T-WEBIO 0001-2023 人源原代細(xì)胞制備及質(zhì)量控制規(guī)范

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04 T/WEBIO

0001—2023人源原代細(xì)胞制備及質(zhì)量控制規(guī)范

of

primary

preparation

and

quality

control 武漢東湖國(guó)家自主創(chuàng)新示范區(qū)生物醫(yī)藥行業(yè)協(xié)會(huì)??發(fā)

布學(xué)兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標(biāo)準(zhǔn)兔下載學(xué)兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標(biāo)準(zhǔn)兔下載學(xué)兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標(biāo)準(zhǔn)下載T/WEBIO

00012023學(xué)兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標(biāo)準(zhǔn)下載 II

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00012023學(xué)兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標(biāo)準(zhǔn)下載 本文件按照GB/T

1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則

第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定II學(xué)兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標(biāo)準(zhǔn)下載T/WEBIO

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GB/T

37864-2019

GB/T

38736-2020

GB/T

39767-2021

GB/T

（STR）（Human

Cell

LineAuthentication

Standardization

of

Tandem

Repeat（STR）Profiling）

3.1

3.2

primary

3.3

finite

cell

line3.4

infinite

cell

3.5

cell

strain過選法或隆形法從代培物或胞系中獲具有殊性或標(biāo)物的養(yǎng)物為細(xì)3.6

complete

medium

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5.2.2.2

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5.2.2.2

mm

～2

mm

DNA：脫氧核糖核酸（Deoxyribonucleic

PCR：聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（Polymerase

STR：短片段重復(fù)序列（Short

Tandem

PBS：磷酸鹽緩沖溶液（Phosphate

Buffer

HRP：辣根過氧化物酶（Horseradish

Peroxidase）EDTA：乙二胺四乙酸（Ethylene

Diamine

Tetraacetic

5.1

GB/T40352.1-2021

GB/T

38736-2020

GB/T

39767-2021

離體組織的臨時(shí)保存和運(yùn)輸時(shí)間應(yīng)不超過

24

5.2

5.2.1.1

5.2.1.2

mm～2

mm5.2.1.3

37

72

5.2.1.4

72

5.2.2.1

5.2.2.3

加入組織消化液，37

0.5

5.2.2.4

5.2.2.5

胸腹水或血液樣本以300

g～500

g轉(zhuǎn)速離心5

min～10

min，收集細(xì)胞沉淀后直接接種培養(yǎng)；若紅5.3

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0.5×10

80

T25

細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)加入

mL

0.02

EDTA

0.05

%～0.25

%的胰蛋白酶，置于

37

下進(jìn)行消化

min～3

min，消化后在倒置顯微鏡下進(jìn)行觀察，當(dāng)發(fā)現(xiàn)胞質(zhì)回縮、細(xì)胞間隙增大后，立

300

g～500

次，需要時(shí)可進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)和活性檢測(cè)。

mL

37

5.4

在培養(yǎng)瓶背面標(biāo)記目的細(xì)胞的生長(zhǎng)區(qū)域，刮除無(wú)標(biāo)記區(qū)域的雜細(xì)胞，用PBS洗去雜細(xì)胞，加入新鮮

參考步驟5.3.1～5.3.6收集細(xì)胞，接種至新的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)5

min～20

液，接種至新的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)5

min～20

min。重復(fù)數(shù)次，收集最后一次細(xì)胞懸液，接種至新培養(yǎng)瓶中

5.5

-80

凍存細(xì)胞時(shí)應(yīng)采用合適的細(xì)胞凍存液，以長(zhǎng)時(shí)間維持細(xì)胞活性。細(xì)胞凍存后，定期取出做活性

6.1

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40

90

%～100

當(dāng)細(xì)胞形態(tài)發(fā)生異常變化，經(jīng)調(diào)整適應(yīng)不能恢復(fù)的，應(yīng)予以身份鑒定確認(rèn)，若發(fā)生身份變異，6.2

PCR6.2.1.1

操作步驟參考《中華人民共和國(guó)藥典》2020

6.2.1.2

檢測(cè)種屬包含牛、敘利亞倉(cāng)鼠、貓、狗、人、小鼠、雞、豬、中國(guó)倉(cāng)鼠、大鼠、兔、豚鼠、6.2.1.3

STR6.2.2.1

6.2.2.2

6.2.2.3

人源細(xì)胞

STR

檢測(cè)至少包含

13

D13S317、D16S539、D18S51、D21S11、FGA、TH01、TPOX

vWA。6.2.2.4

STR

根據(jù)細(xì)胞特性，做標(biāo)記物檢測(cè)，操作步驟見附錄C。6.3

操作步驟參考《中華人民共和國(guó)藥典》2020

6.4

操作步驟參考《中華人民共和國(guó)藥典》2020

6.5

年版三部中生物制品生產(chǎn)檢定用動(dòng)物細(xì)胞基質(zhì)制備

人源細(xì)胞需檢測(cè)常見人源病毒，如人皰疹病毒（EBV）、乙型肝炎病毒（HBV）、丙型肝炎病毒

6.6

年版三部中生物制品生產(chǎn)檢定用動(dòng)物細(xì)胞基質(zhì)制備

6.7

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年版三部中生物制品生產(chǎn)檢定用動(dòng)物細(xì)胞基質(zhì)制備

疾病診斷開始日期是否仍存在結(jié)束日期

□是

□否

□是

□否

□是

□否

手術(shù)名稱手術(shù)日期

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A.1

1.

醫(yī)院及科室：2.

捐贈(zèng)者住院號(hào)：3.

年齡：4.

性 別：□男 5.

民 漢族 其他，其他說(shuō)明：6.

臨床診斷：病理分期 eq

\o\ac(□,T) eq

\o\ac(□,N) Meq

\o\ac(□,

)eq

\o\ac(□,

)eq

\o\ac(□,

)臨床分期 Ⅰ期 eq

\o\ac(□,

)eq

\o\ac(□,

)eq

\o\ac(□,

)7.

現(xiàn)接受的抗癌治療：eq

\o\ac(□,1.)放療 eq

\o\ac(□,2.)化療間 eq

\o\ac(□,3.)靶向治療 eq

\o\ac(□,4.)手術(shù)eq

\o\ac(□,5.)無(wú) eq

\o\ac(□,6.)其他8.

是否有腫瘤手術(shù)史9.

是否有過往伴隨疾病史？

□否10.8.

是否有腫瘤手術(shù)史9.

是否有過往伴隨疾病史？

□否10.

是否有家族遺傳病史？

□是

□否

1.

2.

3.

4.5.

6.

7.PBMC

8.

9.10.

11.

12.

13.檢測(cè)鑒定原代細(xì)胞保藏ｏｍ標(biāo)準(zhǔn)下ｘｗ．ｂ兔ｗｗｗ學(xué)兔ｚｆ．ｃ載T/WEBIO

2023ｏｍ標(biāo)準(zhǔn)下ｘｗ．ｂ兔ｗｗｗ學(xué)兔ｚｆ．ｃ載

B.1

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00012023學(xué)兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標(biāo)準(zhǔn)下載 C.1

C.2

15

min，PBS

C.3

0.5

Triton

X-100（PBS

20

min，PBS

min。C.4

%的過氧化氫滴加于玻片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育

15

min，PBS

浸洗

C.5

30

C.6

吸水紙吸掉玻片周圍多余液體，每張玻片滴加足夠量稀釋好的一抗并放入濕盒，4

℃孵育過夜。C.7

加酶標(biāo)二抗：PBS

沖洗玻片

次，每次

min，吸水紙擦干玻片后滴加

HRP

37

30

C.8

加顯色劑：PBS

沖洗玻片

次，每次

min，甩去

PBS

液，吸水紙擦干玻片，每張玻片滴加新鮮

DAB

C.9

復(fù)染：Harris

min

PBS

C.10

脫水：將玻片置于水中浸洗后，將玻片依次放入

70

%酒精—80

%酒精—90

%酒精—95

%酒精—

C.11

C.12

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[1]

基1（C01）DNA（Species—Level

Identification

of

Animal

through

Cytochrome

OxidaseSubunit

1（C01）DNA

[2]

Geraghty

RJ,

Capes-Davis

A,

JM,

J,

Freshney

RI,

Knezevic

I,

R,

Masters

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Meredith

J,

Stacey

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Thraves

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cell

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Gu

M,

Yang

M,

He

J,

Xia

S,

Z,

Wang

Y,

C,

Shen

C.

silver

lining

in

cellline

authentication:

tande