常規(guī)組織病理技術(shù)

病理科日常及常規(guī)技術(shù)工作流程李白病理技術(shù)的重要性

病理學(xué)技術(shù)包括傳統(tǒng)病理學(xué)技術(shù)和現(xiàn)代病理學(xué)技術(shù)。傳統(tǒng)病理學(xué)技術(shù)（HE切片），是病理學(xué)的基礎(chǔ)，大量應(yīng)用于日常工作中，是提高病理學(xué)診斷水平和現(xiàn)代病理學(xué)技術(shù)的保證.

回顧過(guò)去，病理學(xué)的重大發(fā)現(xiàn)，無(wú)一不是新技術(shù)的發(fā)明和應(yīng)用的結(jié)果。同時(shí)新技術(shù)的應(yīng)用，也受到病理學(xué)診斷水平和科研能力的制約。病理科日常工作流程一、標(biāo)本的接收及核對(duì)

1、接收標(biāo)本時(shí)需要注意申請(qǐng)單上患者的姓名、年齡、門(mén)診號(hào)、住院號(hào)等基本信息是否與標(biāo)本袋上的相符。如不相符，需要跟相關(guān)臨床醫(yī)師及時(shí)溝通，等確認(rèn)后才能簽收，避免造成標(biāo)本混淆，貽誤患者病情等嚴(yán)重后果。2、核對(duì)標(biāo)本時(shí)首先要看清楚送檢標(biāo)本是否固定完全，這一點(diǎn)很重要，如果固定不及時(shí)或者不恰當(dāng)，都會(huì)影響接下來(lái)的整個(gè)操作過(guò)程，從而影響到病理醫(yī)生的診斷，就不能很好的指導(dǎo)臨床醫(yī)生進(jìn)行手術(shù)。其次要看清楚申請(qǐng)單上所填寫(xiě)的送檢標(biāo)本是否與標(biāo)本袋里的標(biāo)本相符。比如，申請(qǐng)單上寫(xiě)著全子宮+雙附件，這個(gè)時(shí)候我們就要注意了，看一下是否標(biāo)本都有，如不相符，一定要和臨床醫(yī)生及時(shí)聯(lián)系，經(jīng)確認(rèn)后才能簽收，避免造成標(biāo)本遺漏，貽誤患者病情，引起醫(yī)療糾紛。二、標(biāo)本的簽收及登記1、接收及核對(duì)完標(biāo)本，確認(rèn)無(wú)誤后，在運(yùn)送標(biāo)本登記本上簽字。2、由于病理質(zhì)控規(guī)定，患者的申請(qǐng)單及相關(guān)資料要保存20年，所以簽收完標(biāo)本后，我們有一套完善的登記整理標(biāo)本制度，所有在我院做過(guò)病理的患者資料都要進(jìn)行完整的登記，清晰的分類(lèi)和妥善的保管。三、常規(guī)病理技術(shù)的操作流程

組織固定取材固定脫水

透明浸蠟包埋切片染色封片

觀察

一固定1.組織固定的意義①防止組織細(xì)胞自溶和腐?、诒３纸M織細(xì)胞正常生活時(shí)的形態(tài)結(jié)構(gòu)③沉淀和凝固各種物質(zhì),硬化組織便于制片和染色后的觀察2.固定的注意事項(xiàng)①一般應(yīng)在離體30分鐘內(nèi)固定,越及時(shí)越好,并將組織上的血液,分泌物沖洗干凈②固定劑的量一般不少于組織塊總體積的4倍以上（比如全子宮的標(biāo)本務(wù)必要被固定劑淹沒(méi)，宮腔刮出物的標(biāo)本）③固定的時(shí)間應(yīng)視組織的不同和大小決定,一般小組織4-6小時(shí),大組織18-24小時(shí)或更長(zhǎng)④有特殊要求的須用特殊的固定劑3.常用的固定劑（10%的中性甲醛）

二取材取材前醫(yī)師和技術(shù)員需要再次對(duì)標(biāo)本和申請(qǐng)單進(jìn)行核對(duì)①臨床手術(shù)取材(大標(biāo)本)

注意腫瘤的部位形狀大小顏色及周邊組織的關(guān)系,有無(wú)完整包膜,測(cè)量體積,包括長(zhǎng)度寬度高度.手術(shù)大標(biāo)本必須進(jìn)行預(yù)取材預(yù)固定.②活體小組織(小標(biāo)本)

組織標(biāo)本體積小,在取材時(shí)應(yīng)特別小心,用伊紅讓標(biāo)本著色,并用擦鏡紙包裹,以防丟失,應(yīng)標(biāo)明粒數(shù).多瓶組織應(yīng)將附號(hào)標(biāo)清楚.

三脫水脫水的目的:組織最終將包埋在石蠟中,才能進(jìn)行切片,為達(dá)到這一目的,首先須將組織內(nèi)的水分置換出來(lái),以利于透明劑滲入,這一過(guò)程為脫水.(一般情況下,應(yīng)將大小標(biāo)本分別脫水.標(biāo)本脫水從低濃度開(kāi)始,一般人標(biāo)本從70%或75%乙醇開(kāi)始)

四透明

透明的目的:因?yàn)榇蠖鄶?shù)脫水劑不能和石蠟相混合,組織內(nèi)的水份脫干凈后,必須通過(guò)透明劑的作用,才能便于浸蠟包埋.

常用透明劑種類(lèi)及注意事項(xiàng):

二甲苯甲苯松節(jié)油苯透明要注意的關(guān)鍵是時(shí)間,透明時(shí)間不夠,石蠟不能完全進(jìn)入組織,影響到包埋切片.但是如果透明過(guò)度,組織發(fā)硬發(fā)脆影響切片質(zhì)量.

五浸蠟

目的和注意事項(xiàng)組織經(jīng)過(guò)透明后要浸入石蠟(火棉膠碳蠟明膠)內(nèi),目的是去除組織中的透明劑(二甲苯)而代之以石蠟,并滲入組織內(nèi)部,把軟組織變?yōu)橛羞m當(dāng)?shù)挠捕?以利切片.

一般浸蠟須經(jīng)過(guò)2到3次,石蠟的溶點(diǎn)為56-58度左右,我們常用的脫水機(jī)上是兩個(gè)蠟缸.每過(guò)一個(gè)蠟缸需用2h。

六包埋

注意事項(xiàng):控制好包埋用石蠟的溫度和組織塊的溫度,注意組織塊包埋的方向,切面朝下,組織應(yīng)盡量平整.蠟塊冷卻后將組織外圍的石蠟進(jìn)行修整,以便利于連續(xù)切片.

七切片

1.準(zhǔn)備工作:清洗干凈的玻片恒溫烤片箱毛筆眼科彎鑷染片架鋒利的切片刀石蠟塊預(yù)先冷卻2.注意事項(xiàng):

①熟練掌握切片機(jī)的性能②展片箱的水溫控制在45度左右③固定好蠟塊和切片刀④切片附貼好后,放入65-70度烤箱中烤片1h

八染色目的:將組織切片浸入染色劑內(nèi),使組織或細(xì)胞等成分染上不同的顏色產(chǎn)生不同的折射,以便在光學(xué)顯微鏡下觀察.

方法:蘇木素-伊紅染色稱(chēng)常規(guī)染色,又稱(chēng)HE染色.

步驟:1.將切好的組織切片經(jīng)烤片后入二甲苯ⅠⅡ脫蠟各約20分鐘左右,然后入無(wú)水乙醇洗去二甲苯,約1-2分鐘,依次入95%乙醇,80%乙醇70%乙醇至自來(lái)水,蒸餾水.

2.將切片浸入配置好的蘇木素液內(nèi)15分鐘左右,自來(lái)水洗1分鐘,75%鹽酸乙醇分化約30秒,返藍(lán)1-2分鐘自來(lái)水洗5-10分鐘

3.95%乙醇1分鐘后入酸化的伊紅10秒至1分鐘,入95%乙醇ⅠⅡ各1分鐘無(wú)水乙醇ⅠⅡ各1分鐘，二甲苯IⅡ各1分鐘.

染色結(jié)果:胞核呈藍(lán)色,胞漿淡紅色,結(jié)締組織鮮紅色,紅細(xì)胞橙紅色.

染色注意事項(xiàng):1.切片脫蠟必須干凈徹底2.按操作步驟進(jìn)行操作應(yīng)嚴(yán)格掌握鹽酸分化的時(shí)間分化后的切片應(yīng)立即入自來(lái)水洗3.注意染色液的情況,掌握染色時(shí)間

九封片十鏡下預(yù)覽十一貼標(biāo)簽。歸檔

根據(jù)質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)：病理科常規(guī)切片及蠟塊，門(mén)診患者需保存15年，手術(shù)患者需保存30年。每次做完的片子經(jīng)充分晾干后由病理科統(tǒng)一歸檔保存結(jié)語(yǔ)簡(jiǎn)單總結(jié)一下，病理日常工作包括：1、取材（由醫(yī)師取出制片部位材料，需時(shí)0.5天）2、脫水（醫(yī)師取材完畢后需要對(duì)組織進(jìn)行脫水處理，目前本院的設(shè)備為半自動(dòng)脫水機(jī)，需時(shí)18小時(shí)）3