腹瀉病相關(guān)病毒學(xué)課件

病毒性腹瀉研究進(jìn)展1腹瀉病概述和腹瀉病毒檢測(cè)意義臨床常見(jiàn)的腹瀉病原學(xué)檢測(cè)方法博暉免疫熒光分析系統(tǒng)簡(jiǎn)介2Part1

腹瀉病概述和腹瀉病毒檢測(cè)意義腹瀉病概述腹瀉病發(fā)病趨勢(shì)病毒等其它感染性腹瀉現(xiàn)狀病毒性腹瀉臨床診斷意義3腹瀉病概述腹瀉病是由多種病原體、多種因素引起的以大便次數(shù)增多和大便性狀改變?yōu)樘攸c(diǎn)的一組疾病，是兒童患病和死亡的主要原因，也是營(yíng)養(yǎng)不良的重要原因[1]。我國(guó)每年有8.36億人次患腹瀉，其中5歲以下小兒占3億人次。2005年中國(guó)小兒因急性腹瀉死亡人數(shù)多達(dá)160萬(wàn)[1]。[1]《兒童腹瀉病診治專(zhuān)家共識(shí)》中華醫(yī)學(xué)會(huì)兒科分會(huì)消化學(xué)組、中華醫(yī)學(xué)會(huì)兒科分會(huì)感染學(xué)組、中華兒科雜志通訊作者：陳潔浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院兒童醫(yī)院（杭州310003）4病名2010年2011年2012年2013年發(fā)病數(shù)病死人數(shù)發(fā)病數(shù)病死人數(shù)發(fā)病數(shù)病死人數(shù)發(fā)病數(shù)病死人數(shù)霍亂1570240750531細(xì)菌性和阿米巴性痢疾25224836237930242074291318866913傷寒和副傷寒140413117981119983141363其它感染性腹瀉病746551438365912388567817101258920腹瀉病發(fā)病趨勢(shì)[2]全國(guó)法定傳染病（腹瀉類(lèi)）發(fā)病數(shù)據(jù)（數(shù)據(jù)來(lái)源：衛(wèi)計(jì)委網(wǎng)站）腹瀉病發(fā)病趨勢(shì)2013年全年（2013年1月1日零時(shí)至12月31日24時(shí)），丙類(lèi)傳染病共報(bào)告發(fā)病3358955例，死亡291人，報(bào)告發(fā)病率為248.07/10萬(wàn),病死率0.02/10萬(wàn)，分別較2012年下降10.5%和51.25％。[3]報(bào)告中發(fā)病人數(shù)居前五位的病種依次為：手足口病、其它感染性腹瀉病、流行性腮腺炎、流行性感冒和急性出血性結(jié)膜炎，占丙類(lèi)報(bào)告發(fā)病總數(shù)的99.29％。[3]報(bào)告中死亡數(shù)居前三位的是：手足口病、其它感染性腹瀉病和流行性感冒，占丙類(lèi)傳染病報(bào)告死亡總數(shù)的98.28％。[3][3]《2013年度全國(guó)法定傳染病疫情情況》中華人民共和國(guó)國(guó)家衛(wèi)計(jì)委6病毒等其他感染性腹瀉現(xiàn)狀2006年中國(guó)共報(bào)告其它感染性腹瀉病例741809例，報(bào)告發(fā)病率為56.73/10萬(wàn)。既往調(diào)查農(nóng)村地區(qū)人群腹瀉發(fā)病率為1220/10萬(wàn)-3360/10萬(wàn)，就診率僅為6.3%-50%。在日本，2005年3046家兒科定點(diǎn)監(jiān)測(cè)的感染性腹瀉病例就達(dá)941572例，由此可見(jiàn)中國(guó)其它感染性腹瀉的報(bào)告病例數(shù)與實(shí)際發(fā)病水平相差甚大[4]。[4]《中國(guó)感染性腹瀉監(jiān)測(cè)策略的思考與建議》作者單位：中國(guó)疾病預(yù)防控制中心疾控處應(yīng)急辦腸道傳染病防制辦公室，作者：張靜，副研究員，主要從事傳染病監(jiān)測(cè)與控制工作7病毒等其他感染性腹瀉現(xiàn)狀

中國(guó)2011年其它感染性腹瀉的流行病學(xué)及病原學(xué)特征：選取2011年1-52周“疾病監(jiān)測(cè)信息報(bào)告管理系統(tǒng)”中全國(guó)31個(gè)省報(bào)告的其他感染性腹瀉病例作為研究對(duì)象，共836591例；其中，具有明確病原學(xué)診斷的確診病例59929例。其它感染性腹瀉突發(fā)公共衛(wèi)生事件信息中，共30起暴發(fā)疫情[5]。

[5]《2011年中國(guó)其他感染性腹瀉監(jiān)測(cè)現(xiàn)狀分析》《中華預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志》CASCSCD2013年第4期328-332頁(yè),共5頁(yè)8病毒等其他感染性腹瀉現(xiàn)狀2011年報(bào)告的其它感染性腹瀉患者836591例，發(fā)病率為62.39/10萬(wàn)。病例發(fā)病年齡主要集中在0-5歲組，發(fā)病率為447.06／10萬(wàn)（436098例），占總數(shù)的52.3％（436098／836591），報(bào)告病例發(fā)病有2個(gè)高峰期，夏季（第23-35周），占34.33％（287231/836591）；冬季（第43-52周），占23.54％（196939／836591）。報(bào)告的30起疫情中，其中5起有明確病原學(xué)診斷結(jié)果。其中，4起由諾如病毒引起。2011年其它感染性腹瀉確診病例占報(bào)告病例數(shù)的7．16％（59929／836591），其中，病毒感染56687例。[5]《2011年中國(guó)其他感染性腹瀉監(jiān)測(cè)現(xiàn)狀分析》《中華預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志》CASCSCD2013年第4期328-332頁(yè),共5頁(yè)9病毒性腹瀉診斷臨床意義腹瀉病臨床癥狀相似，但病毒性腹瀉的治療方案與細(xì)菌等引起的腹瀉有很大不同。有報(bào)道發(fā)現(xiàn)雙重病毒或多重病毒感染的腹瀉，其癥狀更嚴(yán)重，病情進(jìn)展快，致死率更高。由于腸道傳染病的臨床表現(xiàn)和常用的輔助檢查缺乏明顯的特異性，因此存在著疾病早期病原體診斷不明確的危險(xiǎn)因素，從而存在著疾病早期濫用抗生素、生病期延長(zhǎng)而增加患者痛苦和經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)的客觀因素。

因此，針對(duì)由病毒引起的腹瀉研制快速準(zhǔn)確的診斷技術(shù)，對(duì)指導(dǎo)臨床對(duì)癥治療和避免濫用抗生素有重要意義，特別是對(duì)嬰幼兒腹瀉在診斷上更有意義。[6]《病毒性腹瀉的研究進(jìn)展》雷炳鈞，華西醫(yī)科大學(xué)；《臨床內(nèi)科雜志》1998年第4期；10病毒性腹瀉診斷臨床意義為疾病診斷和鑒別診斷、臨床療效觀察和預(yù)后效果提供依據(jù)。符合循證醫(yī)學(xué)原則，提升醫(yī)療診治科學(xué)性。從癥狀學(xué)診治轉(zhuǎn)變?yōu)椴∫驅(qū)W診治?？陀^上降低抗生素濫用，縮短不必要的病程。減少病患不必要的痛苦，降低不必要的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。為不同的病因，不同的自然病史，不同的臨床相，不同的預(yù)后轉(zhuǎn)歸提供判斷依據(jù)?？焖贉?zhǔn)確的診斷方法11病毒性腹瀉診斷臨床意義為流行病學(xué)監(jiān)測(cè)及事件分析處理積累資料記錄在人群中的傳播規(guī)律為臨床醫(yī)生提供相對(duì)可靠的病原體感染譜，為經(jīng)驗(yàn)性診斷和治療提供科學(xué)依據(jù)。制定針對(duì)性的公共衛(wèi)生應(yīng)對(duì)策略：隔離傳染源切斷傳播途徑，如搞好環(huán)境衛(wèi)生，個(gè)人衛(wèi)生，認(rèn)真洗手等保護(hù)易感人群，如接種疫苗明確病因?qū)W診斷可以消除不必要的恐慌，尤其是暴發(fā)疫情12病毒性腹瀉診斷臨床意義為科學(xué)研究提供可靠數(shù)據(jù)為科研提供大量基礎(chǔ)數(shù)據(jù)的支持為臨床和流行病學(xué)積累資料，促進(jìn)研究工作的深入開(kāi)展為醫(yī)療單位、相關(guān)科室的科研提供可靠檢測(cè)工具、檢測(cè)方法學(xué)保證13病毒性腹瀉診斷臨床意義

目前最常見(jiàn)的引起腹瀉的病毒有4種，其中以輪狀病毒、腸道腺病毒最為常見(jiàn)。病毒性腹瀉中40%-60%由輪狀病毒感染引起，其次是腸道腺病毒、諾如病毒、星狀病毒感染[6]。[6]《病毒性腹瀉的研究進(jìn)展》雷炳鈞，華西醫(yī)科大學(xué)；《臨床內(nèi)科雜志》1998年第4期；14病毒性腹瀉診斷臨床意義輪狀病毒最常見(jiàn)的致腹瀉病毒，常溫穩(wěn)定，可在環(huán)境表面存活數(shù)日，糞便中可存活數(shù)月，55攝氏度30分鐘滅活。糞口途徑傳染秋冬季高發(fā)起病急，潛伏期1~2天，癥狀期3~8天發(fā)熱嘔吐腹痛，噴射性水樣腹瀉，易導(dǎo)致脫水病程自限，多數(shù)預(yù)后良好，嬰幼兒較重，少數(shù)脫水死亡首次感染后可減少再次感染幾率，并減輕再次感染的嚴(yán)重性，各型無(wú)交叉免疫，可多次感染15病毒性腹瀉診斷臨床意義腸道腺病毒對(duì)溫度敏感，對(duì)含氯劑和脂溶劑不敏感，抗紫外線糞口途徑傳染終年可發(fā)病，冬春多發(fā)病程長(zhǎng)，多超過(guò)一周腹瀉嘔吐，可多器官受累，心肌炎，CNS（中樞神經(jīng)系統(tǒng)）病程自限，預(yù)后良好，腸道腺病毒是腸套疊的重要原因，40%的腸套疊與腸道腺病毒有關(guān)感染后可獲得持久免疫力，很少二次感染16病毒性腹瀉診斷臨床意義諾如病毒糞口途徑傳染，水源、食物污染易導(dǎo)致爆發(fā)流行潛伏期1~2天，癥狀持續(xù)1~2天惡心嘔吐腹部痙攣性腹瀉，普遍感到病情嚴(yán)重，一日內(nèi)多次劇烈嘔吐預(yù)后良好抗體沒(méi)有免疫作用，可反復(fù)感染17病毒性腹瀉診斷臨床意義星狀病毒冬季多發(fā)潛伏期3~4天，癥狀期3~5天癥狀輕，少見(jiàn)脫水與遷延性腹瀉有關(guān)18Part2臨床常見(jiàn)的病原學(xué)檢測(cè)方法臨床常見(jiàn)的病原學(xué)檢測(cè)方法19方法學(xué)特點(diǎn)病毒分離培養(yǎng)技術(shù)特異性強(qiáng)，但檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)，技術(shù)要求高，敏感性不強(qiáng)。電鏡檢測(cè)結(jié)果直觀、準(zhǔn)確，但設(shè)備昂貴，專(zhuān)業(yè)性強(qiáng)，人員要求高，病毒滴度要求高不符合常規(guī)臨床檢測(cè)需求。免疫學(xué)方法靈敏度高、特異性強(qiáng)，應(yīng)用面廣且易于普及，適合大樣本量篩查,試驗(yàn)結(jié)果顯而易見(jiàn)，試驗(yàn)條個(gè)體要求低，但自動(dòng)化水平不高。分子生物學(xué)方法靈敏度、準(zhǔn)確度高，但檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)，設(shè)備和操作人員專(zhuān)業(yè)要求高，成本昂貴。免疫學(xué)方法，因檢測(cè)準(zhǔn)確、速度快、應(yīng)用面廣得到臨床門(mén)診的青睞！臨床常見(jiàn)的病原學(xué)檢測(cè)方法免疫學(xué)方法分很多種，臨床常用檢測(cè)方法包括：酶聯(lián)免疫法（ELISA）、膠體金法、免疫熒光法等。臨床常見(jiàn)的病原學(xué)檢測(cè)方法21臨床常見(jiàn)的病原學(xué)檢測(cè)方法酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法技術(shù)特點(diǎn)：用酶來(lái)標(biāo)記特定的抗體，在檢測(cè)過(guò)程中，如果樣本中有相應(yīng)的病毒抗原，帶有酶標(biāo)記的抗體就會(huì)與其結(jié)合，利用酶的催化作用，就可以檢測(cè)出病毒。優(yōu)點(diǎn)：靈敏度高，檢測(cè)準(zhǔn)確缺點(diǎn)：操作相對(duì)復(fù)雜，一種試劑只能檢測(cè)一種病毒，檢測(cè)時(shí)間較長(zhǎng)，尤其是對(duì)腹瀉病毒的檢測(cè)具有很大的缺點(diǎn)。因?yàn)?，酶?lián)免疫檢測(cè)試劑一般一個(gè)檢測(cè)板上有96個(gè)試劑位，而這96個(gè)試劑位不能獨(dú)立使用，醫(yī)院為了降低檢測(cè)成本，一般都會(huì)積累樣本到一定數(shù)量才進(jìn)行項(xiàng)目檢測(cè)，而對(duì)于腹瀉病人來(lái)說(shuō)，需要快速進(jìn)行檢測(cè)，因此，該方法不能夠適應(yīng)臨床對(duì)腹瀉病毒快速檢測(cè)的要求。22臨床常見(jiàn)的病原學(xué)檢測(cè)方法膠體金方法技術(shù)特點(diǎn)：基于免疫金染色法技術(shù)開(kāi)發(fā)的試劑盒技術(shù)特點(diǎn)是用特定直徑的膠體金顆粒來(lái)標(biāo)記病毒抗體。在檢測(cè)過(guò)程中分，如果樣本中有病毒，就會(huì)與金標(biāo)記的抗體進(jìn)行結(jié)合，使其分子大小和分子量發(fā)生改變，同時(shí)顏色也會(huì)發(fā)生相應(yīng)的變化，用肉眼觀察顏色來(lái)判斷病毒類(lèi)型。優(yōu)點(diǎn)：簡(jiǎn)便，迅速缺點(diǎn)：膠體金的技術(shù)缺點(diǎn)是自動(dòng)化水平低，靈敏度相對(duì)較低，主要是肉眼判別檢測(cè)結(jié)果，因此檢測(cè)結(jié)果容易受到人為因素干擾，特別是低濃度樣本更容易產(chǎn)生誤判，同時(shí)結(jié)果穩(wěn)定時(shí)間過(guò)短，假陽(yáng)性率高。23臨床常見(jiàn)的病原學(xué)檢測(cè)方法免疫熒光法技術(shù)特點(diǎn)：

利用免疫層析技術(shù)，采用雙抗體夾心法檢測(cè)腹瀉病毒。當(dāng)待測(cè)樣本加入測(cè)試卡后，待測(cè)樣本中的病毒抗原與熒光標(biāo)記的抗體形成反應(yīng)復(fù)合物，在層析作用下，反應(yīng)復(fù)合物沿硝酸纖維膜向前移動(dòng)，分別被硝酸纖維膜檢測(cè)區(qū)上預(yù)先包被病毒克隆抗體捕獲，在檢測(cè)區(qū)上形成反應(yīng)帶。使用熒光免疫分析儀檢測(cè)反應(yīng)線上的熒光值，當(dāng)熒光閾值等于或高于檢出限時(shí)，顯示為陽(yáng)性，當(dāng)熒光閾值低于檢出限時(shí)顯示為陰性，從而實(shí)現(xiàn)檢測(cè)腸道病毒的目的。優(yōu)點(diǎn)：半自動(dòng)化，簡(jiǎn)單、快速、多病毒聯(lián)合檢測(cè)；檢測(cè)結(jié)果半定量，避免人為肉眼主觀誤讀，穩(wěn)定時(shí)間比膠體金多一倍；方便連接醫(yī)院LIS等系統(tǒng)。24臨床常見(jiàn)的病原學(xué)檢測(cè)方法方法學(xué)免疫熒光法膠體金法酶免法檢測(cè)結(jié)果半定量（儀器）定性（肉眼）定量檢測(cè)時(shí)間10-15分鐘15-20分鐘2-3小時(shí)結(jié)果有效時(shí)段60min30min20min內(nèi)靈敏度高低高檢測(cè)成本低低低自動(dòng)化水平

高低低與LIS\HIS信息化可以不可以不可以檢測(cè)隨機(jī)性單個(gè)監(jiān)測(cè)單個(gè)監(jiān)測(cè)批量檢測(cè)臨床常見(jiàn)的病原學(xué)檢測(cè)方法綜合各種因素考慮，免疫熒光法是目前臨床快速診斷最佳技術(shù)。原因：多病毒聯(lián)合檢測(cè)、性價(jià)比最高，病因?qū)W覆蓋面最廣，結(jié)果準(zhǔn)確，客觀，避免肉眼主觀判讀，可以連接醫(yī)院信息系統(tǒng)，極大方便醫(yī)院信息共享與傳遞。26Part3博暉免疫熒光分析系統(tǒng)簡(jiǎn)介產(chǎn)品簡(jiǎn)介產(chǎn)品特點(diǎn)27產(chǎn)品簡(jiǎn)介博暉免疫熒光分析系統(tǒng)組成28檢測(cè)原理---雙抗體夾心法檢測(cè)原理-------免疫熒光法（雙抗體夾心法）產(chǎn)品簡(jiǎn)介【檢驗(yàn)過(guò)程】用樣本取樣勺（在樣本稀釋液瓶中）取適量糞便樣本放入樣本管中，震蕩混勻，靜置1分