DB1310-T272-2022蛋禽H7亞型禽流感免疫抗體卵黃檢測(cè)技術(shù)規(guī)程

ICS11.220

CCSB41

1310

廊坊市地方標(biāo)準(zhǔn)

DB1310/T272—2022

蛋禽H7亞型禽流感免疫抗體卵黃檢測(cè)

技術(shù)規(guī)程

DB1310/T272—2022

蛋禽H7亞型禽流感免疫抗體卵黃檢測(cè)

技術(shù)規(guī)程

1范圍

本文件規(guī)定了蛋禽H7亞型禽流感免疫抗體卵黃檢測(cè)技術(shù)中的術(shù)語和定義、樣本抽取、實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備、實(shí)

驗(yàn)方法、結(jié)果判定和免疫抗體合格判定等內(nèi)容。

本文件適用于廊坊市轄區(qū)內(nèi)采用卵黃進(jìn)行蛋禽（雞、鴨、鵝）H7亞型禽流感滅活疫苗免疫抗體檢測(cè)。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

GB/T18936高致病性禽流感診斷技術(shù)

GB/T30642食品抽樣檢驗(yàn)通用導(dǎo)則

DB13/T946-2008蛋禽H5亞型禽流感免疫抗體卵黃檢測(cè)技術(shù)規(guī)程

3術(shù)語和定義

DB13/T946—2008界定的術(shù)語和定義適用于本文件。

4樣本抽取

人員要求

抽樣人員不少于2人，并經(jīng)過專業(yè)培訓(xùn)，掌握抽樣程序和技術(shù)要求。抽樣時(shí)需穿工作服、一次性鞋

套、口罩、手套，做好人員防護(hù)。

樣本要求

抽取的禽蛋要具有代表性，以一棟禽舍或同一批次禽群為抽樣單元，隨機(jī)抽取蛋禽免疫接種H5+H7

亞型禽流感滅活疫苗21d后所產(chǎn)的新鮮禽蛋。

抽樣方式

4.3.1籠養(yǎng)蛋禽

禽舍的首端、中端、尾端，雞籠的每一層多點(diǎn)抽樣。

4.3.2非籠養(yǎng)蛋禽和蛋庫(kù)

抽樣按照GB/T30642規(guī)定的程序和方法執(zhí)行，確保抽樣的公正性、真實(shí)性。

1

DB1310/T272—2022

樣品的標(biāo)記、保存和運(yùn)輸

4.4.1樣品的標(biāo)記

抽樣后填寫采樣單，抽樣樣品分為檢測(cè)樣品和復(fù)檢備份樣品，并在抽樣過程中單獨(dú)分裝、封樣。抽

取的樣品應(yīng)標(biāo)明樣品名稱、日期、批號(hào)、數(shù)量、抽樣人等信息，標(biāo)記應(yīng)牢固。

4.4.2樣品的保存和運(yùn)輸

將抽取的樣品放置蛋托內(nèi)避免樣品破損，應(yīng)貯藏在陰涼、干燥、通風(fēng)、良好的場(chǎng)所。不得與有毒、

有害、有異味、易揮發(fā)、易腐蝕的物品同處貯藏。抽取的樣品應(yīng)立即送檢，避免抽樣、運(yùn)輸及裝卸過程

中對(duì)樣品的污染。

5實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備

材料準(zhǔn)備

5.1.1儀器設(shè)備

96孔90°V型微量反應(yīng)板、100-1000ul單道微量移液器、5-50ul多道微量移液器、300ul滴頭、1000ul

滴頭、微量振蕩器、低速離心機(jī)、液體快速混合器、1.5ml離心管、30ml容量瓶、60ml容量瓶。

5.1.2試劑

0.9%生理鹽水、SPF雞紅細(xì)胞混懸劑（1%）、禽流感病毒H7亞型HI抗原、禽流感病毒H7亞型陽

性血清和陰性血清。

檢樣制備

5.2.1卵黃直接稀釋

在樣品管中加入0.5ml生理鹽水（0.9%），再吸取0.5ml卵黃做1:1稀釋，混勻制成卵黃檢樣備用。

5.2.2卵黃氯仿萃取

取5.2.1制備好的卵黃檢樣0.4ml加入等量氯仿,迅速用液體快速混合器充分振蕩混勻，室溫靜置30

min，3000r/min離心5min，取上清液備用。

6實(shí)驗(yàn)方法

抗原血凝效價(jià)測(cè)定(HA試驗(yàn)，微量法)

操作方法按GB/T18936執(zhí)行。

血凝抑制(HI)試驗(yàn)(微量法)

6.2.1卵黃直接稀釋測(cè)定法

操作方法按GB/T18936執(zhí)行。用5.2.1中制備的卵黃檢樣代替血清進(jìn)行檢測(cè)。檢測(cè)時(shí)設(shè)標(biāo)準(zhǔn)陽性血

清和陰性血清對(duì)照。

2

DB1310/T272—2022

6.2.2卵黃氯仿萃取測(cè)定法

6.2.2.1適用范圍

在卵黃直接稀釋測(cè)定法檢測(cè)出現(xiàn)跳管或測(cè)不出抗體時(shí)，采用卵黃氯仿萃取法檢測(cè)。

6.2.2.2方法

操作方法按GB/T18936執(zhí)行。用5.2.2中制備的檢樣代替血清進(jìn)行檢測(cè)。檢測(cè)時(shí)設(shè)標(biāo)準(zhǔn)陽性血清和

陰性血清對(duì)照。

7結(jié)果判定

試驗(yàn)結(jié)果成立條件

只有陰性對(duì)照孔血清滴度不大于22，陽性對(duì)照孔血清誤差不超過1個(gè)滴度，試驗(yàn)結(jié)果才有效。

HI滴度的計(jì)算方法

以完全抑制4個(gè)HAU抗原的樣本最高稀釋倍數(shù)作為HI滴度。樣本制備過程中卵黃的稀釋倍數(shù)和加入氯

仿量都計(jì)入該樣本的稀釋倍數(shù)。

判定方法

7.3.1卵黃直接稀釋測(cè)定法結(jié)果判定

將“檢樣制備”過程中樣本的稀釋倍數(shù)計(jì)入終點(diǎn)滴度判定，即:微最反應(yīng)板上血凝抑制的終點(diǎn)滴度

加一個(gè)滴度為該樣本的HI抗體效價(jià)，終點(diǎn)滴度為零時(shí)則不再加。舉例：微量反應(yīng)板上血凝抑制的終點(diǎn)滴

度是27，則該樣本HI抗體效價(jià)為28。

7.3.2卵黃氯仿萃取測(cè)定法結(jié)果判定

將“檢樣制備”過程中樣本的稀釋倍數(shù)計(jì)入終點(diǎn)滴度判定，即:微量反應(yīng)板上血凝抑制的終點(diǎn)滴度

加兩個(gè)滴度為該樣本的HI抗體效價(jià)，終點(diǎn)滴度為零時(shí)則不再加。舉例:微量反應(yīng)板上血凝抑制的終點(diǎn)滴

度是27，則該樣本HI抗體效價(jià)為29。

8免疫抗體合格判定

個(gè)體合格判定

樣本HI抗體效價(jià)大于等于24為免疫合格。

群體合格判定

免疫合格樣本數(shù)占檢測(cè)總樣本數(shù)≥70%判為群體合格。

3

DB1310/T272—2022

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定

起草。

本文件由廊坊市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局提出。

本文件起草單位：三河市金源禽業(yè)有限公司、三河市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局。

本文件主要起草人：劉佳、張海燕、張凌鳳、陳雪梅、李玉瑩、張軍英、馬振剛、司文輝、王萃、

于明輝。

I

DB1310/T279—2022

表B.10信息資源格式類型字典表（續(xù)）

序號(hào)名稱代碼說明

14TABLEOTHER002004其他電子表格。

15ACCESS003001ACCESS數(shù)據(jù)庫(kù)。

16DB2003002DB2數(shù)據(jù)庫(kù)。

17DBASE003003DBASE數(shù)據(jù)庫(kù)。

18DBF003004DBF數(shù)據(jù)庫(kù)。

19DM003005達(dá)夢(mèng)數(shù)據(jù)庫(kù)。

20KingBaseES003006KingBaseES數(shù)據(jù)庫(kù)。

21ORACLE003007ORACLE數(shù)據(jù)庫(kù)。

22SQLServer003008SQLServer數(shù)據(jù)庫(kù)。

23SysBase003009SysBase數(shù)據(jù)庫(kù)。

24MySQL003010MySQL數(shù)據(jù)庫(kù)。

25DATABASEOTHER003011其他數(shù)據(jù)庫(kù)。

26BMP004001以位圖形式存儲(chǔ)的圖像。

27GIF004002以超文本標(biāo)志語言顯示索引彩色圖像。

28JPG004003用于連續(xù)色調(diào)靜態(tài)圖像壓縮的標(biāo)準(zhǔn)圖像。

29MEDIAOTHER004004其他圖形圖像。

30MPG005001視頻文件中以.mpg為后綴的文件。

31RM005002視頻文件中以.rm為后綴的文件。

32SWF005003視頻文件中以.swf為后綴的文件。

33STREAMANOTHER005004其他流媒體。

34BGQDM006001表格驅(qū)動(dòng)碼。

注：XML的官方定義為可擴(kuò)展標(biāo)記語言（ExtensibleMarkupLanguage)。

B.11訪問和使用限制代碼見表B.11。

表B.11訪問和使用限制代碼表

序號(hào)名稱代碼說明

1公開001開放，可全部開放。

2有限制002控制一般的流通或公開。

B.12數(shù)據(jù)來源見表B.12。

表B.12數(shù)據(jù)來源類型字典表

序號(hào)名稱代碼說明

1數(shù)據(jù)管理導(dǎo)入001通過時(shí)空大數(shù)據(jù)管理平臺(tái)導(dǎo)入

2數(shù)據(jù)上傳002通過時(shí)空大數(shù)據(jù)平臺(tái)數(shù)據(jù)上傳