附睪上皮細(xì)胞通過附睪小體調(diào)節(jié)精子成熟的研究進(jìn)展

2022附睪上皮細(xì)胞通過附睪小體調(diào)節(jié)精子成熟的研究進(jìn)展（全文）摘要哺乳動(dòng)物睪丸中產(chǎn)生的精子缺乏運(yùn)動(dòng)性，而且不具備受精能力，因此在功能上尚不成熟。附睪是男性生殖道中一段非常特別、高度盤繞折疊的小管，附睪各段通過上皮細(xì)胞分泌和吸收活動(dòng)的共同協(xié)作用，實(shí)現(xiàn)高度區(qū)域化，保證不同區(qū)段精確的功能劃分。精子在附睪近端完成功能上的成熟，在遠(yuǎn)端以靜息狀態(tài)儲(chǔ)存以備射精，這一過程依賴于附睪管腔特殊的微環(huán)境。附睪管腔的微環(huán)境極為復(fù)雜，目前已證實(shí)其中含有多種無機(jī)離子、蛋白質(zhì)和胞外囊泡（附睪小體）。附睪小體中包含多種蛋白和sncRNA，可直接或間接促進(jìn)精子成熟。本文綜述了附睪管腔微環(huán)境的特點(diǎn)，特別關(guān)注了附睪上皮細(xì)胞產(chǎn)生的附睪小體對(duì)精子成熟的影響。哺乳動(dòng)物的附睪連接睪丸與輸精管，是一段長(zhǎng)而高度盤曲的小管。解剖學(xué)上一般將該結(jié)構(gòu)分為三個(gè)區(qū)段：頭部、體部和尾部，在某些種屬如小鼠和大鼠，附睪的頭部近端也被稱為起始部［1］。附睪為精子成熟和儲(chǔ)存提供最適宜的環(huán)境，這有賴于其高度區(qū)域化的特征［2］。輸出小管和頭部近端吸收大部分進(jìn)入小管的睪丸液，使精子得以濃縮。附睪頭部合成和分泌蛋白質(zhì)的功能非常活躍，一部分經(jīng)過此處的精子具有了運(yùn)動(dòng)和識(shí)別卵細(xì)胞的能力。精子在附睪體部繼續(xù)成熟，在尾部最終完成成熟。附睪尾部的管腔相對(duì)較大，而且上皮細(xì)胞表現(xiàn)出強(qiáng)吸收能力［3］，這與尾部?jī)?chǔ)存精子的功能相適應(yīng)。目前認(rèn)為，附睪上皮細(xì)胞的分泌吸收活動(dòng)使得附睪管腔微環(huán)境非常特殊，精子在此貫序成熟。附睪上皮細(xì)胞通過頂漿分泌的方式產(chǎn)生的外泌體樣囊泡被定義為附睪小體，他們通過轉(zhuǎn)運(yùn)各種蛋白和非編碼小RNA（smallnon-codingRNA，sncRNA）促進(jìn)精子成熟。此外有證據(jù)表明，附睪小體的轉(zhuǎn)運(yùn)功能受環(huán)境應(yīng)激因子的影響［4］，這對(duì)于研究精子表觀遺傳、蛋白質(zhì)組學(xué)、子代發(fā)育和健康的啟示意義目前剛剛被認(rèn)識(shí)到。本綜述首先介紹附睪管腔微環(huán)境的特點(diǎn)，然后較為詳細(xì)地探討囊泡依賴的附睪上皮細(xì)胞與精子之間的串話調(diào)節(jié)機(jī)制。一.附睪管腔微環(huán)境的特點(diǎn)精子從睪丸中產(chǎn)生后，并不具備受精能力而且缺乏運(yùn)動(dòng)性，它需要經(jīng)過附睪管才能逐漸成熟。附睪管腔內(nèi)存在大量的無機(jī)離子和有機(jī)小分子，使得附睪液呈現(xiàn)低鈉、高鉀、低鈣、低HCO3-濃度和pH值偏低的環(huán)境。附睪管腔微環(huán)境穩(wěn)態(tài)是保障精子成熟、獲得受精能力、儲(chǔ)存和保護(hù)精子的重要條件。特定基因的缺失會(huì)使附睪管腔微環(huán)境異常，從而導(dǎo)致雄性不育或生育力降低（表1）。附睪上皮由不同細(xì)胞類型組成，包括主細(xì)胞、亮細(xì)胞、狹窄細(xì)胞、基細(xì)胞和免疫細(xì)胞（樹突狀細(xì)胞和巨噬細(xì)胞）等。在附睪管的不同節(jié)段，各種細(xì)胞的含量并不相同。相關(guān)的功能研究證實(shí)，這些細(xì)胞的空間分布不同，在雄激素和其他因子精確調(diào)控下，對(duì)精子的成熟、保護(hù)和儲(chǔ)存發(fā)揮著獨(dú)特的作用。去1能應(yīng)小版附豎管料微環(huán)境的屈N舐所臭?堅(jiān)卑除房因莢型陽革管胖謚序洗距化窄號(hào)史就.WI不甘m軍械低濯11呈M性，陶笨痢書被收吸1E胞內(nèi)建冠增B[31firl!??'：!液體蒞港1*1￡-m不育7-SI牛肩性他前掂五常椅冊(cè)代酬件搟:t謝,」H力仔化,廿晟戒薩淮皚秘臨噸1Rk1：育大降低也也sfE,十任H印弓，脫蝦：沉網(wǎng)rju:IIJ十育附'您隹小一波體T—苗.11.生甫/j尚低13琳不直俏喟丁?的爪毗刊水的橫曲城酸阻制.??用的IH翟郵站構(gòu)14日3frr械離了?的暇般敏印水的被由泣墉馥陽斷14LatH垛的甲件斷既的制局15沽斌世的PHCft曲白功惟異富.寄響牯J?的郵；L6；fjh-r七肩山降低火鼎印樣部1?攻汨但血出倏?。?7j《神，推產(chǎn)牛魅稗陷地邱話Ti機(jī)理質(zhì)寸技吊丁根（tfr.juft.I8?生育”樣低附'制觀|“1祝比19】l汗學(xué)也現(xiàn)同急伊劃軒化.20.J/rlN胞作底街4洵B降梆21Fmf沽附￥*1出削亡...停浦蛔裕22塵育由中他.mu葉匿卉汁望?沖常jfl多Li沔化24；1.附睪上皮：主細(xì)胞是附睪的主體細(xì)胞，構(gòu)成高達(dá)80%的小管上皮。附睪近端的主細(xì)胞在蛋白質(zhì)合成和分泌方面格外活躍。主細(xì)胞含大量有分泌功能的細(xì)胞器，如內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體和分泌顆粒，特別是在附睪管近端（頭部和體部）有活躍的胞吐活性。在附睪管遠(yuǎn)端（尾部），主細(xì)胞主要發(fā)揮胞吞作用，其通過受體［例如低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白2（low-densitylipoproteinreceptor-relatedprotein,2LRP2）］介導(dǎo)機(jī)制攝取附睪管腔內(nèi)容物，和亮細(xì)胞一起重吸收附睪液［25］。亮細(xì)胞廣泛分布于頭部和體部，但富集在尾部。亮細(xì)胞頂部富含胞吞結(jié)構(gòu)，故有極強(qiáng)的胞吞能力，主要負(fù)責(zé)選擇性地吸收管腔內(nèi)容物并調(diào)節(jié)管腔pH。尤其是附睪遠(yuǎn)端的亮細(xì)胞這一特點(diǎn)更加突出，攝取并清理精子成熟過程中脫落的細(xì)胞質(zhì)液滴，再循環(huán)腔內(nèi)各種其他成分。亮細(xì)胞頂部還含有一些調(diào)節(jié)管腔pH的關(guān)鍵分子，如V-ATP酶、碳酸酐酶II、可溶性腺苷酸環(huán)化酶，這些對(duì)于管腔pH有重要的調(diào)節(jié)作用［25-27］?；?xì)胞在附睪的不同節(jié)段呈現(xiàn)出不同的形態(tài)，起始部和頭部的基細(xì)胞主要分布在主細(xì)胞以下的基底膜面，呈半球狀，兩端分別與基底膜和主細(xì)胞緊密相貼；而從體部到尾部近端，越來越多的基細(xì)胞伸出狹長(zhǎng)的突起結(jié)構(gòu)，穿越主細(xì)胞之間的緊密連接，與附睪腔面直接接觸。有研究表明，基細(xì)胞通過旁分泌途徑，調(diào)節(jié)亮細(xì)胞V-ATPase的聚集［28］。狹窄細(xì)胞和頂細(xì)胞主要分布在附睪起始部［29］，功能尚不明確。附睪上皮其他類型的細(xì)胞，推測(cè)其功能主要和免疫相關(guān)，男性生殖細(xì)胞因表達(dá)機(jī)體其他部位所沒有的抗原而具備高抗原性。實(shí)際上，附睪管腔環(huán)境和成熟中的精子因血-附睪屏障的存在而與免疫監(jiān)控相隔離，這一屏障由相鄰上皮細(xì)胞間的緊密連接構(gòu)成。附睪管由結(jié)締組織隔分隔成許多小的區(qū)域，形成連續(xù)的、節(jié)段特異性的管腔微環(huán)境。大部分睪丸液在到達(dá)附睪近端之前被重吸收，附睪管的假復(fù)層上皮細(xì)胞主要分泌管腔液的組分。附睪液中含有大量離子、蛋白質(zhì)和非編碼RNA［29］，這些成分的分布都具有節(jié)段特異性，表明不同節(jié)段的附睪細(xì)胞具有不同的分泌和吸收功能。2.附睪管腔液成分：附睪液中的離子成分與已知的其他體液的差異懸殊。與血漿相比，Na+、Cl-、Ca2+和HCO3-的濃度均較低，這與管腔的酸環(huán)境高度相關(guān)，以保證精子處于靜息狀態(tài)［30］。性興奮等事件刺激附睪主細(xì)胞分泌HCO3-和Cl-，離子濃度變化被相鄰亮細(xì)胞中的嘌吟型受體感應(yīng)，進(jìn)而碳酸氫鹽敏感的腺苷環(huán)化酶激活下游ATP酶質(zhì)子泵在亮細(xì)胞頂部重新定位，質(zhì)子泵分泌H+使得管腔環(huán)境進(jìn)一步酸化。這種細(xì)胞間的串話通過胞膜上的若干受體［包括主細(xì)胞中的囊性纖維化跨膜轉(zhuǎn)導(dǎo)調(diào)節(jié)因子（cysticfibrosistransmembraneconductanceregulator,CFTR)和亮細(xì)胞中的Na+/HCO3-協(xié)同轉(zhuǎn)運(yùn)體(Na+/HCO3-co-transporter，NBC)］介導(dǎo)。ATP酶在亮細(xì)胞頂部的聚集需要胞內(nèi)的Ca2+,因?yàn)镃a2+可以動(dòng)態(tài)調(diào)整肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架。Ca2+也可通過位于精子鞭毛主段的陽離子通道(CATSPER)進(jìn)入精子，直接調(diào)節(jié)精子的功能。敲除CatSper將阻止Ca2+流入，進(jìn)而精子運(yùn)動(dòng)性降低［31］。附睪管腔液中存在豐富的蛋白質(zhì)成分。在人附睪中，77%的管腔蛋白由10種蛋白質(zhì)組成：白蛋白(albumin,HAS)(43.8%)、凝集素(clusterinCLU)(7.6%)、尼曼-皮克病C2型(Niemann-PickdiseasetypeC2,NPC2)(6%)、乳鐵蛋白(lactoferrinLF)(5.9%)、細(xì)胞外基質(zhì)蛋白(extracellularmatrixproteinECM1)(3.2%)、al-抗胰蛋白酶(od-antitrypsinA1AT)(2.7%)、前列腺素D2合成酶(prostaglandinD2synthase,PTGDS)(2.2%)、附睪蛋白3(humanepididymalprotein3,HE3)(1.7%)、轉(zhuǎn)鐵蛋白(transferrinTF)(1.3%)、肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白(actinbindingprotein,ABP)(1.2%)。這些附睪蛋白大多具有許多異構(gòu)體的特點(diǎn)，這些異構(gòu)體的產(chǎn)生是由于其高度的翻譯后修飾，如糖基化［32］。CLU作為附睪管腔中的主要蛋白質(zhì)成分之一，是蛋白質(zhì)的胞外伴侶，在小鼠附睪中，由頭部主細(xì)胞表達(dá)，廣泛存在于管腔內(nèi)，參與脂質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)、細(xì)胞凋亡過程中的膜重塑和蛋白質(zhì)分子調(diào)控，有抗氧化應(yīng)激和補(bǔ)體誘導(dǎo)細(xì)胞裂解的保護(hù)作用，阻止蛋白聚集和沉淀，對(duì)精子成熟和獲能很重要。在附睪尾部管腔的微酸性pH環(huán)境下，CLU可結(jié)合部分管腔蛋白，將其遞送至精子表面。有研究表明CLU能與小鼠附睪管腔內(nèi)大量存在的重要卵結(jié)合蛋白1(sperm-eggbinding1，SED1)相互作用，在一些非獲能精子中，CLU和SED1的部分共定位，獲能后兩者分離，CLU移動(dòng)到精子頭部鉤型區(qū)域，SED1轉(zhuǎn)移到卵子結(jié)合位點(diǎn)［33］。另一附睪蛋白NPC2，包含一個(gè)功能性膽固醇結(jié)合位點(diǎn)，可以在膜之間轉(zhuǎn)移膽固醇，精子膜的膽固醇含量在附睪成熟和雌性生殖道獲能過程中發(fā)生動(dòng)態(tài)變化，NPC2可能參與附睪成熟期間精子中膽固醇水平的調(diào)節(jié)。此外，與野生型小鼠相比，NPC2敲除小鼠精子具有缺陷的酪氨酸磷酸化模式，使得卵丘-卵母細(xì)胞復(fù)合體的受精能力降低，這表明NPC2與雄性生育能力相關(guān)［34］。有研究利用免疫組織化學(xué)方法，檢測(cè)到LF位于附睪頭部和尾部的主細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)，并且僅在青春期及青春期后的動(dòng)物體中表達(dá)，同時(shí)在精子的中段和尾部也觀察到LF的免疫標(biāo)記，這提示LF結(jié)合于精子并發(fā)揮一定的保護(hù)或調(diào)節(jié)作用［35］。附睪管腔的另一特點(diǎn)是存在豐富的胞外囊泡。早在1985年，Yanagimachi等［36］就在倉鼠附睪精子的近表面處鑒定出了一定數(shù)量的膜性囊泡，并推測(cè)其可能向成熟精子運(yùn)輸膽固醇。這些囊泡在一些物種如小鼠、大鼠、公牛、人類的附睪液中已被證實(shí)存在［37］，現(xiàn)在這種附睪腔中的囊泡普遍被認(rèn)為是附睪小體。附睪小體的特征為相對(duì)小的囊泡(50~5nm)、內(nèi)有各種大分子和膜富含膽固醇［38］，推測(cè)其功能為促進(jìn)精子成熟，可能通過直接與精子接觸傳遞信號(hào)，也可能通過向上皮細(xì)胞運(yùn)輸物質(zhì)間接調(diào)節(jié)精子成熟。二.附睪小體介導(dǎo)的體細(xì)胞-精子間通訊附睪小體是附睪上皮細(xì)胞通過頂漿分泌的方式產(chǎn)生的外泌體。主細(xì)胞的頂漿分泌是附睪中主要的分泌方式之一，其特點(diǎn)是在細(xì)胞頂部邊緣合成及釋放囊泡狀結(jié)構(gòu)（例如頂端小泡），釋放膜狀的胞外囊泡即附睪小體。隨著囊泡在管腔中被降解，其內(nèi)含物傳遞與精子和下游上皮細(xì)胞間的通訊（圖1）。這種方式為不可通過局漿分泌運(yùn)輸?shù)礁讲G腔內(nèi)的物質(zhì)提供了一種轉(zhuǎn)運(yùn)途徑，如缺少內(nèi)質(zhì)網(wǎng)信號(hào)肽序列和/或含有糖基磷脂酰肌醇（glycosyl-phosphatidylinositolGPI）錨的蛋白[39]。這些蛋白在高爾基體內(nèi)翻譯修飾，被包裹成附睪小體，逐漸聚集成大的泡狀結(jié)構(gòu)，從上皮細(xì)胞頂部邊緣形成突起，以出芽方式（可能是通過細(xì)胞骨架蛋白如肌球蛋白和阮肌動(dòng)蛋白的重排實(shí)現(xiàn)）與細(xì)胞分離并脫落到管腔。釋放后的附睪小體，可以作為一種運(yùn)輸載體，將物質(zhì)運(yùn)輸?shù)骄颖砻?，直接參與精子成熟的調(diào)節(jié)。附睪小體作為一種物質(zhì)傳遞的中介，為附睪中體細(xì)胞和精子間交流提供了一種方式，其可以運(yùn)輸高分子復(fù)合物到精子，這些復(fù)合物包括數(shù)百種蛋白質(zhì)和sncRNAs。近年來越來越多的證據(jù)表明附睪小體中的功能蛋白和sncRNAs可參與調(diào)節(jié)精子成熟過程。I附亦開導(dǎo)的I.理寫精翩無流n式附睪小體相關(guān)蛋白對(duì)精子成熟的影響:蛋白質(zhì)組分析顯示，人類和公牛的附睪小體含有數(shù)百種蛋白質(zhì)(包括酶、分子伴侶、結(jié)構(gòu)蛋白和許多迄今功能未知的蛋白)。已知其中一些蛋白在附睪中可被直接運(yùn)輸?shù)教囟ǖ木訁^(qū)域，促進(jìn)精子的功能成熟。典型的例子是巨噬細(xì)胞游走抑制因子(macrophagemigrationinhibitoryfactor，MIF)，一種在多種組織中廣泛分布和有多種功能的細(xì)胞因子。在大鼠和牛的附睪中，MIF從附睪小體轉(zhuǎn)運(yùn)到精子鞭毛的纖維鞘中，進(jìn)而影響精子的運(yùn)動(dòng)能力［37］。又如，GPI錨定蛋白P26h/P34H家族成員(倉鼠的P26h，牛的P25b，人的P34H)，原本位于附睪小體中，然后被錨定到精子頂體表面。研究表明，這些蛋白質(zhì)為精子與透明帶結(jié)合所必需，是受精成功的前提［38］。其他被轉(zhuǎn)運(yùn)的蛋白還包括膜相關(guān)、跨膜和GPI錨定候選蛋白等。附睪小體可能為精子提供一種重要的物質(zhì)運(yùn)輸方式一一裝配好的蛋白質(zhì)復(fù)合體。精子和附睪小體體外共孵育的研究為觀察這一運(yùn)輸模式提供了直接證據(jù)，蛋白復(fù)合體MCA4a-PMCA4b-CASK在附睪小體中直接被免疫共沉淀出來［40］。在最佳的體外孵化條件(pH=6.5，高濃度的Zn2+)下，這一蛋白質(zhì)復(fù)合體被運(yùn)輸?shù)叫坌耘渥雨P(guān)鍵功能區(qū)域一一頂體和鞭毛中段［37］。我們的研究也證實(shí)，Y-谷氨酰羧化酶(Y-glutamylcarboxylase，GGCX)與其底物基質(zhì)Gla蛋白(matrixGlaproteinMGP)的共定位主要集中在附睪體部和尾部的主、亮細(xì)胞及管腔中的囊泡狀結(jié)構(gòu)，協(xié)同維持附睪管腔鈣穩(wěn)態(tài)，提示GGCX和MGP可能參與囊泡介導(dǎo)的上皮細(xì)胞和精子間通訊，二者以附睪小體的方式共同分泌到附睪管腔中，使得MGP在精子周圍環(huán)境中結(jié)合Ca2+［41］。還有研究表明，牛附睪不同節(jié)段的附睪小體能夠?qū)⒉煌牡鞍踪|(zhì)運(yùn)輸?shù)骄由?，研究者觀察到，在與牛附睪精子共孵育期間，從附睪頭部收集的附睪小體不會(huì)明顯影響尾部附睪小體的轉(zhuǎn)運(yùn)功能［42］。從牛附睪液中發(fā)現(xiàn)附睪小體根據(jù)大小和分子組成不同可以分為兩個(gè)獨(dú)立亞群，其中較小群體的直徑為10~1nm，富含有四次跨膜微區(qū)的CD9及協(xié)同分子CD26，同時(shí)含有相對(duì)高濃度的其他蛋白質(zhì)，如MIF和P25b，易與活精子發(fā)生反應(yīng)，在精子成熟過程中發(fā)揮作用；另一亞群的特征是含附睪精子結(jié)合蛋白1，易與死精子反應(yīng)［38］。附睪小體的異質(zhì)性及其選擇性地與不同狀態(tài)精子反應(yīng)的能力說明，這些反應(yīng)可能受到嚴(yán)格的調(diào)控。附睪小體中sncRNA對(duì)精子成熟的影響：除了蛋白質(zhì)外，附睪小體也含有不同的sncRNA，包括miRNA和tRNA片段［43-44］。與蛋白質(zhì)一樣，這些sncRNA也可以被直接轉(zhuǎn)移到成熟精子中。對(duì)雄性小鼠施以飲食干擾（如低蛋白飲食）可以顯著影響附睪的sncRNA譜，同時(shí)，這些變化也出現(xiàn)在精子的sncRNA譜中，而附睪小體被認(rèn)為是將附睪sncRNA運(yùn)輸?shù)骄拥妮d體。隨后，精子在受精過程中可將這些sncRNA傳遞到卵母細(xì)胞，再通過作用于特定的基因，對(duì)早期胚胎發(fā)育進(jìn)行表觀遺傳控制［44］。這些發(fā)現(xiàn)有助于更深入地理解附睪小體物質(zhì)包裹和運(yùn)輸?shù)臋C(jī)制以及物質(zhì)被轉(zhuǎn)運(yùn)到下游細(xì)胞的方式，也有助于研究載體對(duì)成熟精子功能的影響程度。檢測(cè)小鼠附睪頭部近端收集的精子，miRNA是最豐富的sncRNA種類［45］。因miRNA（21~25核苷酸）對(duì)mRNA的翻譯起到關(guān)鍵抑制作用，受到了極大關(guān)注?，F(xiàn)在，基因芯片和高通量測(cè)序技術(shù)的應(yīng)用已經(jīng)實(shí)現(xiàn)了對(duì)人（545個(gè)）和小鼠（370個(gè)）附睪全部miRNA的鑒定［2］。大部分miRNA在附睪的不同節(jié)段，甚至在不同物種之間是保守的，保守序列的比例在小鼠附睪中為75%，在小鼠和人之間達(dá)31%，表明這些miRNA在調(diào)節(jié)附睪穩(wěn)態(tài)中發(fā)揮著“看家基因”的作用。相比之下，其他miRNA的表達(dá)具有顯著的節(jié)段特異性（在小鼠附睪中為15%）。例如，小鼠附睪的尾部和頭部相比，miR-204-5p和miR-196b-5p分別被顯著上調(diào)和下調(diào)約39倍和45倍。而每種miRNA都有調(diào)節(jié)多個(gè)靶點(diǎn)的可能性，使得這些差異表達(dá)的生物學(xué)意義更顯著。例如，靶分子預(yù)測(cè)分析顯示，分別有530個(gè)和160個(gè)基因有可能是miR-204-5p和miR-196b-5p的靶點(diǎn)［46］。因此，miRNA在附睪各節(jié)段的差異表達(dá)極大地增加了附睪各節(jié)段微環(huán)境調(diào)控的復(fù)雜性。附睪miRNA差異表達(dá)的確切機(jī)制尚未研究透徹，但無疑受雄激素和其他來自睪丸的分泌因子的影響。另外，也有學(xué)者提出，從附睪近端產(chǎn)生的miRNA，可能被附睪小體選擇性地運(yùn)輸?shù)较掠喂?jié)段中作為接受者的上皮細(xì)胞內(nèi)［47］。附睪小體與精子的作用機(jī)制：對(duì)于附睪小體與精子結(jié)合的機(jī)制，有研究指出，附睪小體可能是通過GPI錨定到精子表面脂質(zhì)雙分子層的外面開始的，并推測(cè)這種錨定是在附睪小體和精子的膜融合之后進(jìn)行的［39］。因CD9的黏著/融合特性，該四次跨膜蛋白可作為調(diào)節(jié)融合作用的候選蛋白。相應(yīng)地，抗CD9抗體能夠降低蛋白質(zhì)從附睪小體到精子的轉(zhuǎn)移效率［48］?？紤]到附睪小體與精子的相互作用在物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)和不同精子群中的選擇性，推測(cè)CD9不是唯一的候選蛋白，如在牛的附睪中，不具有CD9的附睪小體亞群仍能與精子反應(yīng)。由于脂