家庭園藝組織培養(yǎng)技術(shù)

家庭園藝組織培養(yǎng)技術(shù)組織培養(yǎng)的優(yōu)點繁殖迅速（10×），對采集的植物損傷少。不必擔心真菌、害蟲等等?？砷L期保存植物（放在冰箱冷凍室）。對園藝品種可產(chǎn)生一模一樣的克隆。

組織培養(yǎng)技術(shù)的形成和發(fā)展一、植物離體培養(yǎng)的淵源及早期的實踐19世紀30年代德國植物學家施來登和動物學家施旺提出“細胞學說”（Celltheory）其主要觀點：細胞是生物體的基本結(jié)構(gòu)單位，由它構(gòu)成整個生物個體；同時認為植物細胞又是在生理上、發(fā)育上具有潛在的全能性功能單位。1902年德國著名植物學家Haberlandt根據(jù)細胞學說提出高等植物的器官和組織可以不斷分割，直至單個細胞的觀點，這種單個細胞是具有潛在的全能性功能單位。為證實該觀點，他首次進行了高等植物的細胞培養(yǎng)實驗，但沒成功。二、植物離體培養(yǎng)基本技術(shù)體系的形成1934年美國White用番茄根尖首次建立了活躍生長的無性繁殖系。1937年White發(fā)現(xiàn)B族維生素和IAA對離體根的生長有重要作用。1938年生長素發(fā)現(xiàn)者Went提出“器官形成的特殊物質(zhì)”假說，對器官形成起控制作用。1941年VanOverbeek發(fā)現(xiàn)椰乳可促進植物胚的發(fā)育。1943年White發(fā)表《植物組織培養(yǎng)手冊》。1944年美國Skoop用煙草愈傷組織研究器官分化發(fā)現(xiàn)生長素對根形成有利，但抑制芽的生成。1948年Skoop和崔徵發(fā)現(xiàn)腺嘌呤或腺苷可解除生長素對芽的抑制并誘導煙草莖段形成芽。1955年Miller和Skoop在鯡魚精子的提取物中發(fā)現(xiàn)激動素，對芽的促進作用較腺嘌呤強3萬倍。1957年Skoop發(fā)現(xiàn)生長素和激動素的不同配比對植物生長和分化作用。1958年Steward利用胡蘿卜懸浮培養(yǎng)物誘導胚狀體并成苗。三、目前發(fā)展狀況原生質(zhì)體培養(yǎng)技術(shù)花藥培養(yǎng)技術(shù)植物轉(zhuǎn)基因技術(shù)植物離體快繁產(chǎn)業(yè)

蕓香

OrganogenesiswithR.graveolens蕓香

Fig.1.Masspropagationofmultipleshoot

culturesof

Artemisiaannua

青蒿Fig.2.Scale-upofCatharanthusroseus

長春花cell

culturesina20litreair

Aechmeafasciata(X400)Tobacco(X400)TiPlant組織培養(yǎng)技術(shù)原理細胞全能性分生組織激素的調(diào)節(jié)作用主要用于組織培養(yǎng)的激素有：1、生長素2、細胞分裂素生長素和細胞分裂素不同比值決定外植體的分化方向：1、高生長素低細胞分裂素－－有利于愈傷組織和根的形成2、低生長素高細胞分裂素－－有利于芽的增殖家庭組織培養(yǎng)所需設備一個消過毒的，空氣不流通的箱柜用于接種植株。將魚缸豎放可作為一理想的接種箱。任何尺寸為50cm長、40cm高、40cm深的有機玻璃或玻璃容器都能輕易地將它做成接種箱。HolmesHAP-240HEPAaircleaningunit一個高壓鍋用于培養(yǎng)基、儀器、水和紙巾等的消毒

若干玻璃罐（嬰兒食品罐最好）和那些能忍受高壓鍋熱度的帶蓋的食品罐是理想的容器。解剖刀和鑷子紙巾甚至A4復印紙，剪成一定大小，能被滅菌并用于無菌切割的平臺。有時用醬油碟子也是一個不錯的選擇。

一個酒精燈用于灼燒器具（避免使用甲醇，有毒！）裝有70％酒精的手持噴槍用于噴灑接種箱和其他表面。含氯稀釋溶液，如家用漂白粉稀釋液，用于植物材料的表面消毒。任何皮膚消毒劑如70％酒精?；九囵B(yǎng)基：1、兩杯雨水2、1/4杯糖3、肥料原料：1/2湯勺全價10:10:10(N.P.K.)水溶液肥料定容1升：此配方取一杯原料。4、肌糖片（500mg）：1/2片5、含維生素B1的維生素片：1/2片－任何多維生素片都可用。6、瓊脂片：4湯勺。特殊添加劑：對于制備增殖和生根培養(yǎng)基需加入1/2杯椰汁和1/2杯麥芽。用1/2杯青番茄汁或1/2杯新鮮桔子榨汁代替椰汁可能產(chǎn)生不同反應。有條件的話可直接購買植物生長調(diào)節(jié)劑。家庭組織培養(yǎng)步驟配培養(yǎng)基外植體的消毒接種繼代生根移栽培養(yǎng)基的配制：將各成分混合到有蓋的深鍋內(nèi)，逐漸煮沸直至瓊脂溶解，加熱時需不斷攪拌以防瓊脂粘鍋并燒焦。利用精密pH試紙確認培養(yǎng)基的pH總在5和6之間。如果需要調(diào)整pH，則用酸如檸檬酸或堿如小蘇打。用長柄勺分裝到空瓶內(nèi)，培養(yǎng)基約2cm厚。蓋上蓋子并放入高壓鍋滅菌。壓力到達后（以壓力筏開始放汽為準）持續(xù)15分鐘。器械滅菌和其他：鑷子和解剖刀可被包在鋁制飯盒內(nèi)，并在壓力鍋煮沸15分鐘達到滅菌效果。同樣，它們也可采取用含氯溶液沖洗或在酒精中沾后灼燒的方法滅菌。無菌水是用以清洗植物材料和濕潤用于工作的清潔平臺――無菌紙巾。操作可在紙巾上完成。當操作完成后，可丟棄該紙巾并從滅菌袋中取一新紙巾。無菌水在玻璃罐中滅菌。將紙放入紙袋并將之放在高于水平面處的高壓鍋內(nèi)滅菌。袋子在滅菌后變得很濕，需放入80度的烤箱烘干。用前不要打開袋子。植物材料的滅菌所有的材料都可在稀釋的家用漂白粉中消毒，（1/4杯漂白粉精片（碾碎）＋3/4杯水＋1滴洗潔精――洗潔精作為表面活化劑）。將植物材料投入含有漂白粉的罐子里10－20分鐘。不時晃動它。最后倒掉含氯溶液，這一過程將殺死細菌、真菌并且有時會殺死部分植株如外部芽和柔嫩的苗。用無菌水沖洗材料兩次。接種箱的操作為保證你的培養(yǎng)是無菌的。需按以下幾點操作：1、將你的頭發(fā)梳理到腦后，卷高你的袖口并摘去你的手表和其他首飾。用皮膚清潔劑徹底沖洗你的雙手。如果對任一消毒劑過敏，用水洗手，戴手術(shù)手套。2、用70%酒精噴灑接種箱內(nèi)部，用無菌織布擦干。3、將所有你需要的東西收集并有條理地擺放在接種箱內(nèi)或邊上。4、在接種箱內(nèi)，用鑷子（不要用你的手接觸植物材料）從罐子中取出無菌的切段。同樣，你的器械在每次操作后要在酒精中沾過，并用火焰灼燒消毒。帶幾張葉片，2－3cm的小塊可以切開后接種到瓊脂培養(yǎng)基上。如果葉片太大，去掉它們或是將它們切成1/3-1/2大小。每只容器中接入一個苗（在這個階段中為防止污染擴大，一容器一苗是重要的）。然后蓋上蓋子。將罐子儲藏于室溫，避免陽光直射。培養(yǎng)苗一個月。這期間將發(fā)生三件事：一些苗被含氯溶液或被其本身產(chǎn)生的毒素殺死；一些被真菌和細菌污染；再是新苗從沒污染容器中的切段軸部迅速生長。將死的和污染的培養(yǎng)物棄去。苗的增殖前期得來的苗可能會在之后的4個星期內(nèi)長長。它們需要被轉(zhuǎn)移到含有椰子汁的培養(yǎng)基內(nèi)（椰子汁中含有一些能使植物切段長出許多芽的生長促進成分）以便進一步增殖。1、象前面一樣重復對培養(yǎng)基容器和接種箱的準備和滅菌步驟。在此之前，你的手也需消毒。2、將長有芽的容器放到接種箱的一邊，另一邊放滅了菌的培養(yǎng)基。3、象以前一樣用無菌的紙巾、解剖刀和鑷子。4、用鑷子從容器中夾取一切段，并在用無菌水濕潤的無菌紙巾上切割。重要的是在濕潤的紙巾上做所有的操作，因為這些植物體非常軟且易變干。分離的苗被轉(zhuǎn)移到新的容器中。在這一階段，每個容器內(nèi)可接種5枚切段。5、和前一階段一樣進行培養(yǎng)。擴增階段可每4個星期重復一次，直到得到足夠的苗。按一般規(guī)律，每4個星期苗增加3－4倍。這兒需注意的重要一點是這一階段期間高污染率意味著你正因糟糕的衛(wèi)生狀況引起空氣傳播的污染。根的形成一旦你有了足夠的苗，讓它們長到至少2cm再進入生根階段。將這些苗轉(zhuǎn)到含有椰子汁和麥芽的生根培養(yǎng)基內(nèi)。每個容器內(nèi)接種5個以內(nèi)的苗。將這些容器存放到從前放置的地方。根在2－4周內(nèi)形成。轉(zhuǎn)移到混合盆栽（煉苗）這一階段的操作在開放的工作臺上進行。生根的培養(yǎng)物按以下步驟處理：1、將不含任何肥料和水的合適的盆栽基質(zhì)裝入盆中。要能排水。2、用鑷子將生根苗從瓊脂培養(yǎng)基中取出。3、用微溫的水將根上的瓊脂沖洗掉。4、在基質(zhì)中間挖一洞，將根輕輕地插入洞內(nèi)。5、用噴霧水槍噴撒葉片。將這些盆栽植物置于一較大的塑料薄膜下，薄膜外再用玻璃罩上以避免陽光直射。逐步移去玻璃罩，但要注意是否有變干的跡象，如若需要，則用噴霧水槍噴撒葉片。6、當根長勢良好且植物也適應環(huán)境（需大約4－6周），這些植物可與其他植物一樣接受施肥和其他處理。同時逐步提高光強也是明智之舉。幾個組培例子紫羅蘭的組織培養(yǎng)源于種子的組織培養(yǎng)備好培養(yǎng)基，將無菌箱內(nèi)所有的瓶表面以及桌表面用70％酒精擦洗，并用70％酒精噴霧。將鑷子、解剖刀置于含有70％酒精的清潔瓶內(nèi)。葉片浸于該液1分鐘作表面消毒。將葉片置于10％漂白粉水溶液中（1/4杯漂白粉+2?杯水+幾滴洗潔精）10分鐘，并不時用鑷子攪動。如果葉片浮在水上，則需用鑷子夾入水底。10分鐘后，將漂白粉水溶液中的葉片轉(zhuǎn)移到盛有無菌水的瓶子內(nèi)，一次放入一片。將葉片轉(zhuǎn)移到消毒過的盤上準備切割。切去葉的邊緣，再將剩下的葉片切成2－4片，并分別將它們接入紫羅蘭培養(yǎng)基上。經(jīng)消毒的非洲紫羅蘭葉片切成0.5-1英寸寬，接種與新鮮的培養(yǎng)基上。3周后葉片周圍及表面腫脹，并有芽生成。芽伸長成苗。有時葉片表面都被誘導的芽所包圍。接種5－6周后將接種的葉片1分2，并轉(zhuǎn)入無激素的培養(yǎng)基中以利于