多糖各種提取方法

一、植物多糖的提取1溶劑提取法1．1水提法水對植物組織的穿透力強，提取效率高，在生產(chǎn)上使用安全、經(jīng)濟。用水作溶劑來提取多糖時，可以用熱水浸煮提取，也可以用冷水浸提。一般植物多糖提取采用熱水浸提法，該法所得多糖提取液可直接或離心除去小溶物；或者利用多糖不溶于高濃度乙醇的性質(zhì)，沉淀提純多糖；但由于不同性質(zhì)或不同相對分子質(zhì)量的多糖沉淀所需乙醇濃度不同，它也可以用于樣品中不同多糖組分的分級分離；還可按多糖不同性質(zhì)在粗分階段利用混合溶劑提取法對植物中不同的多糖進行分離；其中，以乙醇沉淀最為普遍。但以根莖為主的植物體,細胞壁多糖含量高,熱水直接提取率不高。此時為破壞細胞壁,增加多糖的溶出，有兩種處理方法:一為酶解,二為弱堿溶解。1．2酸堿提法有些多糖適合用稀酸提取，并且能得到更高的提取率。但酸提法只在一些特定的植物多糖提取中占有優(yōu)勢，目前報道的并不多。而且即使有優(yōu)勢，在操作上還應(yīng)嚴(yán)格控制酸度，因為酸性條件下可能引起多糖中糖苷鍵的斷裂。有些多糖在堿液中有更高的提取率，尤其是提取含有糖醛酸的多糖及酸性多糖。采用的稀堿多位為0．1mol／L氫氧化鈉、氫氧化鉀，為防止多糖降解，常通以氮氣或加入硼氫化鈉或硼氫化鉀。同樣，堿提優(yōu)勢也是因多糖類的不同而異。與酸提類似，堿提中堿的濃度也應(yīng)得到有效控制，因為有些多糖在堿性較強時會水解。另外，稀酸、稀堿提取液應(yīng)迅速中和或迅速透析，濃縮與醇析而獲得多糖沉淀。1．4生物酶提取法酶技術(shù)是近年來廣泛應(yīng)用到有效成份提取中的一項生物技術(shù)，在多糖的提取過程中，使用酶可降低提取條件，在比較溫和的條件中分解植物組織，加速多糖的釋放或提取。此外，使用酶還可分解提取液中淀粉、果膠、蛋白質(zhì)等的產(chǎn)物，常用的酶有蛋白酶，纖維素酶，果膠酶等。1．5超聲提取法超聲波是一種高頻率的機械波，其主要原理是利用超聲波產(chǎn)生的“空化作用”對細胞膜的破壞，有利用植物有效成分的釋放，而且超聲波能形成強大的沖擊波或高速射流，有效地減小、消除與水相之間的阻滯層，加大了傳質(zhì)效率，有助于溶質(zhì)的擴散。另外，超聲波的熱效應(yīng)使水溫基本在57℃，對原料有水浴作用。超聲波提取與傳統(tǒng)的提取方法相比，有提取效率高、時間短、耗能低等優(yōu)點。超聲提取的影響因素有：超聲時間、超聲頻率（一般低頻中提取效率高，但也有例外）、料液比和溫度等。1．6微波提取微波是頻率介于300MHz和300GHz之間的非電離電磁波，微波提取的原理是微射線輻射于溶劑并透過細胞壁到達細胞內(nèi)部，由于溶劑及細胞液吸收微波能細胞內(nèi)部溫度升高，壓力增大，當(dāng)壓力超過細胞壁的承受能力時，細胞壁破裂，位于細胞內(nèi)部的有效成份從細胞中釋放出來，傳遞轉(zhuǎn)移到溶劑周圍被溶劑溶解。微波技術(shù)應(yīng)用于植物細胞破壁，有效地提高了收率。具有穿透力強、選擇性高、加熱效率高等特點。影響微波浸提的主要因素為浸提時間、樣品和提取溶劑的含水量，溶劑的介電常數(shù)和電導(dǎo)率（介電常數(shù)和電導(dǎo)率的溶劑對微波的吸收較好）、微波功率等。但是由于微波泄漏對操作者影響很大，因而對設(shè)備的要求較高，這對微波的研究及應(yīng)用帶來了一定的困難。二、植物多糖的分離純化在多糖提取物中，常會有無機鹽、蛋白質(zhì)、色素及小分子物質(zhì)等雜質(zhì)，必須分別除去．一般是先脫除非多糖組分，再對多糖組分進行分級．2．1除蛋白除蛋白質(zhì)時一般選擇能使蛋白質(zhì)沉淀而不使多糖沉淀的試劑來處理，如酚、三氯乙酸、鞣酸等。但必須處理時間短，溫度低，避免多糖降解。Sevage法（氯仿：戊醇/丁醇=4：1）和三氟三氯乙烷法在避免降解上有較好效果但要達到除盡游離蛋白質(zhì)的目的仍需反復(fù)處理。如能加入蛋白質(zhì)水解酶，使蛋白質(zhì)大分子進行一定程度的降解，再用Sevage法處理，一般效果更好。為了避免使用有機溶劑也可采用反復(fù)凍融的方法除蛋白，將多糖液濃縮后，一20℃室溫反復(fù)凍融7～8次，離心除去蛋白質(zhì)。另外，蛋白質(zhì)在等電點時溶解度最小，用氫氧化鈣飽和液調(diào)pH10～pH11可除去偏堿性的蛋白質(zhì)，然后再用硫酸調(diào)pH5～pH6，可除去偏酸性的蛋白質(zhì)。凍融和等電點沉淀除蛋白質(zhì)操作簡單，但多糖液里往往有低濃度的蛋白質(zhì)殘留，應(yīng)與其它方法