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實(shí)驗(yàn)三、種子發(fā)芽測(cè)定一、目的要求要求掌握種子發(fā)芽測(cè)定的操作方法,學(xué)會(huì)計(jì)算種子發(fā)芽的各種質(zhì)量指標(biāo)。二、材料器具1.材料:刺槐種子。2.器具及藥品:恒溫箱、培養(yǎng)皿、濾紙、鑷子、溫度計(jì)(0~100℃)、取樣匙、直尺、量筒、燒杯、高錳酸鉀、標(biāo)簽、蒸餾水、洗瓶、解剖刀、解剖針等。三、方法步驟1.抽取測(cè)定樣品
從凈度測(cè)定選出的純凈種子中提取。用四分法將種子分成4份,從每份中隨機(jī)提取25粒種子組成100粒。共取4個(gè)100粒,即成為4次重復(fù)。種粒大的可以50?;?5粒為一次重復(fù),樣品數(shù)量有限或設(shè)備條件不足時(shí),也可以采用2-3次重復(fù),但應(yīng)在檢驗(yàn)證中注明。2.消毒滅菌
為了預(yù)防霉菌感染,干擾檢驗(yàn)結(jié)果,檢驗(yàn)所使用的種子和各種物件一般都要經(jīng)過(guò)消毒滅菌處理。①
用具消毒:培養(yǎng)皿、紗布、小鑷子仔細(xì)洗凈,并用沸水煮5~10min。②
種子消毒:常用福爾馬林、或高錳酸鉀、過(guò)氧化氫等。藥劑種類不同,處理的方法和時(shí)間也不一致。刺槐種子用0.2~0.5%的高錳酸鉀溶液浸2h,取出用清水沖洗數(shù)次即可。測(cè)定樣品的預(yù)處理目的是解除休眠,使種子發(fā)芽整齊,便于統(tǒng)計(jì)。一般的種子可進(jìn)行浸水處理,但深休眠的種子需要經(jīng)過(guò)不同方法的預(yù)處理才能發(fā)芽,如低溫層積法。刺槐用始溫為85℃的熱水浸種(種子與水的體積比為1:3),不斷攪拌至水涼,然后放置24h,浸種期間更換室溫水1~2次。置床將經(jīng)過(guò)消毒、浸種的種子擺放到發(fā)芽床上。視樹種而不同,常用的發(fā)芽床有紗布、濾紙或細(xì)砂。一般中粒、小粒種子可在培養(yǎng)皿中放上紗布或?yàn)V紙作發(fā)芽床。刺槐種子以濾紙為發(fā)芽床。在每個(gè)培養(yǎng)皿床上整齊地安放100粒種子,種粒之同保持的距離大約相當(dāng)于種粒大小的2~3倍,以減少霉菌蔓延感染,并避免幼根糾纏。培養(yǎng)皿貼上標(biāo)簽,寫明樣品號(hào)、重復(fù)號(hào)、姓名和置床日。將培養(yǎng)皿蓋好放入恒溫箱內(nèi)。根據(jù)樹種的特性使用變溫或恒溫,刺槐適宜的發(fā)芽溫度為20~30℃。濕度為60~70%。發(fā)芽測(cè)定的管理(1)定時(shí)檢查發(fā)芽環(huán)境的溫度;(2)保持發(fā)芽床的水分,水分不足時(shí)應(yīng)及時(shí)加水;但水分也不能過(guò)多,種粒四周出現(xiàn)水膜,表示水分過(guò)多。(3)通氣,種子發(fā)芽需要足夠的氧氣,并會(huì)釋放出大量的二氧化碳。有蓋的培養(yǎng)皿缺點(diǎn)之一就是通氣不良,應(yīng)當(dāng)定期揭開蓋子充分換氣。(4)將輕微感染霉菌的種子取出(不要使它們觸及健康的種粒),用清水沖洗數(shù)次,直到水無(wú)混濁再放回發(fā)芽床。發(fā)霉嚴(yán)重時(shí)整個(gè)濾紙和座墊,甚至整個(gè)培養(yǎng)皿都要更換。這些情況在發(fā)芽記錄表中應(yīng)有記錄。觀察記載發(fā)芽測(cè)定的情況要定期觀察并及時(shí)紀(jì)錄。本實(shí)驗(yàn)要求每天作一次觀察記錄。記錄時(shí)揀出正常發(fā)芽粒、腐壞粒和異狀發(fā)芽粒。發(fā)芽測(cè)定的持續(xù)時(shí)間
發(fā)芽測(cè)定的持續(xù)天數(shù)參見國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)《林木種子檢驗(yàn)規(guī)程》。以置床之日為零起算,不包括種子預(yù)處理的時(shí)間。如果確認(rèn)某樣品已經(jīng)達(dá)到最高發(fā)芽率,也可在規(guī)定的時(shí)間以前結(jié)束測(cè)定。如到規(guī)定的結(jié)束時(shí)間仍有較多的種粒萌發(fā),也可酌情延長(zhǎng)測(cè)定時(shí)間。發(fā)芽測(cè)定所用的實(shí)際天數(shù)應(yīng)在檢驗(yàn)報(bào)告中填明。本次實(shí)驗(yàn)中刺槐種子發(fā)芽測(cè)定的持續(xù)天數(shù)擬定為7天。記載項(xiàng)目日期,發(fā)芽種子數(shù),腐爛種子數(shù),異狀發(fā)芽種子數(shù)。判斷標(biāo)準(zhǔn)正常發(fā)芽?!L(zhǎng)出正常胚根。其長(zhǎng)度大于該種粒一半的稱為正常發(fā)芽粒。異狀發(fā)芽?!概吒潭L(zhǎng)遲滯、胚根呈負(fù)向地性;胚根異常纖弱;胚根腐壞;胚根出自珠孔以外的部位;種殼暴烈脫落;胚根卷曲;子葉先出;胚根聯(lián)結(jié)。腐爛?!獌?nèi)含物腐敗成膠狀的無(wú)生命種子稱腐爛粒。應(yīng)及時(shí)提出并在表格中記述。未發(fā)芽?!看翁蕹l(fā)芽粒、異狀發(fā)芽粒和腐爛粒之后將余下的未發(fā)芽粒重新排放整齊,并點(diǎn)數(shù),以便及時(shí)核查,避免差錯(cuò)。到發(fā)芽終止日期后,分組用切開法對(duì)尚未發(fā)芽的種粒進(jìn)行鑒定,分別歸成新鮮健全粒、腐爛粒、空粒、澀粒(多見于杉木、柳杉)等幾類并記入表中。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)及計(jì)算表第一組第二組日期發(fā)芽腐爛異狀發(fā)芽發(fā)芽腐爛異狀發(fā)芽6月8號(hào)230020026月9號(hào)250029006月10號(hào)17026106月11號(hào)8008206月12號(hào)2004106月13號(hào)1404426月14號(hào)0403406月15號(hào)0300406月16號(hào)020000合計(jì)7613274164未發(fā)芽種子9個(gè)硬化無(wú)空粒6個(gè)硬化無(wú)空粒發(fā)芽率76%74%絕對(duì)發(fā)芽率76%74%發(fā)芽勢(shì)48%49%平均發(fā)芽速度0.1180.121
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