NY-T 4357-2023 植物源性食品中葉綠素的測定 高效液相色譜法

KS6502001CCSR04中華人民共和國農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)NY/T4357-2023植物源性食品中葉綠素的測定高效液相色譜法l>cterminationofchloroplnIIinr(M>dsofplantoriginhyhighpt^rfbrmunce

liquidchnHnatograph)2023-08-01實施2023-04d12023-08-01實施屮屮人比共和1對農(nóng)收農(nóng)村部發(fā)布NY/T4357-2023NY/T4357-2023IINY/T4357-2023NY/T4357-2023II本文件按照GB/T1.1—2020＜標(biāo)準(zhǔn)化工怍導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起孕規(guī)則》的規(guī)定起革。語注意本文件的某些內(nèi)容0J能涉及專利。本文的發(fā)布機(jī)溝不承拘識別專利的黃任。本文件中農(nóng)業(yè)農(nóng)村部農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)tt安全監(jiān)管司提出。本文件由農(nóng)業(yè)農(nóng)村部農(nóng)產(chǎn)品苕養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)專家委員會歸門。本文件起草笮位:北京市營養(yǎng)源研究所有限公司.農(nóng)、Ik農(nóng)村部食物與營養(yǎng)發(fā)展研究所，內(nèi)衆(zhòng)古衆(zhòng)牛乳4H集閉）股份有限公司、大連丁收人學(xué)、北京丁商大學(xué)、北京林業(yè)大學(xué)、北京巾理化分析測試屮心、北京市農(nóng)林科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品加工與食品營養(yǎng)研究所、北京東方倍力營養(yǎng)科技有限公司、安徽W泰眾信檢測技術(shù)冇附公司、中國農(nóng)業(yè)科卞院農(nóng)產(chǎn)品加工研究所。本文件主要起單人：崔亞媧、朱大洲、孔凡華、張誤惟、趙禎、白沙沙、劉玉峰、許洪離、特日格樂、林立民、王佳、馬利平、杜明、李赫，孟冬、楊清、賈麗、劉光敏，蔣峰、蔣彤、何濤、劉璇.植物源性食品中葉綠素的測定高效液相色譜法1范圍本文件規(guī)定r棺物源性食品中葉綠素的髙效液柏色講測定方法，本文件適用于棺物源性食品屮葉綠素的》定，2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中.注H期的引用文件，僅該H朗對應(yīng)的版本適用T?本文件I不注H期的引用文件.其最新版本（包拮所有的修改申-）適用f本文件。GB/T6682分析實驗宰川水規(guī)格和試驗方法3術(shù)谞和定義本文件沒冇苗要界定的術(shù)語和定義.4原理試樣中的葉綠隸經(jīng)甲醇提取、濃縮后.經(jīng)反相液相色譜柱分離.用紫外檢測器或二極曾陣列檢測器檢測I根據(jù)色譜峰的保留時間定性.外標(biāo)法定ft。5試剤和材料除非另有說明，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T6682規(guī)定的一級水，1試劑5.1.1無水硫酸納（Na2SO/＞.5.122,6-二叔丁基対甲酚（C15II：4O）.簡稱BHT.5.I.3甲醇（CH,OH）.5.1.4申酵（CH、OHh色講純，5.2試劑配制0.1%BHT甲醇溶液：稱取0.IgBHT（5.1.2）于燒杯中.用甲醇（5.1.3）溶解口，轉(zhuǎn)移列100mL容ft瓶中.用甲醇（5.1.3）定容，混勻.5.3標(biāo)準(zhǔn)品5.3.1葉綠ga（CS5HJ2MRN4O5.CAS^：479618＞，純度＞95.0%.或經(jīng)國家認(rèn)證并授予標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證朽的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。5.3.2葉綠衆(zhòng)b（C?HJtMgN4Os,CAS號：51￡）-62-0），純度＞95.0%.或經(jīng)H家認(rèn)證并授f標(biāo)準(zhǔn)物瘐證書的標(biāo)職物質(zhì)，5.4標(biāo)準(zhǔn)溶液配制5.4.1標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液（100Pg/mLh稱取葉鉍素a標(biāo)準(zhǔn)品、葉綠素b標(biāo)準(zhǔn)品各5.00mg（梢確至0.01mg）分別S于燒杯巾.用屮醇（5.1.4）溶解后，分別轉(zhuǎn)移到50mL棕色容S瓶中.用屮醇（5.1.4）定容。標(biāo)準(zhǔn)儲折溶液2T棕色樣品瓶中，充氮密閉，_18t冰箱儲存.有效期3個月。5.4.2混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：分別移取葉綠家a標(biāo)準(zhǔn)儲揚溶液和葉綠窮b標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液（5.4.1）0.10mL、0.20mL、0.50mL,1.00mL,2.00mL、5.00mL，混合于10mL稼色容量瓶中，用甲醇（5.1.4）定容，得到濃度為1.00pg/mL,2.00pg/niL、5.00fig/mL,10.00|ig/mL,20.00pg/mL,50.00pg/mL的系列混合M/14357-2023M/14357-2023NY/T4357-2023標(biāo)準(zhǔn)工作溶液.現(xiàn)用現(xiàn)配。5.5材料5.5.1有機(jī)系微孔濾膜:孔徑為0.455.2反向液相色譜拄：Cis柱，5jim.150mmX4.6mm（內(nèi)徑），或等效注。6儀器與設(shè)備6.1夭平：感So.ooolg和o.ooooig。6.2卨效液相色譜儀：配有二極管陣列檢測器或性能相當(dāng)?shù)臋z測器,3勻漿機(jī)。6.4卨速粉碎機(jī)。6.5冷卻水循環(huán)裝S.6.6渦旋振蕩器。6.7數(shù)控超和波清洗器，8髙速離心機(jī).轉(zhuǎn)速＞6000r/min.6.9旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。6.10a吹儀D7分析步驟7.1試樣制備試樣取吋食部分經(jīng)勻漿機(jī)勻漿或離逨粉碎機(jī)粉碎均勻后.儲存于樣品瓶屮.樣品現(xiàn)用現(xiàn)制備?7.2試樣處理7.2.1提取若樣品為深綠色.則稱取0.5g~1.0g（樣品祜確全0.0001g）S于50mL離心管中：若樣品為綠色.稱取1.0g-2.0g（樣品捎確至0.00001g）S于50mL離心ft屮：若樣品為淺綠色，稱取2.0g~5.0g（樣品枯確至0.0001g）SF50mL離心管中＞其他樣品唞稱取5.0g?10.0g.S于50mL離心管中。而后.若樣品為液體.則加人無水疏酸鈉（5.1.1）1g，固體試樣小盅要加尤水硫酸衲，然后，加人0.1%BUT甲醇溶液（5.2）15mL,渦旋混勻，超聲提取2min,8000r/min離心5min,將上層溶液轉(zhuǎn)移至150ml.旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)瓶內(nèi)，重g捉取3次.合并捉取液于蒸發(fā)瓶內(nèi)，7,2.2濃縮將蒸發(fā)瓶接在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上.40V水浴滅壓蒸餾.待瓶中萃取液剩下約2mL時.取下蒸發(fā)瓶.立即用氣氣吹至近干。用0.1%BHT甲醇溶液（5.2）洗出蒸餾瓶中的組分.轉(zhuǎn)移到5tnL容ft瓶中.用0.1%BHT平醉溶液（5.2）定容，溶液過0.45有機(jī)系微孔濾膠癘，采用商效液相色誚儀測定葉鉍袞a和葉綠累b的含承.根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)丄作溶液屮葉綠柰a和葉綠袞b的含S進(jìn)行稀擇.不加試樣，按同一操作方法做空白試驗a7.3刻定3.1儀器參考條件3.1.1反向液向色譜柱：C18柱.5gm,150mmX4.6mm（內(nèi)徑），或等效柱.7-312柱溢7.3.1.3流動相：甲醇57.3.1.4流速：1.0mL/min97-3.1.5檢闌波長：葉綠素a為665ntn,葉綠素b為468nnu7.3.1.6進(jìn)樣量,1OHL?z32鐸*曲線的M作將系灼批雇I作續(xù)分M注人鋟川&曲儀中.M^用4的錄AKi以鉍凈工作液的濃*為■，鉍.以峰733樣S的測X試擇溶液螳鷀效瀆相色Ait分桁.則徇蟾凼積，柑據(jù)份，漕溶液&廉蟾的MM時時，対試打溶液的色邊鱗透圯■.葉鉍《?>耐4釈i>h壤濟(jì)精贐iiift坩mo.M4a.?曜討算試時屮葉球搴I.、葉鉍家h的啪#泠的格公式<丨|什蘚X>l>.?. uUf中》|場家B戎時場鬏1>質(zhì)《5^軚的ttift.f F?<mgk?>i，. 算柯M的■!綠家?成M域Cb場瞳濃《的ftfl.攀位為龜n<"Kml.),V UUV洧液貧妁體択的R姐，*KT為老IHnilu?——_試樣《質(zhì)■的數(shù)的.摯位為龜<g>l/ KWffi數(shù).試_中總?cè)~場霣的次玷痄公式<2)什算，?iA?M>總*t綠*次■的數(shù)tt?中位為<免4rKmichK><?.iAW中畤《家*含鑛的ft的.穿《為奄仿毎千<t<mBU)>?. 忒桿中葉綠家b含緩的數(shù)《.單位為鼇克<mKU)I以2次《ii!坫*的W本r灼他Att.ll算坫《保坩i位<1玫教/9積*磨91豫復(fù)S作?蕙憐本件Filflj的？次麯茫澤Ti?樂的絕好rtt不巧?<1算if均?的I，)92與現(xiàn)餃bft潯的2次BA測記??的小岬ttd箅來f均餹的10>.10幢出