DB21-T 2891-2017香菇栽培種工廠化生產(chǎn)技術規(guī)程

ICS65.020.20

B05

備案號：58575-2018DB21

遼寧省地方標準

DB21/T2891—2017

香菇栽培種工廠化生產(chǎn)技術規(guī)程

DB21/T2891—2017

香菇栽培種工廠化生產(chǎn)技術規(guī)程

1范圍

本標準規(guī)定了利用液體菌種生產(chǎn)香菇栽培種的有關術語和定義、液體菌種制備與相關技術要求、液

體菌種抽樣檢測、栽培種技術要求、栽培種質(zhì)量檢測、生產(chǎn)記錄與存檔留樣及標簽標志包裝運輸。

本標準適用于香菇栽培種的工廠化生產(chǎn)。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注明日期的引用文件，僅所注明日期的版本適用于

本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本標準。

GB/T12728食用菌術語

GB19170香菇菌種

GB150.1～150.4壓力容器

NY/T1742食用菌菌種通用技術要求

NY/T1731食用菌菌種良好作業(yè)規(guī)范

NY/T528食用菌菌種生產(chǎn)技術規(guī)程

NY/T1846食用菌菌種檢驗規(guī)程

3術語和定義

GB/T12728界定的術語，以及下列術語和定義適用于本文件。

3.1發(fā)酵罐

進行發(fā)酵培養(yǎng)的專用設備，也稱發(fā)酵反應器。

3.2罐壓

指液體菌種培養(yǎng)過程中培養(yǎng)器內(nèi)保持的空氣壓力，單位：Mpa。

3.3通風量

指液體菌種培養(yǎng)過程中每分鐘通入培養(yǎng)基中的無菌空氣的量。用V/V（培養(yǎng)基體積/通入空氣體

積）標示。

3.4接種量

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指接入培養(yǎng)器中的菌種的數(shù)量，以菌種體積與培養(yǎng)基體積的百分比標示。

3.5搖瓶液體種

指裝在玻璃三角瓶內(nèi)在搖床上恒溫振蕩培養(yǎng)的液體菌種。

3.6初始pH值

指液體培養(yǎng)基配制滅菌后未接種時的pH值。

4要求

4.1技術人員

應有與液體菌種生產(chǎn)所需的專業(yè)技術人員，包括檢驗人員。

4.2生產(chǎn)場地、廠房和布局

符合NY/T528規(guī)定。

4.3生產(chǎn)設施與設備

符合NY/T528規(guī)定。

高壓滅菌鍋和蒸汽鍋爐應符合GB150.1～150.4壓力容器規(guī)定，并經(jīng)政府有關部門檢驗合格。

4.4總生產(chǎn)工藝流程

母種→搖瓶液體種→發(fā)酵罐液體種→栽培種。

4.5培養(yǎng)基與母種

4.5.1培養(yǎng)基

母種培養(yǎng)基使用附錄A中A.1規(guī)定的馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（PDA）或A.2規(guī)定的綜合馬鈴薯葡萄

糖瓊脂培養(yǎng)基（CPDA）。

液體種培養(yǎng)基根據(jù)香菇品種及當?shù)卦系囊笫褂眠m宜配方（見附錄B），嚴格掌握初始pH。

栽培種培養(yǎng)基配方參照NY/T528標準附錄B原種和栽培種常用培養(yǎng)基配方及其適用種類，根據(jù)香

菇品種及當?shù)卦系囊筮x擇使用。

4.5.2母種

母種繼代培養(yǎng)后需按NY/T1846規(guī)定抽樣，并進行感官檢驗和菌絲微觀特征檢驗，合格菌種進入

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生產(chǎn)流程。

母種質(zhì)量要求符合NY/T1742關于母種生產(chǎn)的規(guī)定。

4.6搖瓶液體種技術要求

4.6.1培養(yǎng)基分裝及滅菌

搖瓶液體種培養(yǎng)基裝量應為容器體積的1/4至1/3，分裝后應立即滅菌。按常規(guī)高壓蒸汽滅菌鍋操

作規(guī)程，0.1Mpa～0.12Mpa（121℃～126℃），維持25min。

4.6.2滅菌效果的檢查

滅菌后的搖瓶液體種培養(yǎng)基于30℃±1℃培養(yǎng)箱恒溫培養(yǎng)48小時后，觀察確認無混濁、無異味，

即可用于接種。

4.6.3接種

嚴格按無菌操作程序，將母種斜面菌絲體切割成2mm～4mm顆粒，移入搖瓶培養(yǎng)基中，每100mL

液體培養(yǎng)基接種菌絲體顆粒1顆～3顆。

4.6.4培養(yǎng)條件

菌種培養(yǎng)溫度26℃±1℃，空氣相對濕度55%～65%，避光振蕩培養(yǎng)。往復式搖床振蕩頻率60次～

120次/分；旋轉(zhuǎn)式搖床振蕩頻率150轉(zhuǎn)～180轉(zhuǎn)/分。

4.6.5培養(yǎng)期的檢查

每日檢查生長狀態(tài)，及時檢出渾濁、異味、泡沫異常的不合格菌種。

4.6.6培養(yǎng)結束

搖瓶靜置1分鐘后，菌絲球體積占比液體培養(yǎng)基體積的4/5以上，可結束培養(yǎng)。

4.7發(fā)酵罐液體種技術要求

4.7.1空氣過濾器檢查

濾芯在額定風量下，對粒徑0.1～0.2μm粒子的過濾效率，在99.999%以上?？諝庾枇υ?80pa以

下。所有材質(zhì)耐126℃高溫。

使用前要拆分檢查濾芯，要求無油污、料污、無破損，外殼內(nèi)外壁要求無污物、光亮潔凈。

4.7.2發(fā)酵罐檢查與清洗

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檢查罐上全部閥門、安全閥、壓力表、要求完好，工作正常。

對罐體內(nèi)、外和全部閥門用流水進行沖洗，達到無死角、內(nèi)壁無任何培養(yǎng)料殘余物的潔凈程度。

4.7.3煮罐和空消

發(fā)酵罐初次使用、出現(xiàn)染菌、長期放置、更換品種時，都要求煮罐和空消進行滅菌。有內(nèi)置電

加熱棒的培養(yǎng)器加水至容積的80%加熱至121℃，維持40min。用外源蒸汽滅菌的培養(yǎng)器，蒸汽壓力達

到0.1Mpa～0.12Mpa（121℃～124℃），維持40min。

4.7.4投料與定容

將配制好的培養(yǎng)基材料攪拌均勻，倒入或用泵抽入發(fā)酵罐中，加水定容至所需體積。培養(yǎng)基投料

總量為罐體總?cè)莘e的70%～80%。

4.7.5培養(yǎng)基滅菌

按常規(guī)高壓蒸汽滅菌方法操作，培養(yǎng)器內(nèi)壓力達到0.1Mpa～0.12Mpa，培養(yǎng)基溫度達到121℃～

124℃、保持時間60min～90min。

4.7.6冷卻降溫

滅菌結束將培養(yǎng)基降溫至24℃～28℃。降溫過程中要及時向培養(yǎng)器內(nèi)補充過濾空氣，防止罐壓回

零。

4.7.7接種

利用火焰保護接種，接種量為罐內(nèi)培養(yǎng)基總量的0.1%～0.5%。

4.7.8液體菌種培養(yǎng)技術參數(shù)

通風量每分鐘1：0.5～1.2V／V(料液體積／空氣體積)，調(diào)節(jié)罐壓保持在0.02Mpa～0.04Mpa，

培養(yǎng)溫度調(diào)節(jié)在24℃～26℃。

特殊品種根據(jù)特殊需求具體設定。

4．7.9培養(yǎng)時間

上述條件下培養(yǎng)7d～10d可達到香菇液體菌種成品標準。

5液體菌種抽樣與檢測

5.1抽樣

培養(yǎng)過程中定期從培養(yǎng)器中取出的樣品，用作鏡檢和其它理化指標測定。

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5.2檢測

按照NY/T1846中感官檢驗、菌絲微觀特征檢驗、霉菌、細菌檢驗進行。

5.3合格液體菌種判定

5.3.1感官指標

液體菌種球狀菌絲體呈白色，濾液呈淡黃色。菌球分布均勻、濃白清晰，有香菇液體菌種培養(yǎng)時特

有的香氣，無異味。

5.3.2液體菌種pH值

終pH值在3.5～4.0之間。

5.3.3菌絲生物量

每100ml液體菌種菌絲干重為0.4～2.0g/100ml。

5.3.4顯微檢測

香菇液體菌種菌絲形態(tài)和純度鑒別。球狀菌絲體大量分布，菌絲粗壯，菌絲內(nèi)原生質(zhì)分布均勻。

5.3.5判定規(guī)則

感官檢驗、菌絲微觀特征檢驗、霉菌、細菌檢驗、pH值、菌絲生物量、顯微檢測均符合標準要求

的，為合格菌種。

任何一項不符合標準要求的，為不合格菌種。

6栽培種技術要求

6.1培養(yǎng)基制備

6.1.1培養(yǎng)基配方木屑78%、麥麩20%、蔗糖1%、石膏1%，含水量58％～60%，pH6.5～7。

6.1.2.配料裝袋

采用配套機械二級拌料法。按配方比例將木屑粗料先預濕后再同其他主料混合進行一級拌料，然后

再加入輔料進行二次拌料。要求拌料均勻、含水量達標。

采用機械裝袋、窩口，插入專用塑料芯塞。

6.1.3滅菌與冷卻

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按高壓蒸汽滅菌規(guī)程操作，排除冷空氣后，升溫至121℃持續(xù)2.5h。滅菌后采用階梯漸進式排氣降

壓處理。

降壓結束迅速進入冷卻室，開啟降溫處理。當袋內(nèi)溫度降至25℃以下可以接種。

6.2接種

6.2.1在凈化室內(nèi)嚴格按無菌操作規(guī)程進行接種，及時用無菌海綿塞封口。

6.2.2液體菌種接種量為20ml～30ml/袋。

6.3栽培種培養(yǎng)管理

6.3.1溫度

培養(yǎng)溫度程控管理，以袋內(nèi)中心溫度為管控標準，保持袋內(nèi)溫度22℃～23℃。全程監(jiān)控培養(yǎng)室空

間溫度、袋間溫度和袋內(nèi)溫度。防止高溫傷熱和過度溫差產(chǎn)生。

當菌絲長滿菌袋后，降低空間溫度到10℃～15℃，持續(xù)內(nèi)循環(huán)通風7d～10d。

6.3.2濕度培養(yǎng)室內(nèi)空間相對濕度控制在45%～55%以內(nèi)。

6.3.3光照培養(yǎng)室全程避光管理。

6.3.4通氣

接種后靜置培養(yǎng)，5d后啟動內(nèi)循環(huán)通風。

12d～15d生物熱產(chǎn)生，加強通風保持溫度，直到后期30d～35d菌絲長滿菌袋。培養(yǎng)室內(nèi)CO2濃度

控制在300ppm以下。

6.4抽樣與檢測

6.4.1抽樣

按照NY/T1846中栽培種抽樣標準抽樣。

6.4.2檢測

按照NY/T1846中感官檢驗、菌絲微觀特征檢驗、霉菌、細菌檢驗、菌絲生長速度測定進行。

6.5合格栽培種判定規(guī)則

感官檢驗、菌絲微觀特征檢驗、霉菌、細菌檢驗、菌絲生長速度測定均符合標準要求的，為合格

菌種。

任何一項不符合標準要求的，為不合格菌種。

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6.6貯藏備用

將經(jīng)檢查合格菌種放于潔凈的1～4℃冷庫中短期保存?zhèn)溆谩?/p>

7記錄與存檔

液體菌種、栽培種生產(chǎn)的每個環(huán)節(jié)均有生產(chǎn)記錄，由具體操作人員現(xiàn)場記錄填寫，建立可追溯性檔

案后，歸檔保存。

8留樣

每個批次栽培種袋按1%比例留樣，放于1～4℃冷庫中保存，直到本批次栽培種接種后正常出菇結

束。

9標簽標志包裝運輸

符合NY/T528關于標簽標志、包裝運輸?shù)囊蟆?/p>

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附錄A

（規(guī)范性附錄）

母種常用培養(yǎng)基及配方

A.1PDA培養(yǎng)基（馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基）

馬鈴薯200g（用浸出汁），葡萄糖20g，瓊脂20g，水1000ML，pH6.5～7.0。

A.2CPDA培養(yǎng)基（綜合馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基）

馬鈴薯200g（用浸出汁），葡萄糖20g，磷酸二氫鉀2g，硫酸鎂0.5g，VB1100mg，水1000ML，

pH6.5～7.0。

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附錄B

（規(guī)范性附錄）

香菇液體種常用培養(yǎng)基及配方

B.1馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基

馬鈴薯全粉400g（100目），葡萄糖2000g，磷酸二氫鉀100g，硫酸鎂50g，水100L，pH6.5～7.0。

B.2蔗糖蛋白胨培養(yǎng)基

蔗糖750g，葡萄糖750g，蛋白胨250g，磷酸二氫鉀200g，硫酸鎂100g，維生素B10.1g，水100L，

pH6.5～7.0。

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