羅漢茶成分含量測定方法 一測多評法

1羅漢茶成分含量測定方法一測多評法本文件用QMSA法測定羅漢茶成分含量的方法原理、試劑和材料、儀器和設(shè)備、試樣制備、測定步驟、結(jié)果計算和精密度。本文件適用于羅漢茶中新落新婦苷、落新婦苷、新異落新婦苷、異落新婦苷、槲皮苷、黃杞苷含量的測定。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.1羅漢茶Luohancha一種以胡桃科植物黃杞（EngelhardiaroxburghianaWall．）的干燥葉為原料，經(jīng)除雜質(zhì)、曬干制成的壯藥材。4方法原理以落新婦苷對照品為參照，采用高效液相色譜法對試樣中新落新婦苷、落新婦苷、新異落新婦苷、異落新婦苷、槲皮苷、黃杞苷等6種成分進(jìn)行含量檢測，采用一測多評法（QMSA法）定量。5試劑和材料5.1除另有說明外，所用試劑均為分析純，實驗用水應(yīng)符合GB/T6682中一級水的要求。5.2甲醇（CH4O）：70％。5.3乙腈（C2H3N）：色譜純。5.5落新婦苷（化學(xué)式：C21H22O11，CAS：29838-67-3，純度93.9。5.6新落新婦苷（化學(xué)式：C21H22O11，CAS：54081-47-9，純度98。5.7異落新婦苷（化學(xué)式：C21H22O11，CAS：54081-48-0，純度98。5.8新異落新婦苷（化學(xué)式：C21H22O11，CAS：54141-72-9，純度97。5.9黃杞苷（化學(xué)式：C21H22O10，CAS：572-31-6，純度93.7。5.10槲皮苷（化學(xué)式：C21H20O11，CAS：522-12-3，純度90.6。5.11落新婦苷對照品儲備液：稱取落新婦苷對照品（5.5）11.04mg置于20mL容量瓶中，加甲醇（5.2）溶解并定容，搖勻。5.12新落新婦苷對照品儲備液：稱取新落新婦苷對照品（5.6）11.04mg置于20mL容量瓶中，加甲醇（5.2）溶解并定容，搖勻。5.13異落新婦苷對照品儲備液：稱取異落新婦苷（5.7）對照品10.64mg置于20mL容量瓶中，加甲醇（5.2）溶解并定容，搖勻。25.14新異落新婦苷對照品儲備液：稱取新異落新婦苷（5.8）對照品10.26mg置于20mL容量瓶中，加甲醇（5.2）溶解并定容，搖勻。5.15黃杞苷對照品儲備液：稱取黃杞苷（5.9）對照品10.67mg置于20mL容量瓶中，加甲醇（5.2）溶解并定容，搖勻。5.16槲皮苷對照品儲備液：稱取槲皮苷（5.10）對照品11.64mg置于20mL容量瓶中，加甲醇（5.2）溶解并定容，搖勻。5.17新異落新婦苷對照品溶液：吸取新異落新婦苷對照品儲備液1mL，置于25mL容量瓶中，加甲醇（5.2）稀釋并定容，搖勻。5.18混合對照品溶液Ⅰ：分別吸取新落新婦苷對照品儲備液（5.12）140μL、異落新婦苷對照品儲備液（5.13）1.00mL、黃杞苷對照品儲備液（5.15）400μL、槲皮苷對照品儲備液（5.16）2.00mL、新異落新婦苷對照品溶液（5.17）1.00mL和稱取落新婦苷對照品（5.5）9.283mg，置于同一20mL容量瓶中，加甲醇（5.2）溶解并定容，搖勻。5.19混合對照品溶液Ⅱ：分別吸取新落新婦苷對照品儲備液（5.12）400μL、異落新婦苷對照品儲備液（5.13）1600μL、新異落新婦苷對照品溶液（5.17）4000μL和稱取落新婦苷對照品（5.5）12.911mg、黃杞苷對照品（5.9）1.652mg、槲皮苷對照品（5.10）1.623mg置于同一10mL容量瓶中，加甲醇（5.2）溶解并定容，搖勻。5.20對照品溶液：稱取落新婦苷對照品（5.5）0.5mg置于10mL容量瓶中，加甲醇（5.2）溶解并定容，搖勻。6儀器設(shè)備6.1粉碎機。6.2純水處理器。6.3高效液相色譜儀：配備二極管陣列檢測器。6.4色譜柱：C18柱，柱長250mm，內(nèi)徑4.6mm，粒徑5μm。6.5電子分析天平：感量為0.0001g和0.00001g。6.6超聲波發(fā)生器：320W，45kHz。6.7移液器：10μL。6.8容量瓶：10mL、20mL。6.9錐形瓶：25mL。7試樣制備樣品用粉碎機充分粉碎并攪拌均勻，裝入玻璃容器中，密封保存。稱取樣品粉末0.25g，置于25mL具塞錐形瓶中，加入甲醇（5.2）25mL，稱定重量，超聲處理（功率360W，頻率45kHz）30min，自然冷卻，再稱定重量，用甲醇（5.2）補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液。8測定步驟8.1色譜條件應(yīng)符合下列要求：——色譜柱：C18柱，柱長250mm，內(nèi)徑4.6mm，粒徑5μm；——固定相：十八烷基硅烷鍵合硅膠；——流動相：乙腈-0.1％甲酸(體積比為19:81)；——流速：1.0mL/min；——檢測波長：254nm、291nm；——柱溫：30℃;——進(jìn)樣量：10μL；3——理論板數(shù)：≥2000。8.2標(biāo)準(zhǔn)曲線吸取2μL、5μL、10μL、15μL的混合對照品溶液Ⅰ（5.18），10μL、15μL的混合對照品溶液Ⅱ（5.19分別注入高效液相色譜儀，以對照品進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，峰面積積分值為縱坐標(biāo)，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程。8.3定量測定吸取試樣溶液和對照品溶液（5.20）各10μL，注入高效液相色譜儀，按照8.1條件進(jìn)行測定，記錄圖譜。8.4空白試驗吸取甲醇（5.2）和混合對照品溶液Ⅰ（5.18）各10μL，注入高效液相色譜儀，按照8.1條件進(jìn)行測定，記錄圖譜（參見附錄A）。9結(jié)果計算9.1根據(jù)落新婦苷、新落新婦苷、新異落新婦苷、異落新婦苷、槲皮苷、黃杞苷的進(jìn)樣濃度、峰面積和保留時間，以落新婦苷對照品（5.5）為內(nèi)參物，按照式（1）、式（2）分別計算新落新婦苷、新異落新婦苷、異落新婦苷、槲皮苷、黃杞苷等待測組分的相對校正因子和相對保留時間均值及相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）。式中：f——校正因子；A——峰面積；C——進(jìn)樣液質(zhì)量濃度，單位為毫克每毫升（mg/mL）。t待測組分 t待測組分/落新婦苷=t落新婦苷(2)t待測組分 式中：t——保留時間，單位為秒（s）。9.2按照式（3）計算得出待測組分的含量。C待測組分=A待測組婦苷×f 式中：C——成分含量；f——相對校正因子；A——峰面積。10精密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨立測試結(jié)果的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）不超過2％。4新落新婦苷-13.384落新婦苷-14.725新異落新婦苷-新落新婦苷-13.384落新婦苷-14.725新異落新婦苷-17.508 異落新婦苷-18.779 槲皮苷-26.666 黃杞苷-29.050（資料性）色譜圖空白溶液（254nm）色譜