溶藻弧菌誘導凡納濱對蝦差減文庫的構建及其表達序列標簽分析的開題報告

溶藻弧菌誘導凡納濱對蝦差減文庫的構建及其表達序列標簽分析的開題報告【摘要】本研究旨在通過溶藻弧菌（Vibrioalginolyticus）的誘導，構建凡納濱對蝦（Litopenaeusvannamei）在不同處理后的差減文庫，并對其進行序列標簽分析來探究其差異表達基因及功能。具體步驟為：選取凡納濱對蝦健康種苗進行繁殖和培養(yǎng)，并對其進行溶藻弧菌的感染、分離和培養(yǎng)，將分別經受感染和未受感染處理的對蝦組織RNA提取，經過初步的質檢和分析后，進行差減文庫的構建，建立基于高通量測序技術的序列標簽分析平臺，并對差異基因進行功能注釋和通路分析。本研究可為深入了解凡納濱對蝦抗病機制、篩選新型抗病菌種、開發(fā)相關藥物或疫苗提供有益參考。【關鍵詞】溶藻弧菌、凡納濱對蝦、差減文庫、序列標簽分析、功能注釋【引言】凡納濱對蝦是一種非常重要的海水養(yǎng)殖物種，但由于其生長環(huán)境特殊和養(yǎng)殖條件限制，常常受到各種病害的威脅，特別是病菌感染引起的疾病，常常導致減產、死亡等嚴重后果。因此，深入了解凡納濱對蝦的抗病機制，篩選新型抗病菌種，開發(fā)相關藥物或疫苗，是當前對蝦養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展所面臨的重要問題之一。溶藻弧菌是一種常見的對蝦病原菌，可引起對蝦組織的病變和免疫反應，因此被廣泛應用于對蝦免疫調節(jié)、疾病模型建立等方面的研究。本研究旨在通過溶藻弧菌的誘導，構建凡納濱對蝦在不同處理后的差減文庫，并對其進行序列標簽分析以探究差異表達基因及其功能?！静牧吓c方法】1.對蝦的繁殖和培養(yǎng)選取體重在4-6g之間的凡納濱對蝦健康種苗，進行繁殖和培養(yǎng)，養(yǎng)殖環(huán)境為海水溫度24-30℃，鹽度為25-35‰，PH值為7.5-8.5，水質均衡。2.溶藻弧菌的誘導和對蝦組織的感染將溶藻弧菌分別在TSB液體培養(yǎng)基中進行12h的預培養(yǎng)，在OD600為0.6時離心收集，經PBS洗滌后，將細菌懸液分別用于感染和未感染組織的處理，感染處理的組織分別培養(yǎng)2h、6h、12h和24h，未感染處理的組織培養(yǎng)24h作為對照。3.RNA的提取和初步分析分別對經過感染和未感染處理的對蝦組織進行總RNA的提取，并通過Bioanalyzer2100儀器進行初步的質檢和分析。4.差減文庫的構建采用SMARTerPCRcDNA合成試劑盒和PCR分子克隆試劑盒構建差減文庫，質量評價通過qPCR和高通量測序技術進行評價。5.序列標簽分析和功能注釋建立基于高通量測序技術的序列標簽分析平臺，對差異表達基因進行功能注釋和通路分析?！绢A期結果】1.成功構建凡納濱對蝦在不同處理后的差減文庫，獲得大量高質量的RNA序列數據。2.通過序列標簽分析，鑒定出不同處理后的差異表達基因，并進行通過GO和KEGG通路分析注釋其功能。3.揭示凡納濱對蝦抗病機制以及溶藻弧菌的致病機制，為對蝦病害防治提供有益參考。【結論】溶藻弧菌的誘導可成功構建凡納濱對