液8d作空白校正分類苯甲酸類：苯甲酸鈉、丙磺舒等水楊酸類：阿司匹林、對氨基水楊酸鈉其他芳酸類：氯貝丁酯、布洛芬第一節(jié)

苯甲酸類藥物的分析一、結構與性質溶解性酸性三氯化鐵反應分解性二、鑒別試驗（一）三氯化鐵反應苯甲酸的堿性水溶液或苯甲酸鈉的中性溶液與三氯化鐵生成褐色沉淀丙磺舒與三氯化鐵成米黃色沉淀(二)分解產(chǎn)物的反應苯甲酸鹽-升華含硫藥物-與氫氧化鈉、硝酸反應產(chǎn)生硫酸鹽，或加熱產(chǎn)生二氧化硫泛影酸加熱破壞后產(chǎn)生碘蒸汽（三）其他方法三、雜質檢查泛影酸的雜質檢查游離碘鹵化物碘化物氨基化合物四、含量測定（一）酸堿滴定法1、直接酸堿滴定法（苯甲酸、丙磺舒等）2、剩余酸堿滴定法（羥苯乙酯）3、雙相酸堿滴定法（二）銀量法泛影酸結構中具有有機碘，遇強還原劑，可生成無機碘化物，故可采用直接銀量法雙相滴定法測定苯甲酸鈉的含量1、采用雙相滴定法原因：（1）苯甲酸鈉堿性較弱，反應不能進行完全，不宜用酸直接滴定。（2）滴定過程析出游離酸不溶于水，使滴定終點突躍不明顯，不利于終點的正確判斷。2、雙相滴定法定義：在水和不溶于水的有機溶劑兩相中進行酸堿滴定的方法。適用范圍：芳酸類水溶性鹽的含量測定。3、原理：水層有機層4、測定方法：在分液漏斗中進行有機相：乙醚反應產(chǎn)物苯甲酸溶于此相滴定劑為鹽酸（0.1mol/l)指示液：甲基橙注意：邊滴邊振搖，使反應產(chǎn)物苯甲酸隨時溶于乙醚層，使反應進行到底。終點判斷：在水層第二次呈現(xiàn)持續(xù)的橙紅色即為終點。第二節(jié)水楊酸類藥物的分析一、結構與性質溶解性酸性三氯化鐵反應重氮化－偶合反應分解性二、鑒別試驗（一）與FeCl3反應1、水楊酸及其鹽反應條件：弱酸性（pH4-6）反應現(xiàn)象：紫堇色2、芳酸酯類（如阿司匹林）：需加熱水解后與FeCl3反應方法：取本品0.1g煮沸放冷顯紫堇色加水10ml加FeCl31d（二）水解反應：阿司匹林與碳酸鈉試液反應反應現(xiàn)象：水楊酸白色沉淀析出，并產(chǎn)生醋酸的臭氣（三）重氮化-偶合反應對氨基水楊酸鈉具芳伯氨基結構，在酸性溶液中，與亞硝酸鈉液進行重氮化反應，生成的重氮鹽與堿性β-萘酚偶合產(chǎn)生橙紅色沉淀.（四）其他方法三、雜質檢查（一）阿司匹林的雜質檢查1、溶液的澄清度（1）雜質來源：①原料水楊酸精制過程中產(chǎn)生脫羧反應生成的苯酚②合成工藝中由副反應生成的醋酸苯酯、水楊酸苯酯和乙酰水楊酸苯酯等。（2）檢查原理：利用藥物與雜質在溶解行為上的差異進行檢查（3）檢查方法：取供試品0.5g溶液應澄清用45℃的碳酸鈉試液10ml2、游離水楊酸（SA）----特殊雜質（1）來源：①生產(chǎn)過程乙?；煌耆ㄎ捶磻猄A）②貯存不當水解而產(chǎn)生的SA（2）檢查原理：阿司匹林+硫酸鐵銨水楊酸+硫酸鐵銨

紫堇色與一定量水楊酸對照液生成的色澤比較，不得更深。（二）對氨基水楊酸鈉中特殊雜質-間氨基酚利用藥物與雜質在乙醚中的溶解性差異。分離后，取雜質所在的乙醚層，加適量水，進行雙相酸堿滴定法檢查。四、含量測定（一）酸堿滴定法直接酸堿滴定法二步酸堿滴定法（二）亞硝酸鈉滴定法（三）紫外分光光度法（四）高效液相滴定法1、直接酸堿滴定法利用阿司匹林等藥物游離羧基的酸性，以標準堿滴定液直接滴定。1）原理：2）方法：滴定液：NaOH(0.1mol/l)溶劑：中性乙醇指示液：酚酞（1）適用范圍：阿司匹林片劑采用本法原因：①消除片劑中穩(wěn)定劑干擾（枸櫞酸或酒石酸）②消除水解產(chǎn)物干擾：阿司匹林片在貯存過程水解產(chǎn)生水楊酸和醋酸（2）測定：第一步：中和精密稱取片粉酚酞指示劑迅速滴至粉紅色加中性乙醇溶解NaOH滴定液酒石酸等穩(wěn)定劑SA成為相應鈉鹽ASA反應式如下：第二步：水解中和后供試品液水浴加熱加定量過量NaOH(0.1mol/l)H2SO4(0.05mol/l)回滴空白校正反應式如下：每1mlNaOH(0.1mol/l)相當于18.02mg的C9H8O4（3）含量計算：標示量:表示制劑中各成分含量的理論值。一般用標示量的百分值來控制制劑含量。公式：標示量％＝實際測得含量

×100％

標示量（二）亞硝酸鈉法對氨基水楊酸具有芳伯氨基，在鹽酸酸性條件下與亞硝酸鈉定量地發(fā)生重氮化反應。中國藥典采用亞硝酸鈉滴定法，用永停法指示終點。分類：芳胺類對氨基苯甲酸酯類酰胺類芳烴胺類：苯乙胺類脂肪胺類：丙胺類第一節(jié)對氨基苯甲酸酯類藥物的分析一、結構與性質溶解性芳香第一胺易水解性弱堿性游離堿難溶于水R1NHCOOR2二、鑒別試驗（一）重氮化－偶合反應（苯佐卡因和鹽酸普魯卡因）反應條件：酸性溶液中生成重氮鹽再與堿性β－萘酚偶合反應現(xiàn)象：紅色沉淀

鹽酸丁卡因分子結構中無芳香第一胺結構，不發(fā)生重氮化－偶合反應。但其分子結構中的芳香仲胺在酸性溶液中與亞硝酸鈉反應，生成N－亞硝基化合物的乳白色沉淀。怎樣鑒別鹽酸普魯卡因與鹽酸丁卡因？（二）水解反應（鹽酸普魯卡因）鹽酸普魯卡因NaOH白色沉淀加熱油狀物水解二乙氨基乙醇使石蕊試紙變藍對氨基苯甲酸鈉HCl對氨基苯甲酸

HCl水溶性的鹽酸鹽（三）紫外特征吸收光譜（四）紅外吸收光譜三、雜質檢查鹽酸普魯卡因注射液中檢查對氨基苯甲酸來源：本品注射液受滅菌溫度、時間、溶液pH貯藏時間、光照和金屬離子等影響，易發(fā)生水解，生成對氨基苯甲酸。意義：經(jīng)長久貯存或高溫加熱，對氨基苯甲酸進一步脫羧為苯胺，苯胺又氧化為有色物質使注射液變黃，使療效下降，毒性增加。方法：采用硅膠H－CMC薄層色譜法檢查。四、含量測定（一）亞硝酸鈉滴定法1、原理：分子結構中具有芳伯氨基以及水解后具有芳伯氨基藥物，在酸性條件下，與NaNO2反應生成重氮鹽。Ar-NHCOR+H2O→Ar-NH2+RCOOHAr-NH2+NaNO2+2HCl→Ar-N+2Cl-+NaCl+2H2O重氮化反應歷程

NaNO2+HCl→HNO2+NaClHNO2+HCl→NOCl+H2OAr-NH2NOCl(慢)Ar-NH-

NO→Ar-N=N-

OH→Ar-N+2Cl-2、測定的主要條件1）加入KBr作用：加快反應

KBr+HCl→HBr+KClHNO2+HBr→NOBr+H2O[NO]+濃度增大，反應向正反應方向進行。2）加入過量鹽酸有利于①重氮化反應速度加快②重氮鹽在酸性液中穩(wěn)定③防止偶氮氨基化合物的生成。3）滴定溫度：室溫10～30℃。若溫度過高，使HNO2逸失，并且重氮鹽分解。[Ar-N≡N]Cl-+H2O→Ar-OH+N2↑+HCl4）滴定速度：重氮化反應為分子反應，應緩緩加入NaNO2,不斷攪拌。為防止HNO2揮發(fā)分解,滴定管尖端插入液面下2/3處，一次性將大部分亞硝酸鈉滴定液在攪拌條件下迅速加入滴定管尖端提出液面，用少量水沖洗尖端，再緩慢滴定。滴定終點處，最后一滴加入后，攪拌1～5min，再確定終點是否真正到達。3、指示終點的方法1）永停法：電流法，存在可逆電對HNO2/NO原理：陽極NO+H2O≒HNO2+H++e

陰極HNO2+H++e≒NO+H2O電流計指針突然偏轉，不再回零。2）外指示劑法：碘化鉀-淀粉糊劑3）內指示劑法（二）非水堿量法1、原理：鹽酸丁卡因為有機堿鹽酸鹽，結構中有脂烴胺側鏈，具弱堿性。2、方法：滴定劑：0.1mol/l高氯酸溶劑：冰醋酸－醋酐，指示劑：結晶紫終點：藍色3、操作注意點1）冰醋酸中加適量醋酐：增強丁卡因堿性。2）加Hg(Ac)2:消除氫鹵酸干擾（三）高效液相色譜法系統(tǒng)適應性試驗（1）理論塔板數(shù)（柱效）（2）分離度（3）拖尾因子（4）重復性測定方法（1）內標法mx＝f*（2）外標法mx＝*mRAxAs/msAxAR重酒石酸去甲腎上腺素注射液的含測：對照品溶液制備：取重酒石酸去甲腎上腺素對照品約70mg，精密稱定，置25ml量瓶中，加流動相溶解并稀釋到刻度，搖勻，精密量取該溶液與內標溶液（0.160mg/ml）各2ml，置10ml量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻即得。供試品溶液的制備：精密量取標示量為10mg/2ml的重酒石酸去甲腎上腺素注射液1ml，至10ml的量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻即得。測定：取對照溶液和供試品溶液各2ul進樣，測定對照品溶液中去甲腎上腺素和內標物的峰面積分別為1635和1115；供試品溶液中去甲腎上腺素的峰面積為1454，內標物的峰面積為1123。試計算其含量占標示量的百分率解：由于對照品溶液和供試品溶液稀釋的倍數(shù)相同，所以可以直接按照對照品溶液和供試品溶液10ml中組分的量進行計算。先計算校正因子：f＝＝＝11.93As/msAr/mr1115/0.321635/5.60含量（mx）=f×=11.93×=4.94(mg)AxAs/ms11541123/0.32含量占標示量的百分率＝×100％＝98.8%4.945第二節(jié)酰胺類藥物的分析一、結構與性質1、溶解性2、水解后顯芳香第一胺特性3、水解產(chǎn)物易酯化4、酚羥基特性5、弱堿性6、與重金屬離子發(fā)生沉淀反應R1COOR2R3R4NH二、鑒別試驗（一）重氮化－偶合反應（二）三氯化鐵反應：對乙酰氨基酚反應現(xiàn)象：紫堇色（三）重金屬離子反應1、銅離子：鹽酸利多卡因

紫色轉入氯仿中顯黃色2、鈷離子鹽酸利多卡因在酸性溶液中與氯化鈷反應，生成亮綠色細小鈷鹽沉淀3、汞離子鹽酸利多卡因黃色對氨基苯甲酸酯類紅色或橙黃色Cu2+Na2CO3Hg(NO3)2HNO3煮沸Hg(NO3)2HNO3煮沸三、雜質檢查對乙酰氨基酚中檢查乙醇溶液澄清度、有關物質、對氨基酚等（一）乙醇溶液澄清度與顏色本品易溶于乙醇，溶液應澄清；且其乙醇液的色澤淺于標準比色液。比濁、比色（二）有關物質定義：指存在于藥品中少量與主藥有密切關系的原料、中間體、副產(chǎn)物或分解產(chǎn)物等特殊雜質方法：薄層色譜法（三）對氨基酚（1）雜質來源:①制備本品原料，乙酰化不完全引入②貯存不當水解產(chǎn)生（2）檢查意義：該雜質對人體有毒，且使產(chǎn)品變色，應嚴加控制。（3）檢查原理：對氨基酚在堿性條件下與亞硝基鐵氰化鈉作用生成藍色化合物，與對照液比較，進行限量檢查。四、含量測定（一）非水溶液滴定法鹽酸利多卡因側鏈叔胺氮具堿性，將供試品溶于冰醋酸中，以結晶紫為指示劑，用高氯酸液滴定至終點，溶液顯綠色（二）分光光度法對乙酰氨基酚含量測定方法：對乙酰氨基酚在0.4%NaOH液中，λmax=257±1nm,按C8H9NO2吸收系數(shù)E為715計算。對乙酰氨基酚含量＝例題：P102AE1cm*D*W1%*100%第三節(jié)、苯乙胺類藥物本類藥物有腎上腺素、鹽酸去氧腎上腺素等基本結構：R1CH-CHNH-R2OHR31、具有脂烴胺側鏈，顯弱堿性。2、具有鄰苯二酚或苯酚結構，易氧化呈色。3、有的具芳伯氨基，顯芳伯氨基特性。4、大多具有手性碳原子，具有光學活性。二、鑒別試驗（一）三氯化鐵反應(P105)（二）甲醛－硫酸反應(P105)（三）氧化顯色：含酚羥基，易被I2、H2O2氧化eg:腎上腺素紅色棕色鹽酸異丙腎上腺素淡紅色

[O]久置[O]加硫代硫酸鈉使I2退色（四）亞硝基鐵氰化鈉反應脂肪族伯氨基的專屬反應，重酒石酸間羥胺與亞硝基鐵氰化鈉反應紅紫色。（五）紫外特征吸收三、雜質檢查（一）酮體檢查：腎上腺素等在合成過程中都是經(jīng)過中間體腎上腺酮等通過催化氫化而得到的還原產(chǎn)物。當氫化不完全時，在產(chǎn)品中會帶入上述酮類雜質，中國藥典將其總稱為酮體。原理：酮體的λmax=310nm，藥物本身無吸收，用UV法檢查雜質限量。方法：鹽酸去氧腎上腺素（2mg/ml)在310nm測定，A不大于0.2（二）有關物質檢查四、含量測定（一）非水溶液滴定法:

利用本類藥物分子中芳伯氨基或側鏈脂烴胺的弱堿性。Eg：硫酸沙丁胺醇的測定溶劑：冰醋酸－醋酐指示劑：結晶紫滴定劑：高氯酸（0.1mol/l)終點判斷：溶液顯藍綠色注意：1）冰HAc溶解后，放冷后再加醋酐，防止氨基被乙?；?。2）有機堿硫酸鹽，滴至HSO4-（二）溴量法：以鹽酸去氧腎上腺素為例。原理：

Br2+2KI→2KBr+I2I2+

2Na2S2O3→2NaI+Na2S4O6操作要點①游離溴及碘極易揮散，操作過程中防逸失②不能加入太過量的溴液，以防酚羥基氧化③平行條件作空白（三）HPLC法第四節(jié)丙胺類藥物一、結構

CHCH2CH2N典型藥物：馬來酸氯苯那敏結構中含順丁烯二酸，水溶液顯酸性分子中的叔胺結構，可發(fā)生特有的顯色反應R1R2CH3CH3二、鑒別試驗（一）順丁烯二酸的還原反應使高錳酸鉀退色（二）枸櫞酸－醋酐試驗本品紫紅色（脂肪族、脂環(huán)族、芳香族叔胺的特有顯色反應，分別顯紅色、紫色或藍色）（三）紫外紅外吸收光譜枸櫞酸－醋酐水浴一、定義：本類藥物是分子結構中有非碳原子（N、O、S等）的環(huán)狀有機化合物。二、分類：吡啶類藥物：異煙肼、尼可剎米吩噻嗪類藥物：鹽酸異丙嗪、鹽酸氯丙嗪苯并二氮雜卓類：地西泮、氯氮卓喹諾酮類藥物：諾氟沙星、吡派酸咪唑類藥物：甲硝唑、阿苯達唑第一節(jié)吡啶類藥物的分析一、結構與性質NCONHNH2NCON(C2H5)2異煙肼尼可剎米1）尼可剎米為無色或淡黃色澄明油狀液體2）叔胺性質：堿性——含測；沉淀反應——鑒別3）酰肼基取代：酰肼基具有強的還原性,可以和氨制硝酸銀試液等氧化試劑反應，也可與某些含羰基試劑發(fā)生縮合反應?！b別、含測酸性溶液易水解——檢查游離肼4）酰胺基取代：堿性條件下水解，可釋放出二乙胺氣體——鑒別5）紫外吸收二、鑒別試驗（一）吡啶母核的鑒別反應1、吡啶環(huán)的開環(huán)反應：（1）戊烯二醛反應(Konig)能夠用溴化氰試液和苯胺溶液鑒別的藥物是？（2）二硝基氯苯反應（Vongerichten反應)吡啶類+二硝基氯苯+醇制KOH紫紅色熔融冷卻2、吡啶環(huán)的沉淀反應吡啶環(huán)的叔胺氮原子呈堿性，可與重金屬鹽類及苦味酸等沉淀劑反應。異煙肼＋氯化汞白色沉淀異煙肼＋硫酸銅－枸櫞酸（堿性）淡綠色沉淀尼可剎米＋硫酸銅－硫氰酸銨草綠色沉淀（二）特性鑒別試驗1、異煙肼的特性鑒別反應1）還原反應：酰肼基具有還原性可與氨制硝酸銀反應

反應現(xiàn)象：產(chǎn)生氣泡與黑色渾濁，并在試管壁上形成銀鏡原理：（2）縮合反應：酰肼基和芳醛縮合方法：本品＋香草醛乙醇液黃色結晶熔點為228～231℃（3）紅外分光光度法原理:

香草醛異煙腙（黃色結晶）2、尼可剎米的特性鑒別反應（1）水解反應:分子中酰胺基在堿性條件下水解本品

加熱

二乙胺臭味NaOH試液

水解

使?jié)駶櫦t色石蕊試紙變藍三、雜質檢查異煙肼中游離肼的檢查《CP》2000規(guī)定用薄層色譜檢查異煙肼呈棕橙色斑點，游離肼呈鮮黃色斑點結果：在供試品主斑點前與硫酸肼斑點相應位置上，不得顯黃色斑點。游離肼限量計算：％＝（Vc）對照×100%

供試品量

%=2ul×50×10-3mg/ml×100%

10ul×50mg/ml

=0.02%四、含量測定（一）異煙肼的含量測定溴酸鉀法比色法非水溶液滴定法（二）尼可剎米的含量測定非水溶液滴定法紫外分光光度法（1）異煙肼的含量測定——溴酸鉀法異煙肼在強酸性介質（適量鹽酸）中可被溴酸鉀氧化成異煙酸和氮氣終點：過量的溴酸鉀使甲基橙指示劑氧化而退色1mol的溴酸鉀相當于3/2mol的異煙肼適用于異煙肼原料、片劑、注射劑NCONHNH2異煙肼NCOOH異煙酸3＋2KBrO3HCL3＋3N2+3H2O+2KBr適用于含量較低或生物樣品等的檢查1）7－氯－4－硝基苯并－2－氧－1，3－二氮唑比色法2）普魯士藍比色法：鐵氰化鉀在酸性溶液中被酰肼基還原成亞鐵氰化鉀，再與三氯化鐵生成普魯士藍進行比色（2）異煙肼的含量測定——比色法（3）異煙肼的含量測定——非水溶液滴定法（二）尼可剎米的含測非水溶液滴定法——適用于尼可剎米的原料藥紫外分光光度法——適用于尼可剎米的注射液第二節(jié)吩噻嗪類藥物一、結構和性質1、結構上具有硫氮雜蒽母核。典型藥物鹽酸異丙嗪、鹽酸氯丙嗪結構如下：性質：1）吩噻嗪環(huán)具有還原性，遇氧化劑可被氧化成砜、亞砜等，氧化產(chǎn)物顏色可用于鑒別、含測。2）側鏈有烴胺氮原子或哌嗪基，堿性，可用于非水溶液滴定法測定含量3）本類藥物是三環(huán)共軛的π系統(tǒng)，有較強的紫外吸收。一般有三個峰值：λmax=205nm(204~209nm)λmax=254nm(250~265nm)－最強峰λmax=300nm(300~325nm)所以本類藥物可使用UV法進行鑒別、含量測定4）雜原子可與金屬離子，如鈀離子（Pd2+)形成有色配位化合物，也可用于鑒別、含測。二、鑒別試驗：（一）氧化劑顯色反應：1）硫酸、硝酸例：鹽酸氯丙嗪＋硝酸→顯紅色，漸變淡黃色鹽酸異丙嗪＋硫酸→櫻桃紅色放置變深。2）與鈀離子絡合顯紅色3）氟元素顯色反應———紅色溶液變?yōu)辄S色（二）氯化物反應（三）紫外特征吸收（四）紅外吸收光譜酸性茜素鋯三、有關物質的檢查四、含量測定非水溶液滴定法紫外分光光度法鈰量法吩噻嗪類藥物的含量測定（一）非水滴定法適用于吩噻嗪類藥物的原料藥醋酸介質中，氯丙嗪等的氧化作用受醋酸汞的催化，形成紅色產(chǎn)物，影響終點辨色?？刹捎帽蚨趿h(huán)等中性介質作為介質/加入維生素C（二）紫外分光光度法適用于藥物制劑的含測1、直接分光光度法1）鹽酸氯丙嗪片鹽酸氯丙嗪標示量％＝E1%1cmA*1/100*V*D*平均片重W*標示量*100%V：供試品溶液原始體積（ml）D：稀釋倍數(shù)W：稱取供試品的量2）鹽酸氯丙嗪注射液選用306nm處測定，可排除維生素C的干擾2、萃取－雙波長法原理：待測組分的最大吸收波長（測定波長）處測定待測組分及其干擾組分的吸收總和（At＝Ats+Atr）,另選一適當波長（參比波長），測定吸收度總和（Ar=Ars+Arr）,由于干擾組分在測定和參比波長處的吸收度相等，而待測組分在此波長處的吸收度Ars盡可能小，于是

A=At-Ar=(Ats+Atr)-(Ars+Arr)=Ats-Ars=(Ets-Ers)Cs鹽酸氯丙嗪含量（mg/ml）=12.5C(A294-A277)U/V(A294-A277)S（三）鈰量法適用于原料藥和片劑（四）鈀離子比色法第三節(jié)、苯并二氮雜卓類一、結構與性質本類藥物是應用廣泛的抗焦慮、抗驚厥藥1、分子結構中均具有苯并二氮雜卓環(huán)2、典型藥物氯氮卓、地西泮結構如下1）兩個藥物二氮雜卓環(huán)上的氮原子具有堿性，可和有機堿沉淀劑反應產(chǎn)生沉淀；還可用非水溶液滴定法測定含量。2）水解性（強酸）3）本類藥物具有較長的共軛體系，有紫外吸收二、鑒別試驗（一）化學鑒別法1、沉淀反應本類藥物在鹽酸中與碘化鉍鉀反應，生成橙色沉淀2、水解后重氮化－偶合反應氯氮卓在酸性條件下水解，生成二苯甲酮衍生物，具芳伯氨基。反應現(xiàn)象：橙紅色沉淀3、硫酸－熒光反應在365nm下，溶于硫酸后